【正文】 2010年版《中國藥典應(yīng)用色譜聯(lián)用分析技術(shù)，定性定量研究體液中的毒效成分及內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，進(jìn)行同步藥物濃度及藥效作用相關(guān)分析，結(jié)合模式識別等化學(xué)信息學(xué)技術(shù)，分析生物體給予“十八反”藥物前后代謝指紋圖譜的差異，獲得相應(yīng)的生物標(biāo)志物群，確定藥物毒性的特征代謝模式及其生物標(biāo)志物，確定與某些毒效學(xué)指標(biāo)密切相關(guān)成分，明確其生物學(xué)基礎(chǔ)與化學(xué)本質(zhì)。（2）基于體外高通量模型的快速篩查。擬解決關(guān)鍵科學(xué)問題客觀界定和明確回答中藥“十八反”各反藥配伍組合“反”與“不反”；系統(tǒng)揭示中藥“十八反”各反藥配伍組合“反”的化學(xué)實質(zhì)與生物學(xué)基礎(chǔ)；科學(xué)闡明中藥“十八反”代表性反藥組合同方配伍的妨害與宜忌條件； 闡明以十八反為代表的中藥配伍禁忌理論的科學(xué)內(nèi)涵。承擔(dān)單位：北京中醫(yī)藥大學(xué) 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院負(fù) 責(zé) 人：鐘贛生 研究員 科研骨干：周學(xué)平 教授 孫紅梅 教授 蔣萌王 旭 教授 洪 纓 教授 馬長華 教授 經(jīng)費比例：16%四、年度計劃研究內(nèi)容預(yù)期目標(biāo)第一年基于“十八反”的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)挖掘與知識發(fā)現(xiàn)研究。本著循證醫(yī)學(xué)系統(tǒng)評價的思想，根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的臨床研究文獻(xiàn)，系統(tǒng)地評價“十八反”藥對配伍組合及其方劑在臨床治療領(lǐng)域的療效和安全性，為“十八反”藥物使用宜忌的基礎(chǔ)研究及進(jìn)一步的臨床應(yīng)用研究提供證據(jù)。然而，古人對于相反涵義還存在著另外一種認(rèn)識，《本草衍義補遺》稱：“(人參)與藜蘆相反，若服一兩參，入藜蘆一錢，其一兩參虛費矣！戒之！”，其他醫(yī)家也有類似這種“相反藥物配伍藥效抵消”的見解。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機制。在此基礎(chǔ)上，以計算機分子對接技術(shù)為先導(dǎo)，快速篩選反藥毒效物質(zhì)的生物學(xué)靶標(biāo)；并集成多種光譜/色譜等技術(shù)開展小分子毒效物質(zhì)與關(guān)鍵靶標(biāo)間的相互作用研究；通過毒性靶標(biāo)群的生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，揭示該組反藥配伍致毒增毒的分子網(wǎng)絡(luò)機制?！鞍胧V貝蘞及攻烏”致毒/增毒物質(zhì)相互作用規(guī)律研究采用動物整體ADME、藥物吸收體外動態(tài)仿生系統(tǒng)及藥物代謝酶等技術(shù)，在體、離體實驗相結(jié)合，研究“半蔞貝蘞及攻烏”配伍致毒/增毒物質(zhì)毒代動力學(xué)特征及吸收、代謝等相互作用規(guī)律?；仡櫸迨陙淼南嚓P(guān)研究成果和研究經(jīng)驗，為項目研究參考。項目總體研究思路的特色在于：以海量古今信息數(shù)據(jù)挖掘為支撐，集成藥物安全性評價、毒理毒代、毒效物質(zhì)、藥物相互作用等現(xiàn)代研究方法，創(chuàng)建客觀表征中藥配伍禁忌量毒時效關(guān)系的研究模式。揭示“十八反”配伍毒效表征及其機理；闡明中醫(yī)臨床常用代表性反藥組合及其同方配伍妨害治療的效應(yīng)機制與理論基礎(chǔ)；基于臨床從反藥組合及其方劑不同層面揭示宜忌條件及配伍關(guān)系。收集整理與本項目研究相關(guān)的古今文獻(xiàn)，考證各“十八反”中藥的衍化過程，整理歸納歷代醫(yī)家對“十八反”中藥的理論闡述、歷代相反藥項的范圍和臨床實踐經(jīng)驗，現(xiàn)代名家醫(yī)案、臨床報道、醫(yī)院處方和實驗研究文獻(xiàn)，分析提取以“十八反”為代表的配伍禁忌相關(guān)內(nèi)容，探討其來源、范圍、現(xiàn)狀和有爭議的問題?！鞍胧V貝蘞及攻烏”配伍量毒時效關(guān)系研究基于多劑量、多指標(biāo)優(yōu)化的實驗設(shè)計，考察半蔞貝蘞及與烏頭配伍，考察其配伍后毒效變化，以及是否產(chǎn)生其他毒性。