【正文】 NC均值 ≥ ? ③ Cut off值 = 陰性對照均值 + ? 小于 Cut off為陰性 ， 大于或等于 Cut off為陽性 ? 4） 報告： ? 對 HIV抗體篩查試驗 ， 呈陰性反應者可出具 “ HIV抗體陰性 ” 報告 （ 可用附表 1） ； ? 對初篩試驗呈陽性反應者不能出陽性報告 ， 可出具 “ HIV抗體待復查 ” 報告 （ 附表 1） 。送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室 ， 再轉(zhuǎn)送艾滋病確認實驗室 ， 或在本實驗室復檢后直接送確認實驗室 。 如兩種試劑復測均呈陰性反應 ， 則報告 HIV抗體陰性；如均呈陽性反應 ， 或一陰一陽 ， 需送艾滋病確認實驗室進行確認 。 ? （ 6） HIV抗體確認試驗結(jié)果報告 ? 確認試驗由確認實驗室根據(jù)檢測結(jié)果出具 “ HIV抗體確認檢測報告單 ” （ 附表 3） ， 報告 HIV抗體陽性 （ +） 、 HIV抗體陰性 （ ） 及 HIV抗體不確定（ 177。 ? 符合 HIV1抗體陽性判斷標準 ， 報告 “ HIV1抗體陽性 （ +） ” ， 并按規(guī)定做好檢測后咨詢 、 保密和疫情報告工作 。 如果近期有高危行為 ， 如性亂 、 注射毒品等 ， 或有急性流感樣癥狀等情況 ， 為排除因“ 窗口期 ” 而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果 ， 建議高危行為后 3個月時再做抗體檢測 。 ? 符合 HIV抗體不確定判斷標準 ， 報告 “ HIV抗體不確定 （ 177。 如果檢測時暴露時間已超過 3個月 ， 則在 3個月后隨訪 1次即可 。 ? 2) 必要時可做 HIV1 P24抗原或 HIV核酸測定 ， 但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù) ， 確認報告要依據(jù)血清學隨訪結(jié)果 。 ? 同一受檢對象的樣品在不同實驗室得到不一致的確認結(jié)果時 ， 由國家艾滋病參比實驗室和艾滋病確認實驗室審評及技術指導專家組予以仲裁 。 ? （ 1） 適用范圍： ? HIV1抗體不確定或窗口期的輔助診斷 。 ? 第四代 HIV1抗原 /抗體 ELISA試劑檢測呈陽性反應 ， 但 HIV1抗體確認陰性者的輔助診斷 。 ? （ 2） HIV P24抗原檢測方法 ? P24抗原的檢測通常是采用 ELISA夾心法 ， 已知抗體包被固相反應板孔底 ， 加入待測血清 ， 若血清中含有 P24抗原則與包被抗體形成抗原 抗體復合物 ， 再加入酶 （ HRP） 標記的 HIV1抗體與抗原結(jié)合 ， 加底物顯色 ， 在酶標儀上讀結(jié)果 。 ? 即使將復合物解離 ， 敏感性提高 ， 也只能在大約50%無癥狀感染者中檢出 P24抗原 。 ? HIV1 P24抗原陽性僅作為 HIV感染窗口期的輔助診斷依據(jù) ， 不能據(jù)此確診 。 HIV1P24抗原陰性結(jié)果只表示在本試驗中無反應 ， 不能排除 HIV感染 。 嬰幼兒體內(nèi)從母親得到的 HIV抗體持續(xù)存在時間最長不超過 18個月 。 4．艾滋病檢測實驗室安全防護 ? 規(guī)規(guī)定了全國各級各類艾滋病實驗室的安全防護 ，規(guī)范性引用文件 ? （ 1） 實驗室生物安全級別 ? 1） 艾滋病血清學檢測 ? 艾滋病血清學檢測 （ 包括篩查和確認實驗室 ） 、免疫學和核酸檢測應在符合 Ⅱ 級生物安全實驗室（ BSL2） 要求的艾滋病檢測實驗室中進行 。 ? （ 2） 實驗室管理要求 ? 1） 建立安全制度 ? ① 實驗室的儀器設備 、 建筑和設施的安全性應符合 《 實驗室生物安全通用要求 》 GB 194892023和本 《 規(guī)范 》 要求 。 ? ③ 無論是否發(fā)生意外事故 ， 每年都要對安全工作制度或安全標準操作程序及其實施情況進行檢查和修訂 ， 并有記錄 。 建立意外事故的登記和報告制度 。 ? 2） 人員培訓和管理 ? ① 向管理人員和所有檢測人員提供并完成與工作相關的充足有效的技術培訓 。 所有工作人員必須經(jīng)過 HIV檢測技術和省級以上艾滋病實驗室安全培訓 ， 包括上崗培訓和復訓 ， 并接受實驗室管理人員的監(jiān)督 。 ? ② 必須告知新上崗人員實驗室工作的潛在危險 ，進行安全教育 ， 直至有能力后方可單獨工作 。 在安排工作區(qū)域時 ， 要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料 ， 對實驗室環(huán)境做好安全檢查 。 非實驗室人員和非實驗室物品不得進入實驗室 。 實驗室工作人員從事工作前必須進行 HIV抗體和乙肝 、 丙肝等肝炎病毒標記物的檢測；注射乙肝疫苗；每半年 1年進行 1次 HIV抗體檢測 ， 并保留血清樣品 。 ? ② 艾滋病檢測實驗室所有人員應具有高度的保密意識 。 ? ③ 保密制度納入年度考核 ， 發(fā)現(xiàn)問題及時處理并根據(jù)情況修訂保密制度 。 ? ② 對所有檢測報告嚴格把關 ， 杜絕漏報 、 誤報現(xiàn)象的發(fā)生 。 ? ② 應設有專門儲存陽性血清 、 質(zhì)控品的低溫冰柜和 /或血清庫毒種庫 ， 并應上鎖 ， 專人管理 。 ? 6） 建立應付突發(fā)事件的措施 ? ① 在緊急預案中要包括在緊急事件發(fā)生時通知實驗室主任 、 設備管理員 、 實驗室工作人員和設備安全員 。 （ 3）廢棄物處置和消毒 ? 1） 廢棄物處置： ? ① 廢棄物處置應符合 《 實驗室生物安全通用要求 》（ GB 194892023） 。 ? 2） HIV常用的消毒方法 ? 物理消毒方法： ? ① 高壓蒸汽消毒 ， 121℃ ， 保持 15?20min。 ? HIV常用的化學消毒方法： ? HIV最常用的化學消毒劑是 %次氯酸鈉 、 70%乙醇和 2%戊二醛 ， 保持 10?30 min。 ? ② 生物安全柜工作臺面和儀器表面： 70%乙醇 。 ? ④ 污染的臺面和器具： 40%甲醛水溶液 ， 也可以用過氧化氫或過氧乙酸 。 一、 配合 VCT(自愿咨詢檢測 )和當前防治 工作的需求， 新增有關內(nèi)容 : ? ? 除常規(guī)檢測程序以外 ， 可以根據(jù)不同的目的 ， 對 HIV流行強度不同的地區(qū)和不同人群采用不同的替代策略 ， 見表 1。 出現(xiàn)陽性反應則用兩種不同原理或不同廠家的試劑復測 （ 其中包括進口第三代 ELISA試劑 ） 。 兩種試劑復測結(jié)果均為陽性 ， 但第三代ELISA試劑復測 S/CO比值在 ? ， 或兩種試劑復測結(jié)果呈一陰一陽 ， 應進一步作確認試驗 ，按照確認試驗的標準判斷結(jié)果 （ 圖 3） 。 使用該策略判斷結(jié)果 ， 陽性報告須由確認中心實驗室和確認實驗室或以上實驗室認可的篩查實驗室出具 。 ? ② 兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陰性則報告 HIV抗體陰性；兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性 ， 且S/CO比值均大于或等于 ， 用第三種篩查試劑 （ 高特異性篩查試劑 ） 檢測 ， 如果第三種試劑檢測結(jié)果為陽性 ， 在符合使用該策略條件的地區(qū)和人群中可以出具 “ HIV1抗體陽性（ +） ” 報告 ， 使用 “ HIV抗體替代策略檢測報告單 ” （ 附表 5） 。 陽性 不確定 樣品 EL I SA 1 陽性 兩種均陽性 確認試驗 陰性 二種 S / CO 均≥ 6 一種或二種 S / C O 1 ~ 5 . 9 陽性 陰性或可疑 高特異性篩查試劑 提供陽性咨詢 出具“ H I V 抗體陽性”報告 提供咨詢 隨訪 陰性 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報告 EL I SA 1+ EL I SA 2 一陰一陽 兩種均陰性 圖 4 替代策略 Ⅱ （高危人群 VCT檢測策略）檢測流程 ? 3） 替代策略 Ⅲ （ 高流行地區(qū)一般人群及其它地區(qū)各類人群 VCT檢測策略 ， 圖 5） ? 檢測程序及結(jié)果報告： ? ① 先用一種高敏感性篩查試劑檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應報告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性則用第二種篩查試劑 （ 高特異性 ） 復檢 。 ? ③ 第三種篩查試劑檢測為陰性則報告 HIV抗體陰性；第三種試劑檢測為陽性按疑似陽性咨詢 ， 建議進一步做確認試驗 ， 按確認試驗的結(jié)果報告 。 前兩區(qū)為擴增前區(qū) ，后兩區(qū)為擴增后區(qū) 。 ? ② 樣品處理區(qū)：樣品登記 、 分裝；核酸提取 、 保存和加樣 。 ? ④ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定 、 結(jié)果分析 、登記及報告 。 ? 3） 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制 。 ? ② 每個實驗人員 、 實驗組分別使用各自的試劑及耗材 。 ? ④ 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。 ? （ 3） 設施和設備 ? 1） 根據(jù)檢測項目配備相應的設施和設備 。 ? 以下是各區(qū)域應配備的設備： ? ① 試劑準備區(qū)：冰箱 、 潔凈工作臺 、 離心機 、 加樣器 、 振蕩器 、 廢棄物容器 。 ? ③ 擴增區(qū)：核酸擴增設備 、 冰箱 、 離心機 、 加樣器 、 廢棄物容器 。 ? ⑤ 配備 80℃ 冰箱 。 ? （ 3） 方法和試劑 ? 1） 方法 ? 常用的 HIV RNA定量測定方法有 : ? 逆轉(zhuǎn)錄 PCR試驗 （ RTPCR） 。 ? 分支 DNA雜交試驗 （ bDNA） 。 已獲 FDA 批準。 動 態(tài)范圍廣。 能夠使用組織或體液樣品，例如陰道分泌物。 已獲 FDA 批準。 4 小時之內(nèi)分離血漿，運輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 雖然單純使用 RNA測定不能完全確定感染與否 ， 但當 RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時 （ 3，000c/ml） ， 感染發(fā)生的可能性非常大 。 ? 另外 ， 許多 AIDS病人 /HIV感染者在接受抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低的水平 ， 還有少數(shù) HIV感染者在感染后長期處于病毒水平非常低的狀態(tài) ， 進行 RNA測定時往往測不出來 。 ? 2） 早期診斷 ? 在 HIV感染的窗口期無法使用抗體檢測進行診斷 。 這個高峰在免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應后 ， 尤其是在細胞免疫出現(xiàn)后開始下降 。 該方法也可用于 HIV感染孕婦所生嬰兒的早期輔助診斷 。 ? 3） 病程監(jiān)控 ? 根據(jù) HIV感染發(fā)生后病毒載量具有一定的變化規(guī)律 ， 并且這種變化與疾病的進程有著密切的相關性 。 ? 通常在 HIV感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生的感染或其它臨床癥狀很難與 AIDS發(fā)病時的癥狀區(qū)別 ， 為確定一個剛發(fā)生的癥狀是否與 HIV的感染有關 ，醫(yī)生往往需要觀察病人的實驗室指標 ， 病毒載量就是一個非常重要的指標 。 這不單是經(jīng)濟上的原因 ， 更重要的是由于抗病毒藥物的副作用和療效原因 。 ? 在進行治療后 ， 通過病毒水平的檢測才能確定治療是否有效 ， 通常在治療前后病毒水平降低 log以上才被認為臨床有效 。 病毒載量與 6年發(fā)病率的關系為：500c/ml時 %。3，001?10， 000c/ml時 %。30， 000c/ml時則為 80%。10， 000?29， 999c/ml為%。＞ 100，000c/ml為 %。 4． CD4+/CD8+ T淋巴細胞檢測 （ 1） 實驗室條件 ? 1） 人員 ? 進行 HIV感染者 CD4+ 和 CD8+ T淋巴細胞檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格 ， 并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術培