tlc基本原理-閱讀頁(yè)
2024-09-10 08:59本頁(yè)面
【正文】 顯，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開條件，上下午的 Rf 截然不同 。在柱層析時(shí)所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時(shí)常稱展開劑。如果對(duì)某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。溶解樣品的 溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。這種極性的增大是一個(gè)十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個(gè)成分逐個(gè)被洗脫。溶劑的洗脫能力，有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)（ε）來表示。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。 被分離物質(zhì)的性質(zhì) 被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸 附層析中的三個(gè)要素，彼此緊密相連。對(duì)極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強(qiáng)?？傊灰獌蓚€(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級(jí)）。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含 5％氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。 （二）簿層層析：薄層層析是一種簡(jiǎn)便、快速、微量的層析方法。其原理與柱層析基本相似。 2．吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過高，以Ⅱ～Ⅲ級(jí)為宜。 3．展開劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時(shí)（如Ⅱ或Ⅲ 級(jí)），對(duì)多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑的選擇。但在實(shí)際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對(duì)展開劑的極性予以調(diào)整。 實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管。在制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變，過高則會(huì)改變展開劑組成；對(duì)樣品溶解度過高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。HPLC 樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑 1mm 點(diǎn)間距 5mm 底邊距 1cm. 展開劑的選擇 TLC 與 HPLC 相比，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性，流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的 Rf 值位于 － 之間 并達(dá)到較好的分離，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合 Rf 值，適合的 Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成，這種方法較為 直觀，也較簡(jiǎn)單。
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