【正文】 P3 、 VP4 等屬此類抗原。 核蛋白抗原 (NP抗原 )。 依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異 ， Ig可分為 IgG、 IgM、 IgA、 IgE和 1gD五類 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 18 抗體的本質(zhì)是 Ig，它是機(jī)體對(duì)抗原物質(zhì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要產(chǎn)物，具有各種免疫功能。 二 、 Ig的分子結(jié)構(gòu) IgG、 IgE、 血清型 IgA， IgD均是以單體分子形式存在 ， IgM是以五個(gè)單體分子構(gòu)成的五聚體 ， 分泌型IgA是以二個(gè)單體構(gòu)成的二聚體 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 20 重鏈 又稱 H鏈 ， 兩條重鏈之間由一對(duì)或一對(duì)以上的二硫鍵互相連接 。 輕鏈 又稱 L鏈 ， 兩條相同的輕鏈其羧基端 (C端 )靠二硫鍵分別與兩條重鏈連接 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 21 抗原結(jié)合部位 Ig的 重鏈的可變區(qū) (VH)與 輕鏈的可變區(qū) (VL) 相對(duì)應(yīng) ， 構(gòu)成有結(jié)合特異抗原決定簇功能的區(qū)域?yàn)榭贵w分子的 抗原結(jié)合部位 。 Ig每條重鏈有 四個(gè) 功能區(qū) ， 分別稱為 VH、 CHCH CH3； IgM和 IgE有五個(gè)功能區(qū) ， 即多了一個(gè) CH4。 此外 ， 在兩條重鏈之間二硫鍵連接處附近為 Ig的 絞鏈區(qū) 。 其中有兩個(gè)相同的片段 ， 可與抗原特異性結(jié)合 ， 稱為 抗原結(jié)合片段 （ Fab） ；另一個(gè)片段可形成蛋白結(jié)晶 ， 稱為 Fc片段 (Fc) 。 Fab片段的生物學(xué)活性 抗體結(jié)合抗原的活性由Fab所呈現(xiàn) ， 由 VH和 VL所組成的抗原結(jié)合部位 ，可結(jié)合抗原 ， 是 決定抗體分子特異性的部位 。 補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn) 位于 CH2上； Fc受體結(jié)合位點(diǎn) 在 CH3上 。 用 Ig免疫異種動(dòng)物產(chǎn)生的抗抗體 (第二抗體 )， 可與相應(yīng) Ig發(fā)生抗原抗體反應(yīng) 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 26 連接鏈 又稱 J 鏈 ， 在 Ig中 ， IgM是五聚體 ， 分泌型的 IgA是二聚體 ， 這些單體之間就是依靠 J 鏈 連接起來(lái)的 。 分泌成分 (SC) 又稱 分泌片 ， 是分泌型 IgA所特有的一種特殊結(jié)構(gòu) ， 為 多肽鏈 (含 6％ 糖成分 )。 SC可防止 IgA在消化道內(nèi)為蛋白酶所降解 ， 從而使 IgA能發(fā)揮免疫作用 。糖類在 Ig的分泌過(guò)程中起著重要作用 ， 并可使 Ig分子易溶 和具有 防止其分解 的作用 。 分類分型 Ig類的區(qū)分是依據(jù)其重鏈 C區(qū)的理化特性及抗原性 的差異 ， Ig可分為IgG、 IgM、 IgA、IgE和 IgD 5大類及其亞型 。 同種型 指在 同一種動(dòng)物所有個(gè)體的不同類型的 Ig共同具有的抗原特異性 ， 同種間不表現(xiàn)出抗原性 ，只是在異種動(dòng)物之間才表現(xiàn)出抗原性 。 同種異型 指 Ig在 同一種動(dòng)物不同個(gè)體之間呈現(xiàn)出的抗原性 。 同種異型是 Ig穩(wěn)定的遺傳標(biāo)志 ， 可用于親子鑒定 。 