研究目標(biāo)建立客觀、適宜、系統(tǒng)的毒性評價體系，以確切回答“藻戟遂芫”與甘草配伍反與不反及其致毒/增毒特點；建立涵蓋“藻戟遂芫”與甘草配伍前后提取物、化學(xué)部位、化學(xué)成分的化學(xué)物質(zhì)庫，以有效支撐和評價研究其毒效物質(zhì)變化；通過量毒時效關(guān)系與體內(nèi)過程變化研究，揭示“藻戟遂芫”與甘草配伍的相互作用機制；通過系統(tǒng)的毒理學(xué)評價，確定人體等效性毒效劑量范圍，為指導(dǎo)臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)；通過本課題研究，為系統(tǒng)揭示“十八反”中藥配伍禁忌的科學(xué)內(nèi)涵提供支撐，為豐富和發(fā)展中藥配伍禁忌理論提供科學(xué)依據(jù)；建立客觀、適宜、系統(tǒng)的毒性評價體系，以確切回答“藻戟遂芫”與甘草配伍反與不反及其致毒/增毒特點；建立涵蓋“藻戟遂芫”與甘草配伍前后提取物、化學(xué)部位、化學(xué)成分的化學(xué)物質(zhì)庫，以有效支撐和評價研究其毒效物質(zhì)變化；通過量毒時效關(guān)系與體內(nèi)過程變化研究，揭示“藻戟遂芫”與甘草配伍的相互作用機制；通過系統(tǒng)的毒理學(xué)評價，確定人體等效性毒效劑量范圍，為指導(dǎo)臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)。通過在酶活性水平建立毒性評價技術(shù)平臺和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，從分子和蛋白水平上揭示“十八反”配伍藥物相互作用的可能機制；在國內(nèi)外學(xué)術(shù)核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后4名，博士研究生5名，碩士研究生10名。我們前期的實驗研究證明：有的相反組對（或在方劑中）可能干擾或妨害組對內(nèi)藥物的某些藥效。從實驗研究方面，以相關(guān)疾病模型為載體，方藥結(jié)合研究中藥“十八反”配伍應(yīng)用的宜忌條件（1）以古方海藻玉壺湯為切入點，基于臨床用藥特點，設(shè)計特定的病理模型，從方藥結(jié)合的角度，探討不同給藥劑量、配伍比例等因素對方中“十八反”藥對配伍組合（海藻與甘草）生物效應(yīng)的影響，探索其用藥特點及規(guī)律。主要對“十八反”中藥古今文獻(xiàn)信息進(jìn)行收集與考證； 啟動建立融數(shù)據(jù)存貯、展示、匯交、共享、分析、管理等功能為一體的管理平臺；建立中藥“十八反”毒性評價體系，開展烏頭組、甘草組、藜蘆組各反藥配伍組合的毒性評價研究；初步建立中藥“十八反”藥味與反藥配伍組合樣品制備及化學(xué)物質(zhì)庫；啟動中藥“十八反”代表性反藥配伍組合及方劑妨害治療效應(yīng)基礎(chǔ)研究；從臨床文獻(xiàn)分析角度，考察分析中藥十八反配伍應(yīng)用的宜忌條件。圍繞科學(xué)假說和擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題，開展以下研究工作：（一）基于“十八反”的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)挖掘與知識發(fā)現(xiàn)研究中藥“十八反”文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的收集考證及數(shù)據(jù)庫建立（1）“配伍禁忌”是指一般情況下不宜相互配合使用的藥物，傳統(tǒng)中藥的禁忌主要包括“十八反、十九畏”，《本經(jīng)》明言：“勿用相惡相反者”。采用體外組織器官、細(xì)胞、亞細(xì)胞、分子等水平的模型，評價“十八反”的致毒/增毒特點及毒性程度。（六）中藥“十八反”代表性反藥配伍組合及其方劑妨害治療效應(yīng)基礎(chǔ)研究“十八反”配伍妨害治療作用的文獻(xiàn)挖掘中藥十八反是傳統(tǒng)的中藥配伍禁忌，“相反配伍將致毒性增強或產(chǎn)生劇烈毒性”相沿成為十八反的主要涵義。一部》中記載的海藻功能主治是“消痰軟堅散結(jié)，利水消腫。從實驗研究方面，以相關(guān)疾病模型為載體，方藥結(jié)合研究中藥“十八反”配伍應(yīng)用的宜忌條件（1）以古方海藻玉壺湯為切入點，基于臨床用藥特點，設(shè)計特定的病理模型，從方藥結(jié)合的角度，探討不同給藥劑量、配伍比例等因素對方中“十八反”藥對配伍組合（海藻與甘草）生物效應(yīng)的影響，探索其用藥特點及規(guī)律。利用中藥多成分同步定量分析技術(shù)，探討“十八反”配伍前后毒效成分體內(nèi)動力學(xué)參數(shù)(Cmax, Tmax, T1/2)的差異，揭示其吸收程度及體內(nèi)動力學(xué)行為的影響，從多組分毒代動力學(xué)的變化，揭示其配伍致毒/增毒的作用機理?？疾觳煌o藥方法、不同藥物劑量、不同檢測指標(biāo)藥物對模式生物生理狀態(tài)的影響，并對其急性毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，建立模式生物用于毒性快速篩查的方法學(xué)。提出科學(xué)假說中藥“十八反”是藥性相反或相制的代表性組合；相反藥對的構(gòu)成—劑量—物質(zhì)變化具有特定的毒效表征；妨害治療及宜忌轉(zhuǎn)化是反藥配伍規(guī)律的辯證體現(xiàn)。；培養(yǎng)博士研究生4~6名，碩士研究生8~12名，青年骨干教師4~6名；在國內(nèi)外核心期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文2015~3020篇。（2）從文獻(xiàn)角度進(jìn)行“十八反”配伍及其方劑的治療性臨床研究的療效和安全性的評價?