【正文】 l conditions of ethanol extract for flavonoids in Camptotheca acuminata leaves were obtained as follows: solidliquid ratio1:40, ethanol volume fraction 60%, extraction temperature 80 176。 camptotheca acuminata leaves。喜樹為落葉大喬木，樹高可達(dá)2530m；樹皮幼時(shí)呈淡灰色，老則呈灰褐色；小枝幼時(shí)呈綠色，略具灰褐色絨毛，老則呈淡褐色；葉互生，卵狀長(zhǎng)方形或卵狀橢圓形，表面深綠色，下面淡綠色；先端漸尖，基部圓或廣楔形，全緣，邊緣有纖毛，羽脈1011對(duì)；葉柄紅色，有疏毛；花單性同株，白色，無梗，多數(shù)排成球形頭狀化序，雌花球頂生，雄花球腋生；花期78月，果期1112月，果實(shí)披針形，兩邊有翅；內(nèi)有種子1粒，干縮成細(xì)條狀。土壤以深厚、肥沃、排水良好的砂壤土生長(zhǎng)較好，多生于海拔1000 m以下的山腳溝谷坡地；較耐水濕，在河灘沙地、河湖堤岸以及地下水充足處生長(zhǎng)良好[2]。 黃酮類化合物活性及生理作用黃酮類化合物（flavonoids）是一類存在于自然界的、具有2苯基色原酮（flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。黃酮廣泛存在于植物的各部位，主要集中在花、葉、果實(shí)中，有研究指出，喜樹葉中黃酮類化合物含量豐富。此外，黃酮在食品中的應(yīng)用也很廣，它在食品中主要用于天然甜味劑、天然抗氧化劑、天然色素、保健食品等方面[47]。已有從黃芩、水芹、銀杏葉、竹葉、龍柏葉、楮樹葉中提取分離了許多黃酮類化合物[4]。從喜樹中提取總黃酮的研究也鮮見報(bào)道。毛燕等研究了不同條件對(duì)水提取喜樹翅果總黃酮含量提取的影響，發(fā)現(xiàn)最佳提取條件為：溶劑體積40 mL，提取時(shí)間60 min，提取溫度90100℃，％[6]。喜樹總黃酮含量最高的部位是果實(shí)，其次是葉和根，最低為莖。國(guó)內(nèi)有研究涉及喜樹葉黃酮提取的索氏提取法，水提取法，微波提取法等，還有正交實(shí)驗(yàn)研究黃酮的提取，但對(duì)于響應(yīng)面的應(yīng)用在這個(gè)方面還沒有涉及[711]。相對(duì)于正交設(shè)計(jì)，響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)次數(shù)少、周期短，求得的同歸方程精度高，是一種能研究幾種因素間交互作用的回歸分析方法[1217]。為此響應(yīng)面分析法（也稱響應(yīng)曲面法）應(yīng)運(yùn)而生。本質(zhì)上來說，響應(yīng)面法是一套統(tǒng)計(jì)方法,用這種方法來尋找考慮了輸入變量值的變異或不確定性之后的最佳響應(yīng)值[12]。顯然，要構(gòu)造這樣的響應(yīng)面并進(jìn)行分析以確定最優(yōu)條件或?qū)ふ易顑?yōu)區(qū)域，首先必須通過大量的量測(cè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)建立一個(gè)合適的數(shù)學(xué)模型（建模），然后再用此數(shù)學(xué)模型作圖。對(duì)于非線性體系可作適當(dāng)處理化為線性形式?；瘜W(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域是RSM最重要的應(yīng)用領(lǐng)域，RSM在這兩個(gè)學(xué)科的研究中充分展現(xiàn)了它的優(yōu)點(diǎn)[12]。本論文以風(fēng)干喜樹葉為原料，在喜樹葉的黃酮提取研究中，將單因素和響應(yīng)面分析法應(yīng)用于乙醇回流提取喜樹葉黃酮工藝，研究回流提取的條件及其對(duì)提取結(jié)果即黃酮的得率的影響，尋求各因素的綜合優(yōu)化條件，為提高喜樹葉黃酮利用率以及為工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的理論參考。在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下，黃酮類化合物與鋁鹽生成鰲合物，加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色，是因?yàn)閬喯跛徕c還原黃酮，加硝酸鋁絡(luò)合，加氫氧化鈉使黃酮類化合物開環(huán)，生成2’OH查耳酮而顯色。利用黃酮類化合物中的3羥基、4羥基、5羥基、4羰基或鄰二位酚羥基，與Al3＋進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物的原理測(cè)定其含量。 主要藥品與試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、95%乙醇、石油醚、亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉。 主要儀器與器具T6可見分光光度計(jì)、TE124S電子天平、RE52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、回流提取裝置、DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、燒杯，容量瓶，移液管，移液槍，量筒，比色管等。采用Soxhlet提取法，以沸程為30℃60℃的石油醚為脫脂劑于45℃水浴中脫脂3次每次2小時(shí)，充分除去樣品中脂類和脂溶性色素。 相關(guān)溶液的配制5%亞硝酸鈉溶液： g亞硝酸鈉，置燒杯充分溶解，定容到50 mL容量瓶。1 mol/L氫氧化鈉：準(zhǔn)確稱量10 g氫氧化鈉，置燒杯充分溶解，定容到250 mL容量瓶。50%，60%，80%，90%乙醇溶液用類似方法配得。 黃酮含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[5]：稱取約50 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于稱量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重，干燥器中冷卻，精確稱取25 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇定容至25 mL， mL定容到25 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。以空白溶液作參比，在λ= 510 nm處測(cè)吸光度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)液濃度(C)與吸光度(A)的回歸方程A = kC + b。取該溶至10 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，搖勻。 黃酮含量測(cè)定方法按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法操作，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度C?？傸S酮提取率（mg/g）= CNV/m式中，C 為測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度（mg/mL）；N 為稀釋倍數(shù)，；V 為最初樣品定容體積（mL），數(shù)值為50；m為樣品質(zhì)量（g），數(shù)值為1。 提取次數(shù)的影響取樣品1 g，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1：40，恒溫70℃，回流提取兩次，每次120 min，分別萃取1 、2 、3 、4次，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。 提取溫度的影響取樣品1 g，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1：40，回流提取兩次，每次120 min，分別于50℃、60℃、70℃、80℃提取，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。參考文獻(xiàn)[17]，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上從料液比、提取次數(shù)、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間五個(gè)因素中精心篩選出3個(gè)對(duì)黃酮乙醇提取影響比較顯著的因素：料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度，在固定提取時(shí)間