獨(dú)特位 獨(dú)特型由 Ig可變區(qū)若干個(gè)抗原決定簇所組成 ， 它們被稱為 獨(dú)特位 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 30 四 、 各類 Ig的主要特性與功能 1. IgG 是人和動(dòng)物 血清中含量最高 的 Ig (表 84102)， 占血清 Ig總量的 75％ 80％ 。 產(chǎn)生與分布 IgG主要由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞產(chǎn)生 ， 主要在 血漿 中 （ 占 75％ 80％ ） ， 其余存在于組織液 和 淋巴液 中 。 IgG的功能 IgG可發(fā)揮 抗菌 、 抗病毒 、 抗毒素以及抗腫瘤 等免疫學(xué)活性 ， 能 調(diào)理 、 凝集和沉淀 抗原 ，與抗原結(jié)合后 能結(jié)合補(bǔ)體 。 產(chǎn)生與分布 IgM主要由脾臟和淋巴結(jié)中 B細(xì)胞產(chǎn)生 ， 只分布于 血液 中 ， 僅占血清 lg的 10％ 左右 。 IgM的功能 早期抗感染免疫 ， 具有 抗菌 、 抗病毒 、 中和毒素 等免疫活性 。 單體存在于血清中 ， 稱為 血清型 IgA， 約占血清 Ig的 10％20％ ； 二聚體為分泌型 IgA。 主要存在于各種分泌液中 。 在傳染病預(yù)防中 ， 經(jīng) 滴鼻 、 點(diǎn)眼 、 飲水及噴霧 途徑免疫 ， 均可產(chǎn)生分泌型 IgA而建立相應(yīng)的粘膜免疫力 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 33 IgE的產(chǎn)生部位與分泌型 IgA相似 ， 在血清中的含量甚微 。 IgE在抗寄生蟲 、 某些真菌感染方面也有重要作用 。 IgD分子量為 1720萬(wàn) 。 此外 IgD與免疫記憶與某些過(guò)敏反應(yīng)有關(guān) 。 細(xì)菌病毒抗原 ， 均是由多種抗原成分組成 ， 即使純蛋白質(zhì)抗原分子也含有 多種抗原表位 ， 因此進(jìn)入機(jī)體后可 激活許多淋巴細(xì)胞克隆 ， 機(jī)體可產(chǎn)生 針對(duì)各種抗原成分或抗原表位的抗體 ， 由此獲得的抗血清是一種多克隆的 混合抗體 ， 具有高度的 異質(zhì)性 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 35 2. 單克隆抗體 (McAb) 由一個(gè) B細(xì)胞分化增殖的子代細(xì)胞 (漿細(xì)胞 )產(chǎn)生的 針對(duì)單一抗原決定簇的抗體 ， 稱為單克隆抗體 。 McAb技術(shù)原理 用人工的方法將 產(chǎn)生特異性抗體的 B細(xì)胞與同系骨髓瘤細(xì)胞融合 ， 形成 B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 ， 這種雜交瘤細(xì)胞 既具有骨髓瘤細(xì)胞無(wú)限繁殖特性 ， 又具有 B細(xì)胞分泌特異性抗體的能力 ，由 克隆化的 B細(xì)胞雜交瘤所產(chǎn)生的抗體即為單克隆抗體 。 McAb優(yōu)點(diǎn) 與多克隆抗體比較 ， McAb具有無(wú)可比擬的優(yōu)越性 ， 具有 高特異性 、 高純度 、 均質(zhì)性好 、 親和力不變 、 重復(fù)性強(qiáng) 、 效價(jià)高 、 成本低 、并可大量生產(chǎn) 等優(yōu)點(diǎn) 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 37 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 38 (1) B細(xì)胞的制各 可用提純的抗原免疫 Balb/c或其他品系小鼠 ， 免疫 23次間隔 24周 ， 最后一次免疫后 34d， 取小鼠脾臟 ， 制成 103/ml的脾細(xì)胞懸液 ，即為親本的 B細(xì)胞 。 (3) 飼養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備 常用 小鼠巨噬細(xì)胞或胸腺細(xì)胞 作為飼養(yǎng)細(xì)胞 。 