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫奈墨I(xiàn)挖掘中藥十八反是傳統(tǒng)的中藥配伍禁忌，“相反配伍將致毒性增強或產(chǎn)生劇烈毒性”相沿成為十八反的主要涵義。通過現(xiàn)代色譜技術(shù)研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質(zhì)基礎(chǔ)，并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫；闡明“諸參辛芍”與藜蘆配伍前后的量毒時效關(guān)系，確定不同配比不同劑量下LD50、MTD參數(shù)的變化，確定有毒藥物的安全劑量范圍，提出各反藥配伍組合的毒性動態(tài)變化范圍；選擇代表性配伍組合作為研究范例，進(jìn)行體內(nèi)過程研究，闡明其配伍前后體內(nèi)動力學(xué)參數(shù)差異，明確其體內(nèi)過程，闡明其體內(nèi)作用物質(zhì)與毒性的關(guān)系。從炎性因子釋放、細(xì)胞線粒體損傷、胞內(nèi)離子平衡、氧化壓力和凋亡蛋白表達(dá)，多角度、多途徑分析該組反藥誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的分子機制。進(jìn)一步利用毒性快速篩查技術(shù)、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術(shù)等進(jìn)行毒性確認(rèn)，最終明確相反配伍致毒/增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥“十八反”文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的收集考證及數(shù)據(jù)庫建立（1）“配伍禁忌”是指一般情況下不宜相互配合使用的藥物，傳統(tǒng)中藥的禁忌主要包括“十八反、十九畏”，《本經(jīng)》明言：“勿用相惡相反者”。因此對“十八反”反與不反的客觀界定、配伍禁忌的內(nèi)在規(guī)律，以及轉(zhuǎn)化條件成為“十八反”基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵科學(xué)問題，并依此形成本項目的科學(xué)假說。從而對科學(xué)假說進(jìn)行驗證，揭示其科學(xué)內(nèi)涵，提煉形成創(chuàng)新知識和豐富發(fā)展中藥配伍禁忌理論。（2）通過規(guī)范文獻(xiàn)信息，建立基于“十八反”的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)庫，主要包含“十八反”中藥相關(guān)的歷史文獻(xiàn)、中藥和方劑資料、臨床案例，以及現(xiàn)代研究獲得的物質(zhì)基礎(chǔ)、毒效等生物學(xué)信息相關(guān)數(shù)據(jù)。計算藥物配伍前后的中毒劑量、有效量和安全范圍，結(jié)合各毒效相關(guān)成分的含量變化，對其量毒效數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性模擬建模，考察和評價反藥配伍前后在體內(nèi)致毒物質(zhì)的代謝速率、累積規(guī)律和蓄積致毒的時空關(guān)系，揭示其量毒時效關(guān)系及其變化規(guī)律。通過以上研究，為系統(tǒng)揭示“十八反”中藥配伍禁忌的科學(xué)內(nèi)涵提供支撐，為豐富和發(fā)展中藥配伍禁忌理論提供科學(xué)依據(jù)。 通過安全性評價體系的建立與毒性評價，構(gòu)建基于PXR～CYP3A通路的細(xì)胞篩選模型，從動物和細(xì)胞兩個層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關(guān)系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反。為了提供相關(guān)妨害治療研究的理論基礎(chǔ)，本課題擬較全面收集梳理十八反中藥配伍禁忌的古今文獻(xiàn)，基于梳理并提取歷代醫(yī)家、對“十八反”中藥的臨床實踐經(jīng)驗，現(xiàn)代名家醫(yī)案、臨床報道、醫(yī)院處方和實驗研究中有關(guān)“十八反”中藥物質(zhì)基礎(chǔ)、療效及藥理效應(yīng)、毒性等妨害治療的相關(guān)信息，通過數(shù)據(jù)挖掘和知識發(fā)現(xiàn)尋找其潛在規(guī)律。2010年版《中國藥典 歸納以“十八反”為代表的歷代中藥配伍禁忌理論和臨床經(jīng)驗； 建立多屬性、多層次的數(shù)據(jù)挖掘模型； 初步評價中藥“十八反”各反藥配伍組合反與不反； 初步明確“十八反”代表性反藥配伍組合及方劑配伍的妨害治療效應(yīng)； 明確臨床應(yīng)用的反藥配伍組合的宜忌條件； 在國內(nèi)外期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文1015篇，其中SCI收錄24篇； 培養(yǎng)博士研究生12名，碩士研究生46名?；仡櫸迨陙淼南嚓P(guān)研究成果和研究經(jīng)驗，為項目