植物基因工程中的λ噬菌體載體-在線瀏覽
2025-02-17 05:03本頁面
【正文】 物基因工程技術(shù)中尤為重要的 是載體，不同目的基因需要采用不同的載體。 ? 噬菌體是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的細(xì)菌病毒，結(jié)構(gòu)簡單、基因數(shù)少，是分子生物學(xué)與基因工程的良好實驗系統(tǒng)。 ? 噬菌體具有高效率的感染性和自主復(fù)制繁殖性能，使它能高效導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能使攜帶的外源基因在受體細(xì)胞中高效擴增，所以噬菌體被開發(fā)成基因工程的有用載體。 DNA重組技術(shù)一般需要 λ噬菌體進(jìn)入溶菌狀態(tài)。 其中使用最多的是入噬菌體。 左臂：從 A到 J長約20kb，其中的基因編碼構(gòu)成頭部、尾部、尾絲對組裝完整噬菌體所需要的蛋白質(zhì)。 ? 基因組長約 50kb ， 至少包括 61個基因，除少數(shù)例外，大多數(shù)編碼基因均是按功能的相似性成簇排列。 ? 在 λDNA雙鏈分子的兩個 5’ 端各有 12個核苷酸單鏈的互補粘性末端， 且兩者的核苷酸序列互補，當(dāng) λ噬菌體 感染宿主細(xì)胞后 ，其 DNA可迅速通過粘性末端配對而成雙鏈環(huán)狀 DNA分子，這種由粘性末端結(jié)合形成的雙鏈區(qū)域稱為 cos位點。粘?？刹迦?45kb長的外源 DNA，然后用λ 噬菌體外殼蛋白包裝成噬菌體，感染大腸桿菌后，粘粒的 DNA能以質(zhì)粒的形式在細(xì)菌中繁殖而被克隆。 當(dāng)噬菌體感染宿主細(xì)胞后 , 雙鏈 DNA 分子通過 cos 而成環(huán)狀。在此期間 , 噬菌體有兩條復(fù)制途徑可供選擇 : 一是裂解生長。另一是溶源性生長。 由于噬菌體頭部包裝容量的限制，重組 λ DNA分子大小只能在 39— 52kb之間。 λ噬菌體載體的構(gòu)建 構(gòu)建方式： 插入型。 置換型。這種載體叫置換型載
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