血吸蟲病免疫診斷技術(shù)規(guī)范-展示頁
2025-02-17 12:34本頁面
【正文】 第一檔進(jìn)行）而影響吸量準(zhǔn)確性。長(zhǎng)時(shí)間保存應(yīng)放冰箱凍存。 3） 待測(cè)血清或血漿不能混有紅細(xì)胞或被細(xì)菌污染。結(jié)果觀察時(shí)下墊白紙。 ? ＋＋：孔底中心可見少量紅細(xì)胞下沉的小圓點(diǎn)，多數(shù)凝集紅細(xì)胞在孔底周圍形成小薄層 ? ＋＋＋：紅細(xì)胞形成薄層凝集 ,邊緣呈現(xiàn)不規(guī)則的皺褶。 3） 報(bào)告形式： 1:40陽性（＋＋） 4）血凝反應(yīng)強(qiáng)度的判定如下： ? －：紅細(xì)胞全部下沉在孔底，形成肉眼可見緊密、邊緣光滑的小圓點(diǎn)。如出現(xiàn)異常則說明實(shí)驗(yàn)操作有誤或血球 本身有自凝現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果不能成立。 14） 記錄結(jié)果后， 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清理：未使用試劑、未使用吸頭、移液器（刻度復(fù)原至最 高檔）等放回原處；實(shí)驗(yàn)廢物放入規(guī)定的收集器內(nèi)。 13） 先試一試震蕩器，正常運(yùn)轉(zhuǎn)后將反應(yīng)板震搖 1～ 2分鐘，蓋上蓋子， 置 37℃ (水 浴 )30min后下墊白紙觀察結(jié)果。 11) 檢查每孔液面是否在同一高度，否則應(yīng)及時(shí)糾正。倍比稀釋 一個(gè)樣本一個(gè)吸頭。后吸出 25μ l于第 4 孔縱向），同上混勻使血清成 1:40稀釋 ,后吸出 25μ l棄去，自動(dòng)卸去吸頭。 9） 在第 1孔吸出 25μ l于第 2孔（縱向），同上混勻使血清成 1:10稀釋。 8） 于第一排第 1孔加 1號(hào)待測(cè)血清 25μ l，加完血清（蓋上蓋子）放回原處， 充分混勻 （吸打 4次，混勻吸打在第一檔進(jìn)行，移液吸頭不能觸碰反應(yīng)孔 底壁） ,使血清成 1﹕5 稀釋。血凝反應(yīng)板的縱向（列）第 2～ 4孔各加標(biāo)本稀釋液 25μ l。血凝反應(yīng)板的第 1行（橫向）第 1孔各加標(biāo)本稀釋液 100μ l。 5) 啟開標(biāo)本稀釋液 （生理鹽水、蘭瓶） 安瓶。 3） 稀釋對(duì)照品：陰性對(duì)照、陽性對(duì)照品各 加 100μ l蒸餾水稀釋溶解 ，加蓋混 勻后放回原處備用。 2） 取一塊 96孔“ V” 型反應(yīng)板 橫向平放縱向使用 。 ? “ V” 型反應(yīng)板要清潔、不潮濕，反應(yīng)孔完好光潔。 ? 應(yīng)選擇“ V” 型，底角為 90度的 反應(yīng)板 。 3) 檢查完畢后，按照實(shí)驗(yàn)常規(guī)要求擺布好實(shí)驗(yàn)試劑和器材。 2） 實(shí)驗(yàn)試劑和器材檢查和擺放。并可反復(fù)凍融不破碎，在 4℃可保存 3～ 6個(gè)月，在－ 20℃ 可保存一年以上。為此一般在致敏前先將紅細(xì)胞醛化，先用甲醛或戊二醛，再用鞣酸處理。 2 凍干致敏紅細(xì)胞的制備工藝 ? 血吸蟲蟲卵抗原制備 ? 紅細(xì)胞醛化 ? 紅細(xì)胞鞣化 ? 紅細(xì)胞致敏 ? 致敏紅細(xì)胞的冰凍干燥 致敏的新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用 2～ 3天。致敏紅細(xì)胞與病人血清中特導(dǎo)性抗體（抗 SEA特異性抗體）相遇時(shí)，在適宜的條件下（電解質(zhì)、溫度、 pH），抗原與特導(dǎo)性的抗體相結(jié)合，使紅細(xì)胞出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)。 ? 實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)按照相關(guān)規(guī)定處理，嚴(yán)禁隨意丟棄 。 ? 用剪刀剪塑料管時(shí)應(yīng)保持剪刀的清潔，避免交叉污染 。如果空氣進(jìn)入管內(nèi)可將塑料管的另一端位置提高 ,以排除空氣 ,然后繼續(xù)采集血液到指定位置 ? 可用普通離心機(jī)低速 (10001500轉(zhuǎn) )離心 5分鐘 ,以分離血清，防止離心過速或過長(zhǎng)?；騼啥朔饪诤蠓疟浔４?zhèn)溆?。 6）采血后的塑料管將進(jìn)血端留一小段空隙，靠近酒精燈燒熔管口，用鑷子輕 輕夾住已基本溶化的采血管進(jìn)血端約 10秒 ,將進(jìn)血端牢牢封住 ,貼上標(biāo)簽 。 4）用塑料管進(jìn)血口靠近血滴讓血液自行流入管內(nèi)，采集＞ 3cm血液 (一次檢測(cè) )。如血流不暢，可于四周稍加壓力。 3．采血方法 1）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用 75%酒精棉球消毒皮膚。手指采血應(yīng)選擇無名指。血吸蟲病免疫診斷技術(shù) 現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用技術(shù)規(guī)范 一、目前常用的血吸蟲病免疫診斷類型與方法 1) 凝集反應(yīng) 直接凝集試驗(yàn) 間接凝集試驗(yàn) 正向間接凝集試驗(yàn) 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（ IHA） 反向間接凝集試驗(yàn) 間接凝集抑制試驗(yàn) 2) 沉淀反應(yīng) 環(huán)卵沉淀試驗(yàn)（ COPT） 3) 免疫電泳技術(shù) 經(jīng)典的免疫電泳技術(shù) 對(duì)流免疫電泳 酶標(biāo)記抗原對(duì)流免疫電泳 雙向酶標(biāo)對(duì)流免疫電泳 免疫印跡技術(shù) 4) 免疫標(biāo)記技術(shù) 酶免疫測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸咐試驗(yàn)（ ELISA） 免疫熒光法 放射免疫測(cè)定法 免疫膠體金技術(shù) 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)（ DIGFA滲濾法） 免疫膠體染料試驗(yàn) 膠體染料試紙條試驗(yàn)（ DDIA層析法） 化學(xué)發(fā)光免疫分析 二、未稍采血（塑料管法）操作規(guī)程 1．采血部位 通常取手指或耳垂。耳垂末梢血循環(huán)較差，受氣溫影響較大，冬季最好不用；由于耳垂采血痛感較輕，病人容易接受，可先充分按摩，改善耳垂末梢循環(huán)。 2．采血器材 一次性三棱針或彈簧刺血針、 75%的酒精、無菌脫脂棉球、聚乙烯塑料管（直徑 2mm，長(zhǎng) 8cm）、鑷子、酒精燈等。 2）待干后用左手固定采血部位，右手持消毒針迅速刺入皮膚 23mm，取 出刺針，血液即自行溢出。 3）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出的血即可采用。 5）采血完畢，刺處用消毒棉球拭擦干凈。 7）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或離心后，剪去塑料管之 血球部分，將血清移至中部， 用于檢測(cè)。 4．注意事項(xiàng) ? 采血部位要嚴(yán)格消毒，做到一人一針；
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