【正文】 負(fù) 責(zé) 人：范欣生 研究員科研骨干：錢(qián)大瑋 研究員 尚爾鑫 助理研究員 郭建明 助理研究員經(jīng)費(fèi)比例：8 %課題二 “半蔞貝蘞及攻烏”配伍關(guān)系與毒效表征的基礎(chǔ)研究主要研究?jī)?nèi)容圍繞 “十八反”中藥配伍禁忌理論研究的總體目標(biāo)，針對(duì)“半蔞貝蘞及”與烏頭反藥配伍組合的藥性與功效特點(diǎn)，開(kāi)展“半蔞貝蘞及攻烏”配伍關(guān)系與毒效表征的基礎(chǔ)研究。最終闡明中藥十八反“半蔞貝蘞及攻烏”反與不反、如何反以及為什么反的科學(xué)內(nèi)涵?！鞍胧V貝蘞及攻烏”致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)研究采用體外化學(xué)組與藥物代謝物組學(xué)等方法，研究“半蔞貝蘞及攻烏”配伍致毒/增毒的化學(xué)實(shí)質(zhì)；明確藥物配伍在體外發(fā)生的化學(xué)成分變化，發(fā)現(xiàn)藥物進(jìn)入體內(nèi)后藥物發(fā)生的代謝物變化?！鞍胧V貝蘞及攻烏”致毒/增毒物質(zhì)相互作用規(guī)律研究采用動(dòng)物整體ADME、藥物吸收體外動(dòng)態(tài)仿生系統(tǒng)及藥物代謝酶等技術(shù)，在體、離體實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，研究“半蔞貝蘞及攻烏”配伍致毒/增毒物質(zhì)毒代動(dòng)力學(xué)特征及吸收、代謝等相互作用規(guī)律。計(jì)算藥物配伍前后的中毒劑量、有效量和安全范圍，結(jié)合各毒效相關(guān)成分的含量變化，對(duì)其量毒效數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性模擬建模，考察和評(píng)價(jià)反藥配伍前后在體內(nèi)致毒物質(zhì)的代謝速率、累積規(guī)律和蓄積致毒的時(shí)空關(guān)系，揭示其量毒時(shí)效關(guān)系及其變化規(guī)律。研究目標(biāo)完成“半蔞貝蘞及攻烏”系統(tǒng)毒性評(píng)價(jià)研究，明確回答“半蔞貝蘞及攻烏”配伍反與不反的問(wèn)題；完成“半蔞貝蘞及攻烏”相反配伍致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)及機(jī)理研究，明確“半蔞貝蘞及攻烏”配伍致毒/增毒的化學(xué)實(shí)質(zhì)及生物學(xué)基礎(chǔ)；完成“半蔞貝蘞及攻烏”相反配伍致毒/增毒物質(zhì)毒代動(dòng)力學(xué)及相互作用規(guī)律研究，通過(guò)量毒時(shí)效關(guān)系與體內(nèi)過(guò)程變化研究，闡明“半蔞貝蘞及攻烏”配伍致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)相互作用規(guī)律；培養(yǎng)碩士研究生810名，博士研究生35名；在國(guó)內(nèi)外期刊發(fā)表高質(zhì)量學(xué)術(shù)論文2025篇，SCI收錄論文10篇以上；申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利1項(xiàng)?！霸尻燔尽迸c甘草配伍毒性評(píng)價(jià)體系的建立及其配伍毒性評(píng)價(jià)研究建立由經(jīng)典毒理學(xué)、系統(tǒng)毒理學(xué)、毒性快速篩查技術(shù)和安全藥理學(xué)方法組成的、適宜于中藥“十八反”反藥配伍組合毒性研究的評(píng)價(jià)體系，依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》所規(guī)定的劑量范圍，通過(guò)對(duì)“藻戟遂芫”與甘草反藥配伍組合在整體、器官、細(xì)胞和分子水平進(jìn)行系統(tǒng)地毒理學(xué)研究和安全性評(píng)價(jià)，揭示“藻戟遂芫”與甘草配伍前后的毒性變化及其規(guī)律?！霸尻燔尽迸c甘草配伍的毒效物質(zhì)基礎(chǔ)研究利用極性分級(jí)溶出法、各種色譜方法，對(duì)單味藥及反藥配伍組合進(jìn)行化學(xué)物質(zhì)組分的系統(tǒng)分離，并對(duì)所得單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，建立化學(xué)物質(zhì)庫(kù)；進(jìn)而對(duì)甘草系列相反藥物配伍前后的化學(xué)物質(zhì)變化進(jìn)行研究，比較配伍前后各成分含量、類(lèi)型的改變，并與毒效作用進(jìn)行關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)與相反配伍和毒效作用相關(guān)的化學(xué)成分及其含量；采用制備色譜、成分剔除等技術(shù)分離制備毒效相關(guān)成分，確定相反配伍物質(zhì)基礎(chǔ)；為全面考察相反配伍的成分變化，針對(duì)單味藥和相反配伍制成的湯劑/散劑，分析其成分差異，研究在不同環(huán)境下各藥物毒效物質(zhì)的溶出釋放規(guī)律。