高二生物多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段-在線瀏覽
2025-01-12 23:20本頁面
【正文】 過 3’、 5’、磷酸二脂鍵彼此連接起來形成脫氧核苷酸鏈。堿基對的組成有特定的規(guī)律：即腺嘌呤一定與胸腺嘧啶配對，鳥嘌呤一定同胞嘧啶配對 利用堿基互補(bǔ)配對規(guī)律的計(jì)算 規(guī)律一： DNA雙鏈中的兩條互補(bǔ)鏈的堿基相等，任意兩個互補(bǔ)的堿基之和相等即 A=T， G=C。即： A+G＝ T+C＝ A+C＝ T+G＝ 50%，（ A+G） /(T+C)＝ (A+C)/(G+T)＝ (T+C)/(A+G)＝ 1 規(guī)律二：在 DNA雙鏈中的一條單鏈 (A+G)/(T+C)的值與另一條互補(bǔ)鏈的 (A+G) /(T+C)的值互為倒數(shù)關(guān)系 規(guī)律三： DNA雙鏈中，一條單鏈的 (A+T)/(G+C)的值與另一條互補(bǔ)鏈的 (A+T)/(G+C)的值是相等的，也與整個 DNA分子中的 (A+T)/(G+C)的值相等 （二） DNA分子的特性 穩(wěn)定性 在 DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)的內(nèi)側(cè)， 通過 氫鍵 形成的堿基對，使兩條脫氧核苷酸長鏈穩(wěn)固的并聯(lián)起來 例題：甲 DNA分子中， A和 T占 25％， G和 C占75%，乙 DNA分子中， G和 C占 25％， A和 T 占 75%，哪一個穩(wěn)定？ 答：甲 DNA分子比乙 DNA分子穩(wěn)定。 ④ 切掉引物生成岡崎片斷 在核酸酶的作用下切掉引物。形成一條完整的新的 DNA鏈。 C的溫度范圍內(nèi)， DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個過程稱為變性 ② 當(dāng)溫度緩慢降低后，兩條彼此分離的 DNA鏈又會重新結(jié)合成雙鏈 ③ PCR利用了 DNA的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合，現(xiàn)在使用的 PCR儀實(shí)質(zhì)上也是一臺能夠自動調(diào)控溫度的儀器 高溫解決了打開雙鏈的問題，但是，又導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題，耐高溫的 Taq DNA聚合酶解決了高溫導(dǎo)致 DNA聚合酶失活的問題，促成了 PCR技術(shù)的自動化 Taq DNA聚合酶的應(yīng)用 緩沖液需要為 PCR反應(yīng)提供的物質(zhì) DNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，耐熱的 DNA聚合酶，同時(shí)通過控制溫度使 DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行 PCR技術(shù)是 80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。一定時(shí)間后，使模板 DNA雙鏈或經(jīng) PCR擴(kuò)增形成的雙鏈 DNA解離，使成為單鏈，以便于它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備 循環(huán)過程 靶序列 靶序列 PCR 循環(huán)第一步 ：加熱變性 ② 復(fù)性（退火） 模板 DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降到 500C左右，引物與模板 DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對
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