乙肝六項(xiàng)操作及檢驗(yàn)結(jié)果的解釋-在線瀏覽
2024-10-04 14:30本頁面
【正文】 15分鐘。 三 .HBeAb測定 用酶標(biāo)儀單波長 450nm或雙波長 450/630nm測定各孔 OD值 〔用單波長測定時(shí)需設(shè)空白對照一孔， 30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果〕。 乙肝六項(xiàng)操作 HBeAb檢測〔 ELISA)競爭法 ? 四 .結(jié)果判斷與分析 ? 臨界值〔 .〕的計(jì)算： ? 臨界值＝〔陰性對照孔 OD值 N+陽性對照孔 OD值 P〕 ， ? 結(jié)果判定：樣品 OD值 S/=1者為 HBeAb陽性 ? 樣品 OD值 S/1者為 HBeAb陰性 ? 注意：加底物顯色，顯色的強(qiáng)弱與待測標(biāo)本中 HBeAb的含量成反比。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAb測定〔競爭法〕 ? 原理 ? 在微孔條上預(yù)包被，被純化乙肝核心抗原〔 HBcAg〕，配以酶標(biāo)記抗體〔 HbcAbHRP〕及 TMB等其它試劑，采用競爭抑制法原理檢測人血清〔或血漿〕中乙肝核心抗體〔 HBcAb〕。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAb測定〔競爭法〕 ? 試劑準(zhǔn)備同上 ? 加樣：每測定孔參加 50 l樣品。作為臨床診斷依據(jù)，必須將原倍血清樣品按 1： 30稀釋后再檢驗(yàn)，稀釋液應(yīng)采用生理鹽水；〔作為流行病學(xué)調(diào)查依據(jù)，使用原倍血清檢驗(yàn)〕。 ? 育溫：置 37℃ 溫育 30分鐘，室溫平衡 5分鐘。 ? 顯色：每孔參加底物 A、 B各 50 l，輕拍混勻，置 37℃ 暗處 30分鐘。 ? 測定：用酶標(biāo)儀單波長 450nm或雙波長 450/630nm測定各孔 OD值〔用單波長測定時(shí)需設(shè)空白對照一孔， 30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果〕。 第九頁，共三十五頁。 第十頁，共三十五頁。 ? 2..手工洗板 :棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置 5秒，甩干，重復(fù) 3次后拍干。 ? HBcAg30微升 (或 1滴 )，酶結(jié)合物 50微升 (或 1滴 )(空白對照孔除外 )，充分混勻，封板，置 37℃ 孵育 20分鐘 ? 4..手工洗板 :棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置 5秒，甩干，重復(fù) 5次后拍干。 ? 5..每孔加顯色劑 A液，顯色劑 B液各 50微升 (或 l滴 ) 充分混勻，封板，置 37 `℃ 孵育 10分鐘。 ? ，取波長 450nm(建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長 630nm )，先用空白孔校零，然后讀取各孔 OD值。 第十一頁，共三十五頁。 ? 結(jié)果判定：樣品 OD值 S/=1者為陽性 ? 樣品 OD值 S/1者為陰性 ? 9. 質(zhì)量控制：每次均應(yīng)有陰陽對照，其 OD值應(yīng)在要求范圍內(nèi)。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAblgM(捕獲法〕 ? ： ? 參考值 cutoff value(COV)=陰性對照平均 OD值 x 4 ? 陰性對照 OD值低于 ，高于 OD值計(jì)算。 ELISA法檢測乙肝六項(xiàng)的本卷須知 及結(jié)果分析 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (簡稱 ELISA 法 )檢測乙型肝炎免疫學(xué)標(biāo)志物問世以來， 由于測定靈敏高 、特異好和操作簡便等諸多優(yōu)點(diǎn)， 具有實(shí)用性和可操作性 ，并廣泛應(yīng)用于各類醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室 ，作為檢測乙肝血清標(biāo)志物的首選 ，但通過對臨床乙肝六項(xiàng)檢測的觀察、 存在不同血清物質(zhì)變化及各種影響因素 ，直接或間接的影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確表達(dá) 。 1 樣本的采集與處理影響 樣本離心處理不全， 使得標(biāo)本嚴(yán)重溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈 ，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白，具有過氧化物酶樣的活性， 催化底物顯色造成假陽性， 溶血標(biāo)本禁用。 正常血液采集后半個(gè)小時(shí)至兩小時(shí)開始凝固， 有時(shí)工作中為了快速檢測 ，常會(huì)在血液未開始凝固時(shí) ，即強(qiáng)行離心別離血清 。 因此血液標(biāo)本采集后要使其充分凝固后再別離血清，標(biāo)本離心時(shí) ，可加大離心轉(zhuǎn)速 ，延長離心時(shí)間 或者要節(jié)約時(shí)間就用帶別離膠的采血管采集標(biāo)本。 血清標(biāo)本應(yīng)防止細(xì)菌污染， 細(xì)菌的一些內(nèi)源性酶本身會(huì)對相應(yīng)酶作標(biāo)記測定方法產(chǎn)生干
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