【正文】 劑，混合均勻后分裝試管，121℃高壓滅菌15min。試驗方法：挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種，于36177。陽性者斜面上有菌落生長，培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍色。甲基紅(MR)試驗：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36177。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結(jié)果。甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸餾水。1℃培養(yǎng)2～4d。加入6%α－萘酚－%，充分振搖試管，觀察結(jié)果。1℃下培養(yǎng)4h再進行觀察。放成斜面。1℃培養(yǎng)7d，每天觀察結(jié)果。06 丙二酸鈉培養(yǎng)基成分：　　酵母浸膏　　　　　　　　　 1g　　硫酸銨　　　　　　　　　　 2g　　磷酸氫二鉀　　　　　　　　 　　磷酸二氫鉀　　　　　　　　 　　氯化鈉　　　　　　　　　　 2g　　丙二酸鈉　　　　　　　　　 3g　　%溴麝香草酚藍溶液　　　 12mL　　蒸餾水　　　　　　　　　　 1000mL　　制法：先將酵母浸膏和鹽類溶解于水，校正pH后再加入指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。1℃培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。07 葡葡糖銨培養(yǎng)基成分：　　氯化鈉　　　　　　　　　　　　　　5g　　硫酸鎂(MgSO4試驗方法：用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面，在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液，肉眼觀察不見混濁，以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜。于36177。陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長；陰性者不生長，但在對照培養(yǎng)基上生長良好。注：容器使用前應用清潔液浸泡。如果操作時不注意，有雜質(zhì)污染時，易造成假陽性的結(jié)果。加入葡萄糖、瓊脂煮沸，溶化瓊脂，然后加入指示劑。試驗方法：從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種，同時接種兩支培養(yǎng)基，其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面，高度約1cm，于36177。09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基成分：　　馬尿酸鈉　　1g　　肉浸液　　　100mL制法：將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)，并于管壁畫一橫線。試劑：三氯化鐵(FeCl3試驗方法：用純培養(yǎng)物接種，于42℃培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)液是否到達試管壁上記號處，如不足時，用蒸餾水補足至原量。結(jié)果：出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽性?！??；蚍旁?6士1℃培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果。試驗方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36177。滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。L－%加入，DL－氨基酸按1%加入。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，上面滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。1℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。　　13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)成分：　　蛋白胨(或胰蛋白胨)　 20g　　氯化鈉　　　　　　　 5g　　蒸餾水　　　　　　　 1000mL　　制法：按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。1℃培養(yǎng)1～2d，必要時可培養(yǎng)4～5d。注：蛋白胨中應含有豐富的色氨酸?！　?4 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)成分：　　牛肉膏　　　　　　 3g　　酵母浸膏　　　　　 3g　　蛋白胨　　　　　　 10g　　硫酸亞鐵　　　　　 　　硫代硫酸鈉　　　　 　　氯化鈉　　　　　　 5g　　瓊脂　　　　　　　 12g　　蒸餾水　　　　　　 1000mL　　制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115℃高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。1℃培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。注：腸桿菌科細菌測定硫化氫的產(chǎn)生，應采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。冷至50～55℃，加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。16 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基成分：　　蛋白胨　　　　　 10g　　氯化鈉　　　　　 5g　　磷酸二氫鉀　　　 　　磷酸氫二鈉　　　 　　蒸餾水　　　　　 1000mL　　%氰化鉀溶液　 20mL　　制法：將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。