計(jì)算藥物配伍前后的中毒劑量、有效量和安全范圍，結(jié)合各毒效相關(guān)成分的含量變化，對(duì)其量毒效數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性模擬建模，考察和評(píng)價(jià)反藥配伍前后在體內(nèi)致毒物質(zhì)的代謝速率、累積規(guī)律和蓄積致毒的時(shí)空關(guān)系，揭示其量毒時(shí)效關(guān)系及其變化規(guī)律。“藻戟遂芫”與甘草各配伍組合體內(nèi)過(guò)程及相互作用研究以藥物體內(nèi)過(guò)程各環(huán)節(jié)為研究重點(diǎn)，探討甘草分別與海藻、大戟、芫花、甘遂配伍前后的吸收特點(diǎn)、分布規(guī)律、代謝轉(zhuǎn)化過(guò)程、毒性成分排泄及蓄積致毒特征?！霸尻燔尽迸c甘草各反藥配伍組合致毒/增毒的分子機(jī)制研究采用細(xì)胞、分子生物學(xué)技術(shù)，研究該組反藥配伍組合對(duì)腸上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞功能損傷和凋亡誘導(dǎo)的毒性作用。在此基礎(chǔ)上，以計(jì)算機(jī)分子對(duì)接技術(shù)為先導(dǎo)，快速篩選反藥毒效物質(zhì)的生物學(xué)靶標(biāo)；并集成多種光譜/色譜等技術(shù)開(kāi)展小分子毒效物質(zhì)與關(guān)鍵靶標(biāo)間的相互作用研究；通過(guò)毒性靶標(biāo)群的生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，揭示該組反藥配伍致毒增毒的分子網(wǎng)絡(luò)機(jī)制。通過(guò)以上研究，為系統(tǒng)揭示“十八反”中藥配伍禁忌的科學(xué)內(nèi)涵提供支撐，為豐富和發(fā)展中藥配伍禁忌理論提供科學(xué)依據(jù)。培養(yǎng)高層次青年人才2–4名。首先進(jìn)行“諸參辛芍叛藜蘆”相關(guān)配伍毒性評(píng)價(jià)研究，明確“諸參辛芍叛藜蘆”相反配伍的致毒/增毒特點(diǎn)；明確“諸參辛芍叛藜蘆”中主要藥材的化學(xué)組成，并考察相反配伍的體內(nèi)外化學(xué)成分變化，明確相反配伍致毒/增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)；在體、離體實(shí)驗(yàn)相結(jié)合考察相反配伍致毒/增毒的物質(zhì)間的相互作用規(guī)律及其生物學(xué)基礎(chǔ)。1. 、““諸參辛芍”與藜蘆配伍的毒性評(píng)價(jià)研究以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，參照《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用傳統(tǒng)毒理學(xué)、毒性快速篩查技術(shù)、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術(shù)等相結(jié)合，進(jìn)行“諸參辛芍叛藜蘆”配伍毒性評(píng)價(jià)研究，確認(rèn)已知毒性，發(fā)現(xiàn)潛在毒性。進(jìn)一步利用毒性快速篩查技術(shù)、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術(shù)等進(jìn)行毒性確認(rèn)，最終明確相反配伍致毒/增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)。4. 、“諸參辛芍”與藜蘆配伍的致毒/增毒物質(zhì)生物學(xué)機(jī)制研究 采用分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、現(xiàn)代色譜分析和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，對(duì)藜蘆中典型毒性成分的代謝特征進(jìn)行動(dòng)態(tài)性觀察，找到受調(diào)控的P450酶及對(duì)藜蘆有毒中藥成分代謝影響及其與毒性效應(yīng)的機(jī)制；利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)尋找并確定“諸參辛芍叛藜蘆”中反藥組合相互作用后與藥物毒性成分發(fā)揮作用相關(guān)的肝臟代謝、信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中蛋白質(zhì)組的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，尋找配伍藥物毒效成分的體內(nèi)作用靶點(diǎn)及診斷標(biāo)志物，從分子水平揭示藜蘆配伍致毒規(guī)律，進(jìn)而系統(tǒng)揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍藥物相互作用可能機(jī)制。