【正文】 + + + 乙肝恢復(fù)期或既往有輕度乙肝病毒感染史 + + 慢乙肝病毒感染攜帶，沒有傳染性或傳染性弱 + + + + + 急性乙肝趨于恢復(fù)，表面抗原攜帶，病毒復(fù)制，有傳染性強(qiáng) + 提示乙肝病毒早期感染，有傳染性 第三十頁，共三十五頁。 總之 ,沒有嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)控 ,沒有標(biāo)準(zhǔn)的操作規(guī)程 ,結(jié)果 判定用肉眼而不用儀器 ,操作隨意 (如試劑自冰箱取出后不復(fù)溫 ,溫育時(shí)不封板 ,洗板后無扣板過程 ),試劑、儀器、器材 (如 微量移液器 )質(zhì)量差等。 顯色劑應(yīng)避光保存 滴加顯色劑 A 、 B 時(shí) ，順序不能顛倒 ，注意不要漏加， 顯色時(shí)間要嚴(yán)格控制， 可用計(jì)時(shí)器來計(jì)時(shí)，保證準(zhǔn)確， 肉眼判斷結(jié)果時(shí)， 顯色淺不易觀察， 影響結(jié)果準(zhǔn)確性， 必須使用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果， 以保證結(jié)果一致性 ，滴加終止液后隨著時(shí)間的增加， 吸光度值逐漸下降， 而且濃度越高其 吸光度隨時(shí)間下降越快， 可能會(huì)產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果，建議在終止反響后立即比色。 有的廠家酶標(biāo)板空間 A 值差 15% ，標(biāo)記酶活性及顯色液的穩(wěn)定性較差，使用劣質(zhì)試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性 。 標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間不宜過長， 應(yīng)新鮮 4℃ 保存不宜超過 7天 ，以免因標(biāo)本中的 IgG 聚合導(dǎo)致本底加深 甚至假陽性，影響判斷結(jié)果。綜合資料和實(shí)踐 ，作如下探討： 第十四頁，共三十五頁。 ? 記錄結(jié)果〕。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAblgM(捕獲法〕 ? 操作步驟 ? 1:1000稀釋，每孔加人稀釋樣品 100微升，設(shè)陰、陽性對照各 2孔，每孔加人陰性對照 (或陽性對照 ) 各 100微升 (或 2滴 )，并設(shè)空白對照 1孔，封板，置 37 ℃ 孵育 20分鐘。 ? 洗滌：用洗滌液充分洗滌 5次，洗滌完扣干〔每次應(yīng)保持 3060秒的浸泡時(shí)間〕。 第七頁，共三十五頁。 加酶：分別在每孔中參加酶標(biāo)記抗體 50 l，輕輕混勻。 – 洗滌：用洗滌液充分洗滌 5次，洗滌完扣干〔每次應(yīng)保持 3060秒的浸泡時(shí)間〕。 第二頁，共三十五頁。 第三頁，共三十五頁。 – 三 .HBSAg測定 – 用酶標(biāo)儀單波長 450nm或雙波長 450/630nm測定各孔 OD值〔用單波長測定時(shí)需設(shè)空白對照一孔， 30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果〕。 顯色：每孔參加底物 A、 B各 50 l，輕拍混勻，置 37℃ 暗處 15分鐘。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAb測定〔競爭法〕 ? 試劑準(zhǔn)備同上 ? 加樣：每測定孔參加 50 l樣品。 ? 測定：用酶標(biāo)儀單波長 450nm或雙波長 450/630nm測定各孔 OD值〔用單波長測定時(shí)需設(shè)空白對照一孔， 30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果〕。 ? HBcAg30微升 (或 1滴 )，酶結(jié)合物 50微升 (或 1滴 )(空白對照孔除外 )，充分混勻，封板，置 37℃ 孵育 20分鐘 ? 4..手工洗板 :棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置 5秒，甩干，重復(fù) 5次后拍干。 ? 結(jié)果判定：樣品 OD值 S/=1者為陽性 ? 樣品 OD值 S/1者為陰性 ? 9. 質(zhì)量控制：每次均應(yīng)有陰陽對照，其 OD值應(yīng)在要求范圍內(nèi)。 正常血液采集后半個(gè)小時(shí)至兩小時(shí)開始凝固， 有時(shí)工作中為了快速檢測 ，常會(huì)在血液未開始凝固時(shí) ，即強(qiáng)行離心別離血清 。余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱。 第二十頁，共三十五頁。 第二十四頁，共三十五頁。 第二十六頁，共三十五頁。 ? 3 + + (1)既往感染過 HBV； ? (2)急性 HBV感染恢復(fù)期； ? 3)少數(shù)標(biāo)本仍有傳染性。 乙肝五項(xiàng)常見模式 ? 8 + + + (1)急性 HBV感染趨向恢復(fù)； (2)慢性 HBsAg攜帶者； (3)傳染性弱。 ：濃縮洗滌液配制前充分搖勻〔如有晶體應(yīng)充分溶