基因工程載體人工染色體載體-在線瀏覽
2024-10-22 20:50本頁面
【正文】 ons. ? Transfer of them was achieved using a triparental mating. Triparental mating ? An strain A carrying a helper plasmid able to mobilize the intermediate vector in trans ? The strain B carrying the rebinant intermediate vector ? carrying the disarmed Ti plasmid 3. Binary vector ? TDNA does not need to be physically attached to the rest of the Ti plasmid ? Use separate plasmids to supply the disarmed TDNA and the virulence functions P n o s K a n T n o s P c a M V G U S T n o sp B I 1 2 1K a nr（） 1 3 k bV i rp A L 4 4 0 41 7 0 k b? The small plasmid can be used to inserted foreign gene ? When the two plasmids present together in the same cell, the TDNA carried by pBI121 is transferred to the plant chromosomal DNA by proteins coded by genes carried by pAL4404 Ti質(zhì)粒及其衍生載體 Ti質(zhì)粒是約 200500kb的環(huán)狀 DNA分子 ， 很難直接使用 ， 故需對其加以改造 ， 構建出 Ti質(zhì)粒的衍生載體系統(tǒng) ， 廣泛用作植物基因工程中的載體： （ 1） 雙元載體 (binary vectors） 如 pBin19載體 ， 具有原核生物的卡那霉素抗性基因(AphⅠ) 作為細菌選擇標記 ， 真核生物的卡那霉素抗性基因 (nosNptⅡ) 作為植物的選擇標記 ，pUC19的多克隆位點及 α 互補顯色標記 （ 2） 共整合載體 (integrated vectors) （ 1）雙元載體系統(tǒng)（ binary vector） 具有兩個質(zhì)粒 —— 穿梭質(zhì)粒和 Ti質(zhì)粒。 Ti質(zhì)粒的衍生載體 ?發(fā)根農(nóng)桿菌存在另一種質(zhì)粒， Ri質(zhì)粒。 發(fā)根農(nóng)桿菌侵染后植物細胞產(chǎn)生許多不定根，這種不定根生長迅速，不斷分枝成毛狀，故稱之為毛狀根，也稱為發(fā)狀根，分別簡稱為毛根或發(fā)根， Ri質(zhì)粒為根誘導質(zhì)粒。 Ri質(zhì)粒 T區(qū)與 Ti質(zhì)粒的 TDNA十分相似： ?① T區(qū)的左右邊界序列。 ?② TLDNA區(qū)。 ?③ TRDNA區(qū)。 ags基因在轉化的初期起著重要的作用，是 不定根產(chǎn)生的關鍵 Ri質(zhì)粒 CaMV克隆載體 ? 含 1個約 8kb的環(huán)狀雙鏈 DNA分子； ? 用于十字花科和少數(shù)非十字花科的植物基因轉移； ? 其感染對植物有害，不能直接做載體； ? CaMV的 DNA在植物細胞中能高水平轉錄 35S RNA，其啟動子是一強啟動子。 三、動物載體 質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細菌中繁殖，不能滿足真核 DNA重組需要。由于動物細胞的培養(yǎng)和操作較復雜、花費也較多，因而病毒載體構建時一般都把細菌質(zhì)粒復制起始序列放置其中。目前病毒載體常用者有改造來自猴腎病毒 SV40（ Simian Virus 40）、逆轉錄病毒和昆蟲桿狀病毒等，使用這些病毒載體的目的多為將目的基因或序列放入動物細胞中表達或試驗其功能、或作基因治療等。猴病毒 40是球形動物病毒，直徑 40nm，呈 20面體，有一個共價閉環(huán)的雙鏈 DNA基因組，全長 5244bp。被 SV40感染的細胞都會出現(xiàn)SV40的 T抗原。表明猴腎細胞的拼接系統(tǒng)能有效地處理小鼠 β 珠蛋白的初級轉錄本。 逆轉錄病毒是 RNA病毒，它有三個基因：g
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