預(yù)期目標(biāo)通過(guò)安全性評(píng)價(jià)體系的建立與毒性評(píng)價(jià)，構(gòu)建基于PXR～CYP3A通路的細(xì)胞篩選模型，從動(dòng)物和細(xì)胞兩個(gè)層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關(guān)系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反；揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機(jī)制。 通過(guò)安全性評(píng)價(jià)體系的建立與毒性評(píng)價(jià)，構(gòu)建基于PXR～CYP3A通路的細(xì)胞篩選模型，從動(dòng)物和細(xì)胞兩個(gè)層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關(guān)系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反。通過(guò)UPLCQTOF技術(shù)研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質(zhì)基礎(chǔ)研究并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)。以人參藜蘆藥對(duì)作為研究范例，進(jìn)行體內(nèi)過(guò)程研究，闡明人參藜蘆配伍前后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異，明確其體內(nèi)過(guò)程，闡明其體內(nèi)作用物質(zhì)與毒性的關(guān)系。通過(guò)在酶活性水平、mRNA水平和蛋白水平建立基于P450酶的中藥毒性評(píng)價(jià)技術(shù)平臺(tái)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù) 尋找“諸參辛芍叛藜蘆”單獨(dú)或配對(duì)使用對(duì)P450酶及其他肝臟蛋白質(zhì)豐度、翻譯后修飾狀態(tài)的改變，并確定其詳細(xì)的修飾位點(diǎn)。研究成果將以論文形式在國(guó)際、國(guó)內(nèi)重要學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表有價(jià)值的學(xué)術(shù)論文1520篇，其中SCI論文5篇以上，并總結(jié)申報(bào)軍隊(duì)國(guó)家級(jí)科技獎(jiǎng)勵(lì)。承擔(dān)單位：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 北京蛋白質(zhì)組研究中心負(fù) 責(zé) 人：王宇光 副研究員科研骨干：馬增春 副研究員 梁乾德 副研究員 郝運(yùn)偉 副研究員 孫愛(ài)華 副研究員經(jīng)費(fèi)比例：16%課題五 基于妨害治療的中藥“十八反”配伍基礎(chǔ)研究主要研究?jī)?nèi)容圍繞項(xiàng)目總體目標(biāo)，以中醫(yī)藥配伍理論為指導(dǎo)、歷代臨床用藥經(jīng)驗(yàn)為參考、前期研究為基礎(chǔ)為依托，從妨害治療的角度研究中藥“十八反”配伍禁忌。以此闡述“中藥藥對(duì)兩藥配伍使用時(shí)即使既使不發(fā)生毒牲性增強(qiáng)現(xiàn)象也不等于安全有效，妨害治療的藥物也不適宜相互配合使用”的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，為十八反配伍禁忌的新涵義的認(rèn)識(shí)提供科學(xué)依據(jù)，最終從妨害治療角度揭示中藥“十八反”反與不反、如何反以及為什么反的科學(xué)內(nèi)涵。然而，古人對(duì)于相反涵義還存在著另外一種認(rèn)識(shí)，《本草衍義補(bǔ)遺》稱(chēng)：“(人參)與藜蘆相反，若服一兩參，入藜蘆一錢(qián)，其一兩參虛費(fèi)矣！