【正文】 （產(chǎn)物是可測的） ? 生物反應（效應）方法： 生物效應變化 在被測 藥物 的作用下 生物效應的變化是定量的； 生物效應是定量可測的； （注意：生物效應的變化范圍） 4. 方法學確認（評價、確證、考評、 validation ） “生物樣品測定的關鍵是方法學的確證。這是藥代動力學研究有別于其它藥理毒理研究的特殊之處。在通過特異性、靈敏度、精密度、準確度、穩(wěn)定性等研究建立了檢測方法學，得到了標準曲線后，在檢測過程中還應進行方法學質(zhì)控，制備隨行標準曲線并對質(zhì)控樣品進行測定，以確保檢測方法的可靠性。 例如：全血 、 血漿 、 血清 、 尿 、 糞 、 各種組織等 。 分析批： 包括待測樣品 、 適當數(shù)目的標準樣品和 QC樣品的完整系列 。 精密度： 在確定的分析條件下 ， 相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測 量值的分散程度 。 重現(xiàn)性： 不同實驗室間測定結果的分散程度 ， 以及相同條件下分析方 法在間隔一段短時間后測定結果的分散程度 。 穩(wěn)定性： 一種分析物在確定條件下 ， 一定時間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化 學穩(wěn)定性 。 質(zhì)控樣品： 即 QC樣品 ， 系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的 樣品 ， 用于監(jiān)測生物分析方法的重復性和評價每一分析 批中未知樣品分析結果的完整性和正確性 。 應采用適當?shù)募訖嗪徒y(tǒng) 計檢驗 ， 用簡單的數(shù)學模型來最適當?shù)孛枋?。 回收率： 分析過程的提取效率 ， 以樣品提取和處理過程前后分析物含量 百分比表示 。 這些共存組分 可能包括代謝物 、 雜質(zhì) 、 分解產(chǎn)物 、 介質(zhì)組分等 定量范圍： 包括定量上限 （ ULOQ） 和定量下限 （ LLOQ） 的濃度范圍， 在此范圍內(nèi)采用濃度 響應關系能進行可靠的、可重復的定 量，其準確度和精密度可以接受。 體內(nèi)藥物分析方法的評價內(nèi)容： （ 1） Selectivity: （ 2） Linear Range and Response Factor： （ 3） InterDay Precision and Accuracy: （ 4） IntraDay Precision and Accuracy: （ 5） Dilution Integrity: （ 6） Sensitivity: （ 7） Recovery (Extraction Efficiency)： （ 8） Matrix Effects: （ 9） Carryover Evaluation： （ 10） Stability: （ 11） Relative Retention: 受試驗藥物標準樣品的色譜圖 正常生物樣品（空白）色譜圖 （ 6個不同來源的受試個體） 正常生物樣品外加受試藥物色譜圖 （ 6個不同來源的受試個體：血漿種屬；血漿外加藥物濃度；內(nèi)標濃度） 給藥后生物樣品色譜圖 （受試種屬；給藥途徑、劑量；生物樣品采集時間點） Selectivity: 被測組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物以及其它干擾物質(zhì)有良好的分離 。對于色譜法至少要考察 6個不同來源空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。 必須用至少 6個濃度建立標準曲線 (n = / 5)。 定量范圍要能覆蓋全部待測濃度 。 建立標準曲線時應隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點。 低濃度選擇在定量下限 （ LLOQ） 附近 ， 其濃度在 LLOQ的 3倍以內(nèi)； 高濃度接近于標準曲線的上限； 中間選一個濃度 。 精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對標準差 （ RSD） 表示 ， RSD一般應小于 15%， 在 LLOQ附近 RSD應小于 20%。 Precision of the method, defined by the percent relative standard deviation ( %RSD = （ standard deviation） 247。（ nominal concentration ） 100) Precision and Accuracy Dilution Integrity: 目的是為解決在樣品測定過程中，出現(xiàn)超過最高定量上限的樣品的測定問題。 高濃度樣品稀釋后，所測定結果的準確度和精密度不受稀釋的影響。