%(最后濃度為1∶10000)，分裝于12mm100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4℃冰箱內(nèi)，至少可保存兩個月。17 氧化酶試驗試劑：　　　1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液：少量新鮮配制，干冰箱內(nèi)避光保存。試驗方法：取白色潔凈濾紙沾取菌落。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色。18 硝酸鹽培養(yǎng)基成分：　　硝酸鉀　　　　　　　　 　　蛋白　　　　　　　　　 5g　　蒸餾水　　　　　　　　 1000mL　　制法：溶解，校正pH，分裝試管，每管約5mL，121℃高壓滅菌15min?！　∫乙海?。1℃培養(yǎng)1～4d，加入甲液和乙液各一滴，觀察結(jié)果。 注：本試驗陰性的原因有三：細菌不能還原硝酸鹽；亞硝酸鹽繼續(xù)分解，生成氨和氮；培養(yǎng)基不適于細菌的生長。19 細胞色素氧化酶試驗試劑：　　1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液。試驗方法：取37℃(或低于37℃)培養(yǎng)20h的斜面培養(yǎng)物一支，將兩種試劑各2～3滴，從斜面上端滴下，并將斜面略加傾斜，使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養(yǎng)物。結(jié)果：于2min內(nèi)呈現(xiàn)藍色者為陽性。20 過氧化氫酶試驗試劑：3%過氧化氫溶液：臨用時配制。結(jié)果：于半分鐘內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽性，不發(fā)生氣泡者為陰性?！　?%過氧化氫溶液。靜置于室溫(20℃)中30～60min，觀察結(jié)果。注：過氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制。稀釋液：，用蒸餾水稀釋至1000mL。23明膠磷酸鹽緩沖液成分：　　明膠　　　　　　　　　2g　　磷酸氫二鈉　　　　　　4g　　蒸餾水　　　　　　　　1000mL　　制法：加熱溶解，校正pH，121℃高壓滅菌15min。用途：檢驗真菌形態(tài)時用。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，～，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌30min。根據(jù)需要，傾注平板或放成斜面?！　?　加氫氧化鈉溶液，對pH試紙呈弱堿性，冷至40℃。1℃放置4～5h，每小時搖動一二次。若呈紅色，則不須再消化，可由溫箱取出?！　?　煮沸15min，使胰蛋白酶破壞，冷后，放冰箱內(nèi)一夜?！　?　～(加15%氫氧化鈉溶液約10mL)，加熱，用濾紙過濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。　?、谝鹊鞍酌钢渲疲悍Q取去脂絞碎的豬胰500g，加入乙醇500mL、蒸餾水1500mL，混合之，裝人玻塞瓶內(nèi)。3d后，用絨布過濾擠出其汁，%，放冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆??！　?　用絞肉機將豬血塊絞碎?！　?　從水浴內(nèi)取出，加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱內(nèi)一夜。　　6　用濾紙過濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。加入豌豆粉浸液，分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min。置100℃水浴內(nèi)加熱1h，放于冰箱中過夜。30血瓊脂成分：　　～　　　　　　　100mL　　脫纖維羊血(或兔血)　　　　　　　5～10mL制法：加熱溶化瓊脂，冷至50℃，以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血，搖勻，傾注平板。亦可用其他營養(yǎng)豐富的基礎培養(yǎng)基配制血瓊脂。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。注：此培養(yǎng)基可供一般細菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。32營養(yǎng)肉湯成分：　　蛋白陳　　　　10g　　牛肉膏　　　　3g　　氯化鈉　　　　5g　　蒸餾水　　　　1000mL　　制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225mL，121℃高壓滅菌15min。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。注：①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。35 EC肉湯成分：　　胰蛋白胨　　　　　　　　20g　　3號膽鹽(或混合膽鹽)　　 　　乳糖　　　　　　　　　　5g　　磷酸氫二鉀　　　　　　　4g　　磷酸二氫鉀　　　　　　　　　氯化鈉　　　　　　　　　5g　　蒸餾水　　　　　　　　　1000mL制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121℃高壓滅菌15min，177。12H2O)　　　　 9g　　磷酸二氫鉀　　　　　　　　　　　　 　　蒸餾水　　　　　　　　　　　　　　 1000mL　　制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121℃高壓滅菌15min。注：本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。制法：分別按上述成分配好后，121℃高壓滅菌15min備用。注：本培養(yǎng)基亦稱Rappaport 10(R10)增菌液。分裝時應隨時振搖，使其中的碳酸鈣混勻。臨用時每100mL基礎培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL、%煌綠溶液1mL。121℃高壓滅菌20min。