戒之！”，其他醫(yī)家也有類(lèi)似這種“相反藥物配伍藥效抵消”的見(jiàn)解。為了提供相關(guān)妨害治療研究的理論基礎(chǔ)，本課題擬較全面收集梳理十八反中藥配伍禁忌的古今文獻(xiàn)，基于梳理并提取歷代醫(yī)家、對(duì)“十八反”中藥的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)代名家醫(yī)案、臨床報(bào)道、醫(yī)院處方和實(shí)驗(yàn)研究中有關(guān)“十八反”中藥物質(zhì)基礎(chǔ)、療效及藥理效應(yīng)、毒性等妨害治療的相關(guān)信息，通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘和知識(shí)發(fā)現(xiàn)尋找其潛在規(guī)律?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫乃幮W(xué)評(píng)價(jià)研究利用能較準(zhǔn)確、客觀反映臨床實(shí)際的動(dòng)物模型及藥效指標(biāo)，觀察“十八反”代表性藥對(duì)配伍組合及其含相反藥對(duì)對(duì)模型動(dòng)物藥效的干預(yù)影響，評(píng)估相反組對(duì)（或和復(fù)方劑）在病理生理?xiàng)l件下是否存在干擾或妨害組對(duì)內(nèi)藥物的某些藥效作用，探索其可能的影響因素。“十八反”配伍妨害治療作用的生物學(xué)基礎(chǔ)研究根據(jù)上述研究結(jié)果或結(jié)論選擇相應(yīng)的動(dòng)物模型和細(xì)胞模型，結(jié)合形態(tài)和功能，從整體、器官、細(xì)胞、分子和基因等不同層次考察配伍藥物或相關(guān)成分產(chǎn)生妨害治療作用的主要藥理機(jī)理和部分生物學(xué)機(jī)制。在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后12名，博士研究生35名，碩士研究生810名。培養(yǎng)博士后1~2名，博士研究生3~5名，碩士研究生8~10名。從現(xiàn)代臨床研究文獻(xiàn)的角度，鑒定探討是否存在“十八反”反藥藥對(duì)配伍組合的臨床使用情況，再進(jìn)一步分析“十八反”藥對(duì)配伍組合、劑量及其方劑的臨床應(yīng)用范圍（病證及分布趨勢(shì)）、特定適用對(duì)象及使用條件。探索“十八反”藥對(duì)及其方劑治療腫瘤臨床研究文獻(xiàn)中使用現(xiàn)狀、配對(duì)規(guī)律、使用劑量、適用病癥的關(guān)聯(lián)性。本著循證醫(yī)學(xué)系統(tǒng)評(píng)價(jià)的思想，根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的臨床研究文獻(xiàn)，系統(tǒng)地評(píng)價(jià)“十八反”藥對(duì)配伍組合及其方劑在臨床治療領(lǐng)域的療效和安全性，為“十八反”藥物使用宜忌的基礎(chǔ)研究及進(jìn)一步的臨床應(yīng)用研究提供證據(jù)。2010年版《中國(guó)藥典用于癭瘤，瘰疬，睪丸腫痛，痰飲水腫”，因此，選擇反映藥物功效，又有臨床基礎(chǔ)海藻玉壺湯為切入點(diǎn)，研究海藻和甘草配伍應(yīng)用的宜忌條件。（2）以古方甘遂半夏湯為切入點(diǎn)，基于臨床用藥特點(diǎn)，設(shè)計(jì)特定的病理模型，從方藥結(jié)合的角度，探討不同給藥劑量、炮制品種、給藥次數(shù)、配伍比例、給藥劑型等因素對(duì)方中“十八反”藥對(duì)配伍組合（甘遂與甘草）生物效應(yīng)的影響，探索其用藥特點(diǎn)及規(guī)律。用于水腫脹滿(mǎn)，胸腹積水，痰飲積聚，氣逆咳喘，二便不利，風(fēng)痰癲癇，癰腫瘡毒”。本課題選擇腹水模型反映其臨床應(yīng)用“攻逐水飲”的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)相關(guān)試驗(yàn)，在方中除甘遂及甘草外，其他諸藥不變的情況下，對(duì)甘遂與甘草配伍的不同宜忌條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選擇具有顯著效果的配伍條件組合，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步從組織水平、激素水平、細(xì)胞分子水平進(jìn)行藥效機(jī)制的研究，并從整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行毒性機(jī)制的探討，以期闡明甘遂半夏湯臨床應(yīng)用的宜忌條件和作用規(guī)律。；在特定病理?xiàng)l件下，