最新探究性設計試驗-在線瀏覽
2024-08-10 03:54本頁面
【正文】 者將取消實驗資格。（3）一周后以小組為單位用多媒體匯報實驗結果和討論分析。3．儀器連接參見各相應參數(shù)記錄時的實驗。（王紅衛(wèi)）二、基于多因素對離體心臟功能影響的擴展性實驗（一）實驗目的離體心臟灌注是指將動物心臟取出胸腔，連接上一個特定的灌流裝置，用相應的緩沖液灌注其冠脈系統(tǒng)，使離體心臟在人工控制的條件下自主跳動或人工起搏下收縮與舒張。（二）實驗原理離體心臟模型主要分為兩種：主動脈逆行灌注（Langendorff）模型和工作心臟模型(Working heart)。因此，離體心臟模型廣泛運用于醫(yī)學各領域生理，藥理、生化等基礎與臨床相關科室的研究領域。2．藥品與器材戊巴比妥鈉，KrebsHenseleit緩沖液，主動脈插管，灌流槽，恒溫灌流裝置，微電極放大器，哺乳動物手術器械，臺氏液，PowerLab 8S主機，微操縱器，冷光源，含95% O2+5% CO2混和氣體。1．主動脈逆行灌注（Langendorff，逆行灌注，retrograde perfusion）（1）取大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉，舌下靜脈注射1％的肝素抗凝（）（腹腔注射亦可，5000 IU/kg），開胸迅速取出心臟置于4℃或室溫下的KrebsHenseleit緩沖液。（3）心尖部掛一個金屬小鉤連接生物信號轉換儀，可以測量心率，心功能。（4）將一與PE管連接的水囊由左房插入左心室，PE管接壓力換能器至MPA生物信號記錄系統(tǒng)，調節(jié)水囊內壓至5~10 mmHg（前負荷），通過水囊可以測定左室發(fā)展壓（developed pressure）及dp/dt。（6）心臟恢復自主心跳后平衡灌注15min，待心臟跳動平穩(wěn)后便可開始實驗。揮發(fā)性藥物（如揮發(fā)性麻醉藥）可以使灌注液在一定濃度下飽和該藥物，再行灌注。然而，它不完全符合生理，其本質是主動脈逆行灌注，心臟是空收縮，沒有起到泵的作用，而且沒有前負荷。這是因為水囊大小是固定的，與心室內壁結合不會太緊密，因此，與生理狀態(tài)下的前負荷相差較遠。（1）動物及灌流液同Langendorff模型，與Langendorff模型不同的是，工作心臟模型是一種雙灌流裝置，它不僅有主動脈灌流系統(tǒng)而且還有左房灌流系統(tǒng)，主動脈流入道和流出道通過三通連接互相轉換，流出道的壓力（后負荷）可以通過管道內液平面高度來調節(jié)。（2）操作的前半部分同Langendorff模型，在實行完主動脈逆行灌注后行肺靜脈插管入左房連接左房灌流系統(tǒng)，結扎固定。（4）持續(xù)主動脈逆行灌流10min待心臟搏動平穩(wěn)后，關閉主動脈流入道，打開主動脈流出道，并開始心房灌流，預灌流15～20min，待心跳平穩(wěn)后開始實驗。（六）討論分析（1）對實驗目的、設計原理進行闡釋，實驗結果進行總結與歸納。（3）如實驗結果不理想，請分析其失敗的原因和提出改進的措施。（2）實驗操作時間必須控制在1天以內。（八）注意事項（1）主動脈懸掛結扎的位置不能太深，以免阻塞冠狀動脈入口或損傷主動脈瓣造成關閉不全。（4）灌流液經心臟冠脈循環(huán)后由冠狀靜脈竇流入右心房及右心室，最后從肺動脈流出，因此，在操作中如果結扎了肺動脈，會出現(xiàn)右室迅速彭出的情況或將。如果采用動物疾病模型，如遺傳性高血壓動物可以觀察到血管內皮或平滑肌功能損傷。2．藥品與器材戊巴比妥鈉，KrebsHenseleit緩沖液，克氏液，離體血管灌流槽，恒溫灌流裝置，微電極放大器，培養(yǎng)皿，哺乳動物手術器械， PowerLab 8S主機，微操縱器，冷光源，含95% O2+5% CO2混和氣體等。（2）將主動脈放入含有KrebsHenseleit緩沖液的平皿，KrebsHenseleit緩沖液成份（mmol/L）：NaCl ，KCl ，CaCl2 ，MgSO4 ，KH2PO4 ，NaHCO3 ，glucose ，Na2EDTA 。（4）用一不銹鋼掛鉤將血管環(huán)挑起并懸掛于張力換能器上，調整掛鉤血管環(huán)與另一固定掛鉤的距離，然后將血管環(huán)穿入另一掛鉤，調整血管環(huán)在兩掛鉤間的相對位置，掛鉤位置固定后緩慢施加前負荷（靜息張力）至2 g（扣除掛鉤重量）。2．血管收縮舒張功能檢測（1）以60 mmol/L 氯化鉀使血管環(huán)平滑肌去極化,反復重復此過程2次使血管環(huán)收縮達坪值；沖洗。（3）最大舒張反應大于80 %的血管環(huán)可被認為內皮完整,并用于內皮依賴性血管實驗。用苯腎上腺素預收縮血管后在用乙酰膽堿檢驗血管舒張反應，如血管對乙酰膽堿無舒張反應或呈收縮反應，說明血管去除完全。（五）討論分析1．對實驗目的、設計原理進行闡釋，實驗結果進行總結與歸納。3．如實驗結果不理想，請分析其失敗的原因和提出改進的措施。2．實驗操作時間控制在1天以內。（七）附錄及注意事項1．血管收縮與舒張工具藥及其使用濃度：（1）緩沖溶液的配制1）KrebsHenseleit緩沖溶液的配制：KrebsHenseleit溶液為離體血管及離體心臟實驗常用的一種緩沖溶液，具體配制試劑及用量（見表71）。表72 高鉀60mM收縮液Salt Molecular weightmmol/lg/lg/500ml1NaCl2KCl603MgSO4 anhydrous4NaHCO3255KH2PO46117CaCl2 anhydrous8EDTANa2 （陳紅）四、家兔失血性休克的擴展性實驗（一）實驗目的本實驗的目的
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