【正文】 l conditions of ethanol extract for flavonoids in Camptotheca acuminata leaves were obtained as follows: solidliquid ratio1:40, ethanol volume fraction 60%, extraction temperature 80 176。 camptotheca acuminata leaves。喜樹為落葉大喬木，樹高可達2530m；樹皮幼時呈淡灰色，老則呈灰褐色；小枝幼時呈綠色，略具灰褐色絨毛，老則呈淡褐色；葉互生，卵狀長方形或卵狀橢圓形，表面深綠色，下面淡綠色；先端漸尖，基部圓或廣楔形，全緣，邊緣有纖毛，羽脈1011對；葉柄紅色，有疏毛；花單性同株，白色，無梗，多數(shù)排成球形頭狀化序，雌花球頂生，雄花球腋生；花期78月，果期1112月，果實披針形，兩邊有翅；內有種子1粒，干縮成細條狀。土壤以深厚、肥沃、排水良好的砂壤土生長較好，多生于海拔1000 m以下的山腳溝谷坡地；較耐水濕，在河灘沙地、河湖堤岸以及地下水充足處生長良好[2]。 黃酮類化合物活性及生理作用黃酮類化合物（flavonoids）是一類存在于自然界的、具有2苯基色原酮（flavone）結構的化合物。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結合成苷類，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。黃酮廣泛存在于植物的各部位，主要集中在花、葉、果實中，有研究指出，喜樹葉中黃酮類化合物含量豐富。此外，黃酮在食品中的應用也很廣，它在食品中主要用于天然甜味劑、天然抗氧化劑、天然色素、保健食品等方面[47]。已有從黃芩、水芹、銀杏葉、竹葉、龍柏葉、楮樹葉中提取分離了許多黃酮類化合物[4]。從喜樹中提取總黃酮的研究也鮮見報道。毛燕等研究了不同條件對水提取喜樹翅果總黃酮含量提取的影響，發(fā)現(xiàn)最佳提取條件為：溶劑體積40 mL，提取時間60 min，提取溫度90100℃，％[6]。喜樹總黃酮含量最高的部位是果實，其次是葉和根，最低為莖。國內有研究涉及喜樹葉黃酮提取的索氏提取法，水提取法，微波提取法等，還有正交實驗研究黃酮的提取，但對于響應面的應用在這個方面還沒有涉及[711]。相對于正交設計，響應面設計試驗次數(shù)少、周期短，求得的同歸方程精度高，是一種能研究幾種因素間交互作用的回歸分析方法[1217]。為此響應面分析法（也稱響應曲面法）應運而生。本質上來說，響應面法是一套統(tǒng)計方法,用這種方法來尋找考慮了輸入變量值的變異或不確定性之后的最佳響應值[12]。顯然，要構造這樣的響應面并進行分析以確定最優(yōu)條件或尋找最優(yōu)區(qū)域，首先必須通過大量的量測試驗數(shù)據(jù)建立一個合適的數(shù)學模型（建模），然后再用此數(shù)學模型作圖。對于非線性體系可作適當處理化為線性形式。化學和生物學領域是RSM最重要的應用領域，RSM在這兩個學科的研究中充分展現(xiàn)了它的優(yōu)點[12]。本論文以風干喜樹葉為原料，在喜樹葉的黃酮提取研究中，將單因素和響應面分析法應用于乙醇回流提取喜樹葉黃酮工藝，研究回流提取的條件及其對提取結果即黃酮的得率的影響，尋求各因素的綜合優(yōu)化條件，為提高喜樹葉黃酮利用率以及為工業(yè)化生產提供一定的理論參考。在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下，黃酮類化合物與鋁鹽生成鰲合物，加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色，是因為亞硝酸鈉還原黃酮，加硝酸鋁絡合，加氫氧化鈉使黃酮類化合物開環(huán)，生成2’OH查耳酮而顯色。利用黃酮類化合物中的3羥基、4羥基、5羥基、4羰基或鄰二位酚羥基，與Al3＋進行絡合反應，在堿性條件下生成紅色絡合物的原理測定其含量。 主要藥品與試劑蘆丁標準品、95%乙醇、石油醚、亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉。 主要儀器與器具T6可見分光光度計、TE124S電子天平、RE52B旋轉蒸發(fā)儀、烘箱、回流提取裝置、DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、燒杯，容量瓶，移液管，移液槍，量筒，比色管等。采用Soxhlet提取法，以沸程為30℃60℃的石油醚為脫脂劑于45℃水浴中脫脂3次每次2小時，充分除去樣品中脂類和脂溶性色素。 相關溶液的配制5%亞硝酸鈉溶液： g亞硝酸鈉，置燒杯充分溶解，定容到50 mL容量瓶。1 mol/L氫氧化鈉：準確稱量10 g氫氧化鈉，置燒杯充分溶解，定容到250 mL容量瓶。50%，60%，80%，90%乙醇溶液用類似方法配得。 黃酮含量測定的標準溶液及標準曲線的繪制標準溶液的配制[5]：稱取約50 mg蘆丁標準品于稱量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重，干燥器中冷卻，精確稱取25 mg蘆丁標準品，用70%乙醇定容至25 mL， mL定容到25 mg/mL的標準液。以空白溶液作參比，在λ= 510 nm處測吸光度，計算標準液濃度(C)與吸光度(A)的回歸方程A = kC + b。取該溶至10 mL，轉移至25 mL 容量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，搖勻。 黃酮含量測定方法按照標準曲線繪制方法操作，測定吸光度，根據(jù)標準曲線計算出測定樣品溶液總黃酮濃度C?？傸S酮提取率（mg/g）= CNV/m式中，C 為測定樣品溶液總黃酮濃度（mg/mL）；N 為稀釋倍數(shù)，；V 為最初樣品定容體積（mL），數(shù)值為50；m為樣品質量（g），數(shù)值為1。 提取次數(shù)的影響取樣品1 g，乙醇體積分數(shù)70%，料液比1：40，恒溫70℃，回流提取兩次，每次120 min，分別萃取1 、2 、3 、4次，測定提取液黃酮含量，并計算得率。 提取溫度的影響取樣品1 g，乙醇體積分數(shù)70%，料液比1：40，回流提取兩次，每次120 min，分別于50℃、60℃、70℃、80℃提取，測定提取液黃酮含量，并計算得率。參考文獻[17]，在單因素實驗的基礎上從料液比、提取次數(shù)、乙醇體積分數(shù)、提取溫度、提取時間五個因素中精心篩選出3個對黃酮乙醇提取影響比較顯著的因素：料液比、乙醇體積分數(shù)、提取溫度，在固定提取時間