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2024-10-22 20:22本頁面
【正文】 人工種子 1978年植物組織培養(yǎng)學家 Muralshige提出的設想 人工種子 29 人工種子 優(yōu)點： 組織培養(yǎng)的方法可以獲得大量的胚狀體，成本低 根據(jù)植物對生長的要求配置不同成分的“種皮” 不受氣候、季節(jié)、地域的限制 保留優(yōu)良性狀 可以在人工種子中加入某些農(nóng)藥、菌肥、有益微生物、激素等 30 單倍體育種 方法： 花藥、花粉、為授粉的 子房或胚珠 離體培養(yǎng) 技術： 組織培養(yǎng)獲得單倍體 秋水仙素處理單倍體的幼苗，使染色體加倍 優(yōu)點： 明顯縮短了育種年限 后代穩(wěn)定遺傳 31 第二節(jié) 動物細胞工程 動物細胞工程常用的技術 動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、細胞核移植、染色體工程、胚胎工程、干細胞與組織工程、轉(zhuǎn)基因生物與生物反應器等。 20世紀 40年代 ,Carrel和 Earle分別建立了雞胚心肌細胞和小鼠結締組織細胞系的Ｌ 細胞系。 動物細胞的的結構 圖片來自 動物細胞培養(yǎng)技術的建立 33 胚胎或幼齡動物的組織器官 細胞懸浮液 原代 細胞 無限傳代 剪碎 消化 原代培養(yǎng) 動物胚胎或幼齡動物的組織 、 器官 ， 它們細胞增殖能力強 ， 分裂旺盛 ， 分化程度低 ， 容易培養(yǎng) 。 傳代培養(yǎng)的細胞都能一直傳代下去嗎？ 有些為何能一直傳下去？ 連續(xù)細胞系：能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系 有限細胞系：不能連續(xù)培養(yǎng)下去的 細胞系 培養(yǎng)過程中發(fā)生 突變或轉(zhuǎn)化 的細胞系 —— ① 惡性細胞系，致癌性。 物理污染 化學污染 生物污染 細胞培養(yǎng)物污染的防治 36 細胞培養(yǎng)物污染的防治 最常見的細菌種類： 有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及革蘭氏陰性菌，如大腸桿菌、假單胞菌等，其中又以白色葡萄球菌較常見。 37 常見真菌種類 ： 煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、 白念珠菌、酵母菌等 一般預防與清除 制霉菌素 細胞培養(yǎng)物污染的防治 38 支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的最小微生物，最小直徑 ，變形能力大，能通過濾器，光鏡下難以看清它的形態(tài)結構。 細胞培養(yǎng)物污染的防治 支原體污染 一般預防與清除 慶大霉素或卡那霉素，根除困難 39 細胞培養(yǎng)物污染的防治 病毒污染 正常細胞 病變細胞 潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 40 動物細胞冷凍保存 冷凍保存細胞的解凍與復蘇 細胞培養(yǎng)與傳代 細胞冷凍 保存 41 細胞培養(yǎng)物中加入 Trypsin EDTA進行消化。 洗滌離心。 移入凍存管，置冰上或 4 ℃ 冰箱 30分鐘。 液氮保存。 1975年，免疫學家 Kohler和 Milstein利用仙臺病毒誘導綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，建立了小鼠淋巴細胞雜交瘤技術。 每個 B淋巴細胞僅專一地產(chǎn)生、分泌一種針對某 種抗原決定簇的特異性抗體，而腫瘤細胞可以無限 增殖，因此雜交瘤細胞可在體外培養(yǎng)或移植到體內(nèi) 條件下分泌大量單克隆抗體。 單克隆抗體制備 45 設備準備 清洗 烘干 安裝 消毒 培養(yǎng)基制備 存水制備 試劑制備 除菌 檢測 細胞準備 種子庫建立 細胞復蘇 擴增 檢測 細胞培養(yǎng) 溫度控制 通氣 pH控制 攪拌 檢測 細胞數(shù) 存活率 葡萄糖 pH 分批式 （ batch culture) 流加式 (feeding culture) 半連續(xù)式 (semicontinuous culture) 連續(xù)式 (continuous culture) 灌流式 (perfusion culture) 大規(guī)模培養(yǎng)技術的操作方式 貼壁培養(yǎng) 懸浮培養(yǎng) 固定化培養(yǎng) 細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術 46 Vero細胞和狂犬病毒的培養(yǎng)
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