5H2O)　　　　 50g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　　　　加至100mL碘溶液　　碘片　　　　　　　　　　　　　　　20g　　碘化鉀　　　　　　　　　　　　　　25g　　蒸餾水加至　　　　　　　　　　　　100mL　　將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中，加入碘片，振搖玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸餾水至規(guī)　　定量?；途G水溶液　　煌綠　　　　　　　蒸餾水　　　　100mL　　存放暗處，不少于1d，使其自然滅菌?！　　≈苽洌骸　』A液　　　　　　900mL　　硫代硫酸鈉溶液　　100mL　　碘液　　　　　　　20mL　　煌綠溶液　　　　　2mL　　牛膽鹽溶液　　　　50mL　　臨用前，按上列順序，以無菌操作依次加入于基礎液中，每加入一種成分，均應搖勻后再加入另一種成分。40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)成分：　　蛋白胨　　　　5g　　乳糖　　　　　4g　　亞硒酸氫鈉　　4g　　磷酸氫二鈉　　　　磷酸二氫鉀　　　　L胱氨酸　　　　　蒸餾水　　　　1000mL1%L胱氨酸－氫氧化鈉溶液的配法：稱取L－(或DL－)，加1mol/，使溶解。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無菌操作與上液混合。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL，177。分裝每瓶225mL，115℃高壓滅菌15min。分裝每瓶30mL，115℃高壓滅菌15min。　　2　將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。冷至50～55℃，傾注平皿。應在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處。44 DHL瓊脂成分：　　蛋白胨　　　　　 20g　　牛肉膏　　　　　 3g　　乳糖　　　　　　 10g　　蔗糖　　　　　　 10g　　去氧膽酸鈉　　　 1g　　硫代硫酸鈉　　　 　　檸檬酸鈉　　　　 1g　　檸檬酸鐵銨　　　 1g　　中性紅　　　　　 　　瓊脂　　　　　　 18～20g　　蒸餾水　　　　　 1000mL　　制法：將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中，校正pH。45 HE瓊脂成分：　　脙胨　　　　　12g　　牛肉膏　　　　3g　　乳糖　　　　　12g　　蔗糖　　　　　12g　　水楊素　　　　2g　　膽鹽　　　　　20g　　氯化鈉　　　　5g　　瓊脂　　　　　18～20g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　1000mL　　%溴麝香草酚藍溶液　　　　16mL　　Andrade指示劑　　　　　　　 20mL　　甲液　　　　　　　　　　　　20mL　　乙液　　　　　　　　　　　　20mL　　制法：將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎液；將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi)，加熱溶解。再加入指示劑，并與瓊脂液合并，待冷至50～55℃，傾注平板?！　、诩滓旱呐渲啤　×虼蛩徕c　　　　　　　　　 34g　　檸檬酸鐵銨　　　　　　　　　 4g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　 100mL　?、谝乙旱呐渲啤　∪パ跄懰徕c　　　　　　　　　 10g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　 100mL　?、贏ndrade指示劑　　酸性復紅　　　　　　　　　　 　　1mol/L氫氧化鈉溶液　　　　　 16mL　　蒸餾水　　　　　　　　　　　 100mL　　將復紅溶解于蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液。46 SS瓊脂基礎培養(yǎng)基：　　牛肉膏　　　　　　　　　　　5g　　眎胨　　　　　　　　　　　　5g　　三號膽鹽　　　　　　　　　　　　瓊脂　　　　　　　　　　　　17g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　1000mL　　　　再將兩液混合，121℃高壓滅菌15min，保存?zhèn)溆?。　　注：①制好的培養(yǎng)基宜當日使用，或保存于冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用?！　、劭梢再徲肧S瓊脂的干燥培養(yǎng)基?！　∽ⅲ孩俟┥抽T氏菌分離用。48 麥康凱瓊脂成分：　　蛋白胨　　　　　　　　　　 17g　　眎胨　　　　　　　　　　　 3g　　豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)　　　 5g　　氯化鈉　　　　　　　　　　 5g　　瓊脂　　　　　　　　　　　 17g　　蒸餾水　　　　　　　　　　　1000mL　　乳糖　　　　　　　　　　　　10g　　%結(jié)晶紫水溶液　　　　　 10mL　　%中性紅水溶液　　　　　　5mL制法：　　1　將蛋白胨、眎、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中。將兩液合并，分裝于燒瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌15min備用。注：結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50～55℃，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。6H2O〕　　　　　　　硫代硫酸鈉　　　　　　　　　　　　　　　　 　　瓊脂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 12g　　酚紅　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　蒸餾水　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1000mL　　制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。%，搖勻。121