乙肝六項(xiàng)操作及檢驗(yàn)結(jié)果的解釋-文庫(kù)吧資料
2024-10-04 14:30本頁(yè)面
【正文】 顯色淺不易觀察， 影響結(jié)果準(zhǔn)確性， 必須使用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果， 以保證結(jié)果一致性 ，滴加終止液后隨著時(shí)間的增加， 吸光度值逐漸下降， 而且濃度越高其 吸光度隨時(shí)間下降越快， 可能會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，建議在終止反響后立即比色。 洗滌是 ELISA 法操作的重要環(huán)節(jié)， 洗滌液的配制要嚴(yán) 格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作 ，不能用自來(lái)水代替蒸餾水配制 因?yàn)樽詠?lái)水中的次氯酸鈉會(huì)影響結(jié)果 ，手洗易交叉污染 盡量使用洗板機(jī)洗滌， 血清中殘留的纖維蛋白或洗滌瓶，未經(jīng)常清洗而留有的污垢 ，結(jié)晶易使洗板機(jī)針孔全堵塞或半堵塞 ，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底， 導(dǎo)致花板而造成假陽(yáng)性或假陰性 ，所以操作洗板機(jī)過(guò)程中要不時(shí)觀察洗板機(jī)針孔內(nèi)洗液的通暢情況 ，及時(shí)糾正調(diào)整， 洗板機(jī)要做好維護(hù)保養(yǎng)， 不用時(shí)應(yīng)用去離子水清洗幾遍。 溫浴影響 96 孔酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)特別 ，易產(chǎn)生邊緣效應(yīng) ，抗原抗體結(jié)合及酶促反響對(duì)溫度要求嚴(yán)格， 標(biāo)本要貼好密封膜 ，防止水蒸氣和污物浸入， 放置 37 ℃ 水浴箱時(shí) ，應(yīng)讓反響孔底部 2/3 浸入水中， 才能減少受熱不均 防止邊緣效應(yīng) ，干浴與水浴存在明顯的差異 ，盡可能使用水浴 ，并控制好水浴時(shí)間。 3 操作技術(shù)的影響 加樣吸嘴的潔凈和吸液量的準(zhǔn)確性直接影響結(jié)果 ，移液器吸量缺乏 ，移液抽吸排放太快， 吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔， 所以要定期校正移液器， 吸頭要配套， 每次裝吸頭要吻合緊密， 移液不宜過(guò)快， 排放應(yīng)完全 ，盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭移液時(shí)用力及抽吸速度均勻一致 加樣后要充分混勻 ，在 100 ul和 50 ul的移液不精密度應(yīng) 在 1%范圍以?xún)?nèi)， 分別在 99 101 ul和 ul之間。 有的廠(chǎng)家酶標(biāo)板空間 A 值差 15% ，標(biāo)記酶活性及顯色液的穩(wěn)定性較差，使用劣質(zhì)試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性 。 第十八頁(yè)，共三十五頁(yè)。 不同批號(hào)試劑盒中的組份、不能進(jìn)行交叉使用 ，包括試劑瓶蓋，相互交叉使用 ，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高 ，花板情況。 2 試劑的影響 試劑盒在運(yùn)輸中時(shí)間太長(zhǎng) ，溫度過(guò)高會(huì)使顯色偏淡，靈敏度偏低 ，要求試劑盒應(yīng)存放于 2 8 ℃ 冰箱中，從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒、全部瓶裝試劑以及待測(cè)標(biāo)本所需的微孔反響板，都應(yīng)預(yù)先在室溫下平衡后，再開(kāi)啟使用 。 標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)， 應(yīng)新鮮 4℃ 保存不宜超過(guò) 7天 ，以免因標(biāo)本中的 IgG 聚合導(dǎo)致本底加深 甚至假陽(yáng)性，影響判斷結(jié)果。 第十六頁(yè)，共三十五頁(yè)。 特別是在冬天 使得血清中殘留局部纖維蛋白原，在 ELISA 測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白凝塊附著在酶標(biāo)反響孔壁內(nèi)使得不易洗掉 易造成假陽(yáng) (陰 )性、 影響結(jié)果 。 第十五頁(yè)，共三十五頁(yè)。綜合資料和實(shí)踐 ，作如下探討： 第十四頁(yè)，共三十五頁(yè)。 ? 例如 1： ? 陰性對(duì)照孔 1 COV: . ? 陰性對(duì)照孔 2 COV: . ? 4＝ ? 例如 2： ? 陰性對(duì)照孔 COV: ? 陰性對(duì)照孔 COV: ? 〔 +〕 /2 4＝ 第十三頁(yè)，共三十五頁(yè)。 第十二頁(yè)，共三十五頁(yè)。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAglgM(捕獲法〕 ? 8. 結(jié)果判斷與分析 ? 臨界值〔 .〕的計(jì)算：臨界值＝陰性對(duì)照孔 OD值 N 4，陰性對(duì)照 OD均值小于 ，大于 OD值計(jì)算。 ? 記錄結(jié)果〕。 ? 50微升 (或 1滴 )，混勻。 ? 洗板機(jī)洗板 :選擇洗滌 5次程序洗板后拍干。 ? 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌 3次程序洗板后拍干。 乙肝六項(xiàng)操作 HBCAblgM(捕獲法〕 ? 操作步驟 ? 1:1000稀釋?zhuān)靠准尤讼♂寴悠?100微升，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各 2孔，每孔加人陰性對(duì)照 (或陽(yáng)性對(duì)照 ) 各 100微升 (或 2滴 )，并設(shè)空白對(duì)照 1孔，封板，置 37 ℃ 孵
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