應由至少 5個標準樣品測試結果證明。 低 、 中 、 高 (3個濃度 ): Conc. (ng/ml) Peak Area Fortified Samples Mean Peak Area Fortified Samples Peak Area Processed Samples Percent Recovery Mean Percent Recovery SD L. A1 A B1 B1/A C D A2 B2 B2/A A3 B3 B3/A A4 B4 B4/A A5 B5 B5/A M A6 E B6 B6/ E G H A7 B7 B7/ E A8 B8 B8/ E A9 B9 B9/ E A10 B10 B10/ E H A11 I B11 B11/ I K L A12 B12 B12/ I A13 B13 B13/ I A14 B14 B14/ I A15 B15 B15/ I 萃取回收率 : Matrix Effects: 在采用質(zhì)譜方法進行體內(nèi)藥物定量檢測時 ,應進行基質(zhì)效應試驗 ,觀察基質(zhì)對藥物測定的影響 . 基質(zhì)（ matrix） 尚無統(tǒng)一的解釋，曾稱為“一種分析物（ analyte）的環(huán)境（ milieu）”，即指標本中除分析物以外的一切組成?；|(zhì)因子 ): peak area (fortified samples) / peak area (analytical samples 含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品 不含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品 IS adjusted Matrix Factor (內(nèi)標校正的基質(zhì)因子 ): [ratios of peak area(Drug/IS)] (fortified samples) [ratio of peak area (Drug/IS)] (analytical samples) 含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標濃度樣品 不含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標濃度樣品 Carryover試驗 ： Run Code 藥物 LLOQ（信號） 內(nèi)標（信號） 雙空白生物樣品 1 B1 A1 一般是在分析測定標準曲線的定量上限濃度的樣品之后，立即測定 一個空白樣品（最好是雙空白生物樣品）。 Stability: （ 1）藥物母液（長期或較長時間）放置穩(wěn)定性 （ 2）血漿樣品長期放置穩(wěn)定性 （ 3）血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性 （ 4）血漿樣品處理后（自動進樣器）穩(wěn)定性 （ 5）血漿樣品凍融穩(wěn)定性 樣品的濃度一般設為：低、中、高（三個濃度梯度）； 常依樣品測定中的 QC樣品進行試驗。 標明：藥物的濃度；藥物儲存的介質(zhì)（或溶媒）； 樣品放置（或儲存）的條件和環(huán)境； 放置的時間或處置的條件等。 藥物 劑量 檢測靈敏度 備注 8021 1 mg /人 25 pg/ml LXT101 mg / kg 20 pg/ml 緩釋 14天 Leuprorelin mg / kg 30 pg/ml 緩釋 45天 NTX mg / kg 50 pg/ml 緩釋 45天 SNF mg / kg 50 pg/ml BUSP 藥物制劑中的穩(wěn)定化性， 提高生物利用度問題， 延長體內(nèi)時間， 體內(nèi)、外評價問題。 D2 ) 05101520250 200 400 600 800t i m e （m i n )plasma drugconcentration（ug/ml)D23636meanD2mean快速樣品檢測方法： 適合于處方設計初期的評篩。 對受體以外部位的影響： 改變體液和電解質(zhì)的平衡： 這種相互作用多發(fā)生在作用于心肌、 神經(jīng)肌肉突觸傳遞及腎臟的藥物； 如：兩性霉素 B和排鉀利尿藥可增加強心甙的毒性； 保泰松、吲哚美辛可加重皮質(zhì)激素類的水鈉潴留等。 影響藥物的吸收： 腸蠕動變化對藥物吸收的影響： 影響吸收部位酶或菌叢變化： 口服地高辛以后，部分藥物可在腸道細菌的作用下轉化為無強心 作用的雙氫地高辛和雙氫地高辛甙元。 影響與血漿蛋白的結合： ? 大多數(shù)藥物吸收后，在不同程度上可與血漿蛋白結合； ? 結合型與游離型藥物保持一定的動態(tài)平衡； ? 游離型藥物可轉運、保持活性； ? 結合型藥物一般沒有藥理活性； ? 當游離型藥物的濃度降低時，被結合的藥物又能再分離出來；這種機 制有利于避免血藥濃度瞬間過高，也可以延長藥物的治療作用時間。當兩