細(xì)胞工程ppt課件-在線瀏覽
2024-10-22 20:17本頁面
【正文】 細(xì)胞碩利增殖生長。牛血清分為 胎牛血清和犢牛血清 ，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的成分。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、增殖刺激因子(MSA)、類胰島素生長因子 (IGFl、 IGF2)等。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長的作用。血清對細(xì)胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。 無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長有效因子，激素等。 ? PH調(diào)整液： NaHCO3溶液、 HEPES溶液 （ 二羥乙基哌嗪乙烷磺酸 ） ? 細(xì)胞消化液 : 胰蛋白酶溶液． EDTA溶液．膠原酶溶液 ? 抗生素溶液： 1)青、鏈霉素 :每毫升培養(yǎng)液含 100U青霉素和100ug鏈霉素 . 2)卡那霉素：終濃度為 50ug/ml培養(yǎng)液。 6)、無污染環(huán)境 ? 培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室 準(zhǔn)備室 風(fēng)淋 培養(yǎng)室 ? 專用于組織細(xì)胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣間、緩沖間、操作間。 ? 操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)及倒置顯微鏡等。風(fēng)淋室的板壁采用輕質(zhì)隔熱夾芯鋼板，吹淋板采用進(jìn)口不銹鋼制作，吹淋口方向可調(diào)，風(fēng)淋時間可在 3099秒間的調(diào)整。 超凈工作臺 ?也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)在于能恒定地供應(yīng)一定量的 CO2,一般 5%即可 維持培養(yǎng)液 PH值穩(wěn)定 。 ? 水純化裝置 細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。 過濾裝置 ? 各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進(jìn)行除菌消毒處理。 ? 細(xì)胞冷凍貯存器 細(xì)胞冷凍貯存具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)，目前各實(shí)驗室主要使用液氮容器貯存細(xì)胞。 ? 洗刷消毒間： 烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。 無菌操作的要領(lǐng) ? 由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏機(jī)體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。 ? 洗手 操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用 %新潔爾滅或 75%的酒精棉球擦拭。 注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過長。 ? 吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼 ,否則會燒焦形成炭膜 ,再用時會將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。 酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立 ,易增加落菌機(jī)會）。 的條件 pH 應(yīng)該加入哪些物質(zhì)？這些物質(zhì)如何調(diào)配？ 在使用合成培養(yǎng)基時通常需加入血清、血漿等天然成分，目的是什么？ ? 蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 ? 健康細(xì)胞培養(yǎng) 培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植 ? 細(xì)胞的生理、藥理、病理研究 用于篩選抗癌藥物 植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較 比較項目 植物組織培養(yǎng) 動物細(xì)胞培養(yǎng) 原理 培養(yǎng)基性質(zhì) 培養(yǎng)基特有成分 培養(yǎng)結(jié)果 培養(yǎng)目的 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞增殖 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 動物血清 植物體 細(xì)胞株、細(xì)胞系 快速繁殖、培育無病毒植株 獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白 思考： 為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？ 動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？ 為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？ 動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。 二、單克隆抗體 什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴細(xì)胞與抗體 １． B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。 ３．每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。 特點(diǎn)： 特異性強(qiáng)、靈敏度高 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？ ? 利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 ? 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 ? 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞 ? 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞 單克隆抗體制備過程 注射抗原 B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 細(xì)胞融合、篩選 雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 篩選，繼續(xù)培養(yǎng) 足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群 體外培養(yǎng) 注射到小鼠腹腔 單克隆抗體 思考： 本過程利用了哪些原理？ 免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理 為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與 B細(xì)胞融合？ 這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有 B細(xì)胞分
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