基因工程載體人工染色體載體-wenkub.com
2024-09-18 20:50 本頁(yè)面
【正文】 ? 4. 由于分子克隆載體的大小決定外源 DNA插入片段的大小，兩者呈反比關(guān)系，因而在建立載體時(shí)千方百計(jì)地減小載體分子量。如何解釋這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? 可設(shè)計(jì)何種實(shí)驗(yàn)證明你的解釋是正確的 ? ? 3．當(dāng)把一外源 DNA插入一克隆載體后，重組 DNA分子轉(zhuǎn)化 細(xì)胞所獲得的重組子分子可根據(jù)其限制酶圖譜分為兩類，即這兩類轉(zhuǎn)化子中所含的重組 DNA分子的限制酶圖譜不一樣，從這兩類轉(zhuǎn)化細(xì)胞中分離到的重組DNA分子可用限制酶回收插入的片段。 （ 2）受體：各種中間宿主與終宿主的遺傳背景，如遺傳物質(zhì)的傳遞方式 (包括人為的方法 )， DNA限制修飾系統(tǒng)， DNA重組基因特點(diǎn)，基因產(chǎn)物修飾系統(tǒng)，即轉(zhuǎn)錄與翻譯后修飾系統(tǒng)。當(dāng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞株后，逆轉(zhuǎn)錄病毒的 RNA進(jìn)入輔助病毒的外殼蛋白，成為病毒顆粒。 ? 只要將外源目的基因組入原病毒 DNA的合適克隆位點(diǎn)，就能在感染的動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。 逆轉(zhuǎn)錄病毒是 RNA病毒，它有三個(gè)基因：gag編碼病毒的核心蛋白； pol編碼逆轉(zhuǎn)錄酶；env編碼病毒的被膜糖蛋白。被 SV40感染的細(xì)胞都會(huì)出現(xiàn)SV40的 T抗原。目前病毒載體常用者有改造來(lái)自猴腎病毒 SV40（ Simian Virus 40）、逆轉(zhuǎn)錄病毒和昆蟲桿狀病毒等，使用這些病毒載體的目的多為將目的基因或序列放入動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)或試驗(yàn)其功能、或作基因治療等。 三、動(dòng)物載體 質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細(xì)菌中繁殖，不能滿足真核 DNA重組需要。 ?③ TRDNA區(qū)。 Ri質(zhì)粒 T區(qū)與 Ti質(zhì)粒的 TDNA十分相似： ?① T區(qū)的左右邊界序列。 Ti質(zhì)粒的衍生載體 ?發(fā)根農(nóng)桿菌存在另一種質(zhì)粒， Ri質(zhì)粒。 在一系列酶的參與下整合進(jìn)植物基因組。 （ 4） Ori區(qū) (origin of replication) 該區(qū)段基因調(diào)控 Ti質(zhì)粒的自我復(fù)制，故稱之為 復(fù)制起始區(qū) 。 ? Vir區(qū)的毒性基因是 TDNA轉(zhuǎn)移所必需的 ，毒性基因可以順式及反式兩種方式控制 TDNA轉(zhuǎn)移 。 TDNA攜帶的致瘤基因是一些與激素合成有關(guān)的基因，由于激素合成基因使細(xì)胞處于不停的分裂狀態(tài)，形成冠癭瘤，不能進(jìn)行細(xì)胞分化。去除右邊界序列，將使 TDNA失去轉(zhuǎn)移和整合的功能；左邊界的缺失，對(duì)致瘤性無(wú)明顯影響。 BAC載體本身分子量小 ， 具有氯霉素抗性選擇基因及多克隆位點(diǎn)。 14 細(xì)菌人工染色體 （ Bacterial artificial chromosome,BAC） 細(xì)菌人工染色體 （ bacterial artificial chromosome， BAC） ◆ BAC載體是基于細(xì)菌的 性因子 (F因子 )質(zhì)粒 的一些特點(diǎn)構(gòu)建的。 （ 3）復(fù)制起點(diǎn)（ ORI） 約 100bp的自主復(fù)制序列（ ARS）。 YAC含有酵母染色體端粒（telesome）、著絲點(diǎn) (centromere)及復(fù)制起點(diǎn)等功能序列，可插入長(zhǎng)度達(dá) 200500kb的外源 DNA，導(dǎo)入酵母細(xì)胞可以隨細(xì)胞分裂周期復(fù)制繁殖供作克隆，成為人基因組研究計(jì)劃的重要 酵母人工染色體 （ yeast artificial chromosome, YAC) 酵母人工染色體 （ yeast artificial chromosome， YAC） ◆ 酵母人工染色體是另一類酵母穿梭載體。具有自主復(fù)制序列、克隆位點(diǎn)以及可在細(xì)菌和酵母菌中選擇的標(biāo)記基因。 （ 2）端粒（ TEL） （真核生物中只有酵母菌有 ARS） 兩個(gè)端粒序列 Tel。 F因子在細(xì)菌接合時(shí)轉(zhuǎn)移 1Mb的細(xì)菌染色體片段。 Structure of a bacterial artificial chromosome (BAC), used for cloning large fragments of donor DNA. CMR is a selectable marker for chloramphenicol resistance. oriS, repE, parA, and parB are F genes for replication and regulation of copy number. cosN is
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