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2024-09-15 04:40本頁面
【正文】 ）進入受體細(xì)胞，具有自我復(fù)制能力，使外源DNA片段在受體細(xì)胞中得到擴增和表達(dá)，不被受體細(xì)胞的酶系統(tǒng)所破壞的一類DNA分子?？寺≥d體：用于在受體細(xì)胞中進行目的基因擴增的載體。表達(dá)載體。穿梭載體：能在兩種不同的生物體內(nèi)復(fù)制的載體。嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒: 拷貝數(shù)為1至幾個的質(zhì)粒。氯霉素擴增：用氯霉素抑制蛋白質(zhì)合成并阻斷細(xì)菌染色體復(fù)制時，帶有pMB1或ColEI復(fù)制子的質(zhì)粒扔會利用豐富的原料大量復(fù)制的的現(xiàn)象。接合質(zhì)粒。質(zhì)粒有哪些性質(zhì)：自主復(fù)制性、可擴增性、不親和性、轉(zhuǎn)移和遷移、重組性?？滤官|(zhì)粒載體：是一類人工構(gòu)建的含有l(wèi) DNA cos 位點、 噬菌體包裝有關(guān)的DNA短序列、質(zhì)粒DNA復(fù)制起點、抗生素標(biāo)記基因等元件的特殊質(zhì)粒載體。人工染色體：指人工構(gòu)建的含有天然染色體基本功能單位的載體系統(tǒng)。）、細(xì)菌人工染色體(BAC)、源于噬菌體P1的人工染色體(PAC)，它們的特點是載體的容載能力擴大,人工染色體具備三個元件：復(fù)制起始區(qū)/自主復(fù)制序列，參與染色體DNA復(fù)制起始結(jié)構(gòu)的形成；著絲粒，負(fù)責(zé)染色體向子細(xì)胞傳遞。λDNA作為載體的優(yōu)點：1) λDNA可在體外包裝成噬菌體顆粒，能高效感染大腸桿菌；2) λDNA作為載體，其裝載外源DNA的能力為25kb，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于質(zhì)粒的裝載量；3) 重組λDNA的篩選較為方便, 可進行正向篩選和雜交篩選；4) 重組λDNA分子的提取比質(zhì)粒容易PCR反應(yīng)體系的成份：Taq酶、模板DNA、引物、dNTP、PCR 緩沖液PCR反應(yīng)的步驟：①DNA變性：（90℃96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。③延伸：（70℃75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補的DNA鏈。目的基因。基因文庫：是某種特定的生物所含有的能夠包含所有基因的足夠數(shù)目的克隆的集合cDNA文庫。構(gòu)建步驟：分離純化總RNA及mRNA；?cDNA第一鏈的合成?雙鏈cDNA合成?與載體重組、轉(zhuǎn)化基因組文庫：某種生物的基因組的全部遺傳信息通過克隆載體貯存在一個受體菌的群體中，這個群體即為這種生物的基因組文庫。任意兩條單鏈核酸分子都有相互形成堿基對的趨勢。如果多聚核苷酸鏈?zhǔn)腔パa的，堿基對的大量形成使雙鏈分子穩(wěn)定。cDNA文庫的構(gòu)建步驟：分離純化總RNA及mRNA（P104110）、cDNA第一鏈的合成、雙鏈cDNA合成、與載體重組、轉(zhuǎn)化從基因文庫中獲取目的基因的方法：PCR法、化學(xué)合成法、分離目的基因的方法和原理：1從生物基因組群體中分離目的基因（原核生物基因組較小,基因容易定位,用限制性內(nèi)切酶將基因組切成若干段后,用帶有標(biāo)記的核酸探針,.）2人工合成目的基因
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