市場(chǎng)營(yíng)銷第三章基因工程第一節(jié)基因工程工具酶wangjx-在線瀏覽
2025-04-11 11:44本頁(yè)面
【正文】 cI (II)— Streptomyces achromagenes I (Ⅱ ) （三）、限制酶的特點(diǎn) 1. 識(shí)別順序和酶切位點(diǎn) １）識(shí)別４ 8個(gè)相連的核苷酸 MboI NGATCN； AvaII GG(A/T)CC BamHI GGATCC： PpuMI PuGG(A/T)CCPy Not I GCGGCCGC； SfiI GGCC N N N N N GGCC CCGGN’ N’ N’ N’ N’ CCGG Fok I 5’ ＧＧＡＴＧ (Ｎ )93’ 3’ ＣＣＴＡＣ (Ｎ )135’ 外側(cè)，產(chǎn)生５’ 端突起 ２）富含ＧＣ ３）對(duì)稱性 — 雙對(duì)稱 EcoRI 5’ G A A T T C3’ 3’ C T T A A G5’ ４）切點(diǎn)大多數(shù)在識(shí)別順序之內(nèi)，也有例外 ５）限制酶切后產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是５’ Ｐ和３’ ＯＨ 2. 末端種類 １）３’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 Pst I 5’ CTGCAG3’ 5’ CTGCA G3’ 3’ GACGTC5’ 3’ G ACGTC5’ ２）５’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 EcoRI 5’ GAATTC3’ 5’ GOH PAATTC3’ 3’ CTTAAG5’ 3’ CTTAAP HOG5’ 粘性末端能與另一個(gè)相同的粘連末端相連接，任何兩個(gè)具有相同識(shí)別位點(diǎn)的 DNA分子經(jīng)限制酶切割后能夠重新連接成新的重組 DNA分子。 C TCGGG。 CTCGAG 5’ GAATTC3’ 3’ CTTAAG 5’ 5’ GTTAAC3’ 3’ CAATTG 5’ EcoRⅠ 的識(shí)別序列 HaeⅠ 的識(shí)別序列 5’ NNNNNNNGAATTCNNNNNNNN3’ 3’ NNNNNNNCTTAAGNNNNNNNN5’ 5’ NNNNNG 3’ NNNNNCTTAAp EcoRⅠ 的識(shí)別序列和酶切切口（粘端） pAATTCNNNNNN339。 2. 酶切位點(diǎn)與識(shí)別位點(diǎn)不一致，切點(diǎn)常在識(shí)別位點(diǎn)的一側(cè)， 1 20nt。 4. 產(chǎn)生粘性末端可以是 15個(gè)核苷酸。 酶切圖譜的構(gòu)建（ a） 請(qǐng)構(gòu)建該環(huán)狀DNA分子的酶切圖譜 酶切圖譜的構(gòu)建（ b） 二、 DNA甲基化 酶 （ 一）、 甲基化酶的種類與識(shí)別順序 1. 限制修飾系統(tǒng) I、 II、 III型中的甲基化酶 三個(gè)系統(tǒng)中的甲基化酶可使細(xì)菌 DNA分子中的胞嘧啶和腺嘌呤發(fā)生甲基化，形成 5’ 甲基胞嘧啶和 6’ 甲基腺嘌呤。 如： M. EcoRI GA mATTCC EcoRI G AATTC 不同 M． HpaI C mCGG HpaI C CGG 相同 2. II型甲基化酶對(duì)限制酶活性的影響 １） 抑制同種限制酶的活性 GGATmCC— BamHI(G?GATCC) GAmATTC— EcoRI(G?AATTC) ２） 抑制不同種限制酶的活性 a. 順序完全重疊 如： M. ClaI（ ATCGmAT） TaqI（ TCGmA） b. 順序邊界重疊 如： M. BamHI（ GGATmCC） MepI（ mCCGG） ３） 抑制不同種限制酶的部分活性 M． TaqI（ TCGmA） HindII（ GTPyPuAC）：GTCAAC， GTTAAC， GTCGmAC， GTTGAC 3. 甲基化酶的用途 １） 改變某些限制酶識(shí)別順序的特異性，以便重組體的形成 ２） 在建立基因文庫(kù)時(shí)，可先使 DNA分子部分甲基化，然后再用限制酶切 CH3 CH3 CH3 RE RE RE RE RE RE RE RE RE RE RE CH3 CH3 CH3 與載體相連 甲基 化酶 人工 接頭 RE 用于基因組文庫(kù)的建立 用于 cDNA的連接 RE RE RE 三、核酸酶 （ 一）、外切酶 III（ ExoIII） 1. 一般特點(diǎn)： 來自于 ，分子量 28,000 kD 2. 催化反應(yīng)類型
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