在該培養(yǎng)基中 ， 末融合的骨髓瘤細(xì)胞不能生長(zhǎng) ， 因它不能利用旁路途徑合成 DNA， 內(nèi)源性的合成又受到氨基喋吟的阻斷； 至于未融合的脾細(xì)胞則在 2周內(nèi)自然死亡 ， 所以只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng) 。 靜置 90s， 逐漸加入 HAT培養(yǎng)基 ， 分于加有飼養(yǎng)細(xì)胞的 96孔培養(yǎng)板孔中 ， 置 5％ 10％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。 (6) 檢測(cè)抗體 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)后 ， 應(yīng)用敏感的血清學(xué)方法檢測(cè)各孔中的抗體 。 通過(guò)檢測(cè)篩選出抗體陽(yáng)性孔 。 一般需反復(fù)克隆35次方能使雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 42 (8) 單克隆抗體的生產(chǎn) 獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞克隆后 ， 即可用于生產(chǎn)單克隆抗體 。 將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行大量細(xì)胞培養(yǎng) 后 ， 收集培養(yǎng)液分離 獲得大量的單克隆抗體；可利用微球技術(shù)制各單克隆抗體 。 六 、 抗體的分類 1. 根據(jù)抗原的來(lái)源 異種抗體 由 異種抗原免疫 產(chǎn)生的抗體均稱為異種抗體 ， 如各種微生物抗體 、 對(duì)異種蛋白和細(xì)胞的抗體 ， 因此大多數(shù)抗體均屬于此類 。 自身抗體 針對(duì)自身抗原所產(chǎn)生的抗體 ， 如抗核抗體 、 抗自身 Ig的抗體 。 免疫抗體 指自然感染 ， 人工免疫動(dòng)物所產(chǎn)生的抗體 。 沉淀素、凝集素、溶解素、調(diào)理素、補(bǔ)體結(jié)合抗體、中和抗體、保護(hù)性抗體等。 在免疫學(xué)發(fā)展的不同時(shí)期 ， 不同的學(xué)者們提出了不同的關(guān)于抗體產(chǎn)生的學(xué)說(shuō) 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 46 一 、 克隆選擇學(xué)說(shuō)的基本思想 克隆選擇學(xué)說(shuō)認(rèn)為 抗原進(jìn)入機(jī)體選擇 的不是所謂存在于體內(nèi)的自然抗體 ， 而是事先存在于 淋巴細(xì)胞膜表面的抗原受體 ， 即后來(lái)證明是膜表面免疫球蛋白(Smlg)。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 47 二 、 克隆選擇學(xué)說(shuō)對(duì)幾個(gè)問(wèn)題的解釋 (一 )對(duì)抗體產(chǎn)生多樣性的解釋 動(dòng)物出生以后 ，機(jī)體便已具有產(chǎn)生各種各樣抗體的免疫活性細(xì)胞 ，體內(nèi)有眾多細(xì)胞克隆可足夠抗原選擇 。 因此 ， 克隆選擇學(xué)說(shuō)從細(xì)胞水平上解釋了抗體的多樣性 。 相應(yīng)的細(xì)胞克隆一旦被選出 ， 即使無(wú)抗原存在 ， 機(jī)體也能繼續(xù)產(chǎn)生抗體 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 48 (三 )對(duì)免疫記憶現(xiàn)象的解釋 細(xì)胞克隆在分化過(guò)程中 ， 一部分淋巴細(xì)胞停留在中間階段 ， 于再次同相應(yīng)抗原接觸時(shí) ， 立刻可增殖而產(chǎn)生抗體 ， 呈現(xiàn)免疫記憶現(xiàn)象 。 在胚胎時(shí)期 ， 人為地引進(jìn)異體抗原 ， 也能消除與該抗原相對(duì)應(yīng)的淋巴細(xì)胞克隆 ， 動(dòng)物出生后 ， 對(duì)此種抗原即不產(chǎn)生免疫反應(yīng) ，形成人工免疫耐受 。 