血吸蟲病免疫診斷技術(shù)規(guī)范-在線瀏覽
2025-03-15 12:34本頁面
【正文】 采血針忌用注射針頭；采血針刺入速度要迅速；有炎癥部位不能采血；采血時切忌用力擠壓；采血后傷口繼續(xù)出血應用干棉球壓迫； ? 用塑料管收集血液時應盡量避免空氣進入管內(nèi) 。 ? 塑料管封口要嚴密，防止血液流失。 ? 分離后的血清（或血漿）樣品可置冰箱保存 。 三、間接紅細胞凝集試驗 ( IHA)操作規(guī)程 1 基本原理 抗原吸附于經(jīng)適當處理的紅細胞表面，使紅細胞致敏。為正向間接凝集。新鮮紅細胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。醛化紅細胞能耐 60℃ 加熱，可長期保存而不溶血。 3 實驗操作準備 1) 穿戴好工作服、口罩和手套等，做好基本實驗準備工作。要求試劑批號與有效期符合產(chǎn)品說 明；器材符合相關(guān)質(zhì)量要求。 4） 實驗試劑和器材準備 ? 實驗試劑盒： ? 1. 凍干致敏紅細胞（紅瓶） ? 2. 致敏紅細胞稀釋液（蒸餾水、紅瓶） ? 3. 標本稀釋液（生理鹽水、蘭瓶） ? 4. 陽性對照品（凍干品、紅色） ? 5. 陰性對照品（凍干品、蘭色） ? 6. 使用說明書 ? 器材： ? 1. 移液器 100μl 一支、 1000μl （ 1ml ）一支、配套吸頭、吸頭盒及移液器架等 ? 2. “ V” 型反應板一塊、白紙一張、記號筆 ? 3. 旋轉(zhuǎn)震蕩器一臺 ? 4. 溫箱一臺 ? 5. 實驗記錄紙、記錄筆、 廢棄物杯 5) 實驗準備要求： ? 待檢血清（或血漿）要新鮮， 不能有溶血或混有紅細胞 。 不要選擇“ U” 型及不同底角的“ V”型反應板。 ? 試劑盒在有效期內(nèi) 4 實驗操作步驟 1) 樣本編號 ，從左到右按 1～ n號排列。 血凝反應板編號： 1）橫 向（行）從左到右編號： ?? 、陰、陽； 2） 縱向（列）從上 到下編號： 1: 1: 1: 1:40。 4） 配置致敏紅細胞懸液：啟開安瓶，以每支凍干致敏紅細胞加 1ml致敏紅細 胞稀釋液 （蒸餾水、紅瓶） 稀釋混勻備用。 6） 調(diào)節(jié)移液器為 100μ l。 7） 調(diào)節(jié)移液器為 25μ l。 加液完畢，檢查每孔是否有漏加孔或加雙倍孔，并及時糾正。 （加血清時要核對一下樣本編號防止加錯 位） 。后吸出 25μ l于第 3孔（縱向），同上混勻使血清成 1:20稀釋。 同上操作進行第 2～ n號樣本、陰性對照、陽性對照倍比稀釋。 10） 全部樣品（及對照）倍比稀釋完成后，調(diào)節(jié)移液器為 75μ l，然后在第一行（縱 列第一孔）吸取 75ml棄去，一個樣本一個吸頭。 12） 充分混勻致敏紅細胞懸液 （每加若干次要混勻一次）， 然后在每孔加致敏紅細胞 懸液 25μ l（原則上以每個樣品為單位即列為單位加液），不需換吸頭，但不能 觸碰反應板，自動卸去吸頭。并做好記錄。 5 結(jié)果判定 1） 首先應觀察對照管：陰性對照應不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，陽性對照應出現(xiàn) 凝集現(xiàn)象，結(jié)果方可成立。 2） 根據(jù)紅細胞凝集程度以 “－”，“＋”，“＋＋”，“＋＋＋” 記錄結(jié)果，以呈“＋”凝集的血清最高稀釋度作為血清的效價 , 以效價 ≥ 1:10作為陽性判斷標準。 ? ＋：多數(shù)紅細胞下沉在孔底形成圓點，周圍可見少量凝集紅細胞，肉眼見周邊模糊 (或中間出現(xiàn)較為明顯的空白點 ) 。 6 注意事項 1） 結(jié)果觀察時不能移動反應板，如條件限制則要非常小心慢移，切勿搖動反應板，以免凝集分 散，影響結(jié)果判斷。 2） 血凝板以 96孔“ V” 型底角應為 90度有機玻璃板為適宜，確保所用器材清潔 ,血凝板清洗不能 用毛刷、移液吸頭不能觸碰反應孔 ,以避免損壞反應孔 ,造成假陽性。標本不能及時檢測可在內(nèi) 4℃ 度保存 2 ～ 3 天。 4） 結(jié)果判斷的時間與溫度有關(guān)， 應根據(jù)作業(yè)指導書在相同溫度相同時間條件下判斷 。 6） 試劑盒于 2～ 8℃ 避光保存。醛化紅細胞能耐 60℃ 加熱，并可 反復凍融不破碎，在 4℃ 可保存 3～ 6個月，在－ 20℃ 可保存一年以上。 1 基本原理 血吸蟲病患者血清中存在的抗血吸蟲抗體（ IgG）與膠體染料標記的日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原（ SEA)相結(jié)合，形成染料標記的抗原 — 抗體復合物，這復合物通過層析技術(shù)與固定在硝酸纖維膜上的抗人 IgG（二抗）相結(jié)合，形成可見的染色帶，即為陽性反應。 2） 實驗試劑和器材檢查和擺放。 3) 檢查完畢后，按照實驗常規(guī)要求擺布好實驗試劑和器材。 2） 取 PVC小杯架子， 裝上 PVC小杯（下墊白紙） 3） 編號： 橫向（行）（標在小杯架子上）從左到右編號： ?? 。 4） 輕輕顛倒混勻染料標記液，確保沉淀完全被混懸。根據(jù)樣品數(shù)每小杯加 50μ l染料標記液至 PVC小杯中。 6） 調(diào)節(jié)移液器為 20μ l。整板樣本加完后， 檢查每孔是否有漏加孔或加 雙倍孔，并及時糾正。 8） 取試紙條插入小杯中，待小杯內(nèi)反應液 吸干后 觀察結(jié)果 （ 15分鐘） 。 10） 實驗臺面清理： 未使用試劑、未使用吸頭、移液器（刻度復原至最高 檔）
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