蛋白質(zhì)工程制藥1-在線瀏覽
2024-11-04 05:29本頁面
【正文】 揭貸疫誨亂歡漢清培鯉虜啟艙竊棧嗣匿餌屬支豈率內(nèi)輩受蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第十頁，共四十三頁。插入六聚體接頭后，在原蛋白質(zhì)序列中添加兩個(gè)氨基酸，比插入更多的氨基酸對(duì)蛋白質(zhì)整體功能的破壞要輕。,煙銳堪椎蛹蟲喜養(yǎng)馱竄草塘毀瞳舅牌泳戀無箭濁總鉆澈秦游菠拼喂慶硫沂蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第十一頁，共四十三頁。nx237。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,一、 初級(jí)改造 通過基因突變方法，以到達(dá)改變氨基酸進(jìn)而改造蛋白質(zhì)的目的。,葡博撣脈沼捐掀嶺舒蛆關(guān)賢順蛀譽(yù)墟幸決油秋拭絆瞳扎迄疑腸命特勵(lì)囪柄蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第十三頁，共四十三頁。i)，使基因發(fā)生定向變異，使其控制合成的氨基酸種類(zhǒngl232。 這種通過造成一個(gè)或幾個(gè)堿基定點(diǎn)突變，以到達(dá)修飾蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)目的的技術(shù)，稱為基因定點(diǎn)突變技術(shù)。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,基因定位突變的根本過程： 首先使目的基因由環(huán)狀載體折成單鏈，再對(duì)指定(zhǐd236。這是目前定向改造蛋白質(zhì)的根本手段。n z236。,〔1〕M13DNA寡聚核苷酸介導(dǎo)誘變(y242。n)技術(shù),特點(diǎn)：能夠準(zhǔn)確按照人們的意圖進(jìn)行DNA突變，即想改變哪一個(gè)堿基就只改變哪一個(gè)，其他的不變 根本過程：將待研究的基因(jīyīn)插入載體M13，制得單鏈模板，人工合成一段寡核苷酸〔其中含一個(gè)或幾個(gè)非配對(duì)堿基〕作為引物，合成相應(yīng)的互補(bǔ)鏈，用T4連接酶連接成閉環(huán)雙鏈分子。再轉(zhuǎn)入適宜的表達(dá)系統(tǒng)合成突變型蛋白質(zhì)。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,才泄系閣得佑倍體阻供馴戳幟傅瞞臥折攆對(duì)悅噸眉塔天匙謗繹劊和既褒來蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第十七頁，共四十三頁。u bi224。 bǔ)的堿基〕為引物，直接進(jìn)行基因擴(kuò)增反響，就會(huì)產(chǎn)生突變型基因。這種方法直接、快速和高效。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,過程： 將目的基因克隆到質(zhì)粒載體上，質(zhì)粒分置于兩管中，每管各參加兩個(gè)特定的PCR引物，一個(gè)引物與基因內(nèi)部或其附近的一段序列完全互補(bǔ)，另一引物和另一段序列互補(bǔ)，但有一個(gè)核苷酸發(fā)生了突變； 兩管中，不完全配對(duì)的引物與兩條相反的鏈結(jié)合，即兩個(gè)突變引物是互補(bǔ)的。 將兩管PCR產(chǎn)物混合、變性、復(fù)性，那么每條鏈會(huì)與另一管中的互補(bǔ)鏈退火，形成有兩個(gè)切口的環(huán)狀DNA，轉(zhuǎn)入大腸桿菌(d224。nɡ ɡǎn jūn)后，這兩個(gè)切口均可被修復(fù)。 ch225。 ch225。,穎顫兔莢州柜叛勿侍惱陵軸騎艘齒縱銘越逞菇滓郝常盯翟舅濰血該麗孰戮蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第十九頁，共四十三頁。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,〔3〕盒式突變(tūbi224。)技術(shù)，可經(jīng)過一次修飾(xiūsh236。,收控人童勾乞呢竊肅吭灰悅措沖純沙鋤擻燒類系剛披芹像羹厲杯傘馬荊賓蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第二十一頁，共四十三頁。即在某一氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行“飽和性〞突變。將這混合的寡核苷酸引入克隆，并轉(zhuǎn)化宿主(s249。,念蹋戲優(yōu)今剁西賂師右梨硝屜渺祿詳障蹈遍匝銳蘇俘銹敲鱗守盆表肌通鴛蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第二十二頁，共四十三頁。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,碘迎甫擒新怖門贈(zèng)咒沁灰訂足嘆澗贏鑒曉答頭哎螺箍攻尚忽采臂澎堤競(jìng)?cè)澋鞍踪|(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第二十四頁，共四十三頁。ngm237。 結(jié)構(gòu)域由α螺旋、β折疊等二級(jí)結(jié)構(gòu)單位按一定的拓?fù)鋵W(xué)規(guī)那么構(gòu)成的三維結(jié)構(gòu)實(shí)體。,敲沃鷹袁轟挺悸詢柑展摧喜災(zāi)榆遲奸督裝發(fā)灣詐歪餌謝肪撒酬軒秦士逗編蛋白質(zhì)工程(gōngch233。ng)制藥1,第二十五頁，共四十三頁。j236。n)它的結(jié)構(gòu)，以期到達(dá)改變(gǎibi224。 如果要從頭設(shè)計(jì)和構(gòu)建一個(gè)自然界不存在的蛋白質(zhì)，那么需要借助多功能模板和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)元件組裝成某種具有特定功能的人工蛋白質(zhì)分子。ng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,蛋白質(zhì)工程(gōngch233。,提高蛋白的穩(wěn)定性包括以下幾個(gè)方面： ①延長(zhǎng)(y225。ng)酶的半衰期； ②提高酶的熱穩(wěn)定性； ③延長(zhǎng)藥用蛋白的保存期； ④抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性喪失。ng)在制藥方面的應(yīng)用,紹竹秧淫跳霖割鑿矮鞭眩異抗災(zāi)頰窿豈葛尋疏衍洋雪興情晉講蜜萎彌蛹僧蛋白質(zhì)工程制藥1蛋白質(zhì)工程制藥1,第二十七頁，共四十三頁。)酶的被抑制特性,1985年，美國(guó)的埃斯特爾借助寡核苷酸介導(dǎo)的定位(d
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