后來(lái)的很多研究都從不同的角度證實(shí)了該學(xué)說(shuō)的合理性 ， 特別是70年代單克隆抗體的問(wèn)世 ， 對(duì)這一學(xué)說(shuō)是一個(gè)極大的證實(shí) 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 50 復(fù)習(xí)思考題 1． 什么是免疫學(xué) ?免疫有哪些基本功能 ? 2． 抗原 、 抗原性的概念 ?完全抗原與半抗原的概念是什么 ? 3． 抗原物質(zhì)成為免疫原的條件有哪些 ? 4． 什么是抗原決定簇 ?如何理解單特異性決定簇與多特異性決定簇 ? 5． 怎樣使半抗原具有免疫原性 ? 6． 解釋抗原交叉性的合義 ? 7． 抗體與免疫球蛋白的概念是什么 ? 8． 圖解免疫球蛋白單體的分子結(jié)構(gòu) 。 另：期中考試實(shí)驗(yàn)部分計(jì)劃占 1/3左右。 細(xì)菌總論 共七章，介紹細(xì)菌的形態(tài)、構(gòu)造、生理，消毒與滅菌，細(xì)菌生態(tài)、致病機(jī)理、遺傳變異，細(xì)菌分類與命名等。 細(xì)菌各論 共十二章，介紹各屬重要病原細(xì)菌的形態(tài)、生化特性、致病性、微生物學(xué)診斷和免疫防治等。 病毒 共十四章，介紹病毒的形態(tài)、構(gòu)造、繁殖、遺傳、培養(yǎng)，病毒的致病性。 實(shí)驗(yàn) 共十多個(gè)，顯微鏡油鏡的使用，細(xì)菌形態(tài)及構(gòu)造觀察，細(xì)菌抹片制備及染色，培養(yǎng)基的制備，細(xì)菌的分離培養(yǎng)、生長(zhǎng)表現(xiàn)觀察、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)，沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)，重要病原菌的認(rèn)識(shí)，真菌與病毒培養(yǎng)測(cè)定等 。 由 免疫器官 、 免疫細(xì)胞 組成 。 根據(jù)其功能的不同可分為 中樞免疫器官 和 外周免疫器官 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 59 1. 骨髓 (bone marrow) 是體內(nèi)重要的造血器官 。 同時(shí)骨髓也是各種免疫細(xì)胞發(fā)生和分化的場(chǎng)所 。 一部分淋巴干細(xì)胞分化為 T細(xì)胞的前體細(xì)胞 ， 隨血流 進(jìn)入胸腺 后 ， 分化為成熟的淋巴細(xì)胞稱為 胸腺依賴性淋巴細(xì)胞 ， 簡(jiǎn)稱 T細(xì)胞 ， 參與 細(xì)胞免疫 。 骨髓也是形成抗體的重要部位 ， 用抗原免疫動(dòng)物后 ， 骨髓可緩慢 、 持久地大量產(chǎn)生抗體 ， 所以 骨髓也是重要的外周免疫器官 。 青春期之后 ， 胸腺實(shí)質(zhì)萎縮 退化 。 胸腺是 T細(xì)胞分化成熟的中樞免疫器官 ， 新生期摘除胸腺的小鼠在成年后體內(nèi)淋巴細(xì)胞顯著減少 ， 不能排斥異體移植皮膚 ， 對(duì)抗體生成反應(yīng)也有嚴(yán)重影響 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 62 胸腺的免疫功能： (1) T細(xì)胞成熟的場(chǎng)所 骨髓中的前 T細(xì)胞隨血流進(jìn)入胸腺 ， 先后在皮質(zhì)和髓質(zhì) ， 分化增殖為成熟的具有不同功能的 T細(xì)胞亞群 。 (2) 產(chǎn)生胸腺激素 胸腺上皮細(xì)胞可產(chǎn)生多種小分子的肽類胸腺激素 ， 如胸腺血清因子 、 胸腺素 、胸腺生成素和胸腺體液因子等 ， 它們誘導(dǎo) T細(xì)胞分化 、 增殖 、 成熟為 T細(xì)胞 。 性成熟前達(dá)到最大 ， 以后逐漸萎縮退化消失 。 來(lái)自骨髓的淋巴干細(xì)胞在其內(nèi)誘導(dǎo)分化為成熟的 B細(xì)胞 ，經(jīng)淋巴和血液循環(huán)到外周淋巴器官 參與體