【正文】 l conditions of ethanol extract for flavonoids in Camptotheca acuminata leaves were obtained as follows: solidliquid ratio1:40, ethanol volume fraction 60%, extraction temperature 80 176。 camptotheca acuminata leaves。喜樹(shù)為落葉大喬木，樹(shù)高可達(dá)2530m；樹(shù)皮幼時(shí)呈淡灰色，老則呈灰褐色；小枝幼時(shí)呈綠色，略具灰褐色絨毛，老則呈淡褐色；葉互生，卵狀長(zhǎng)方形或卵狀橢圓形，表面深綠色，下面淡綠色；先端漸尖，基部圓或廣楔形，全緣，邊緣有纖毛，羽脈1011對(duì)；葉柄紅色，有疏毛；花單性同株，白色，無(wú)梗，多數(shù)排成球形頭狀化序，雌花球頂生，雄花球腋生；花期78月，果期1112月，果實(shí)披針形，兩邊有翅；內(nèi)有種子1粒，干縮成細(xì)條狀。土壤以深厚、肥沃、排水良好的砂壤土生長(zhǎng)較好，多生于海拔1000 m以下的山腳溝谷坡地；較耐水濕，在河灘沙地、河湖堤岸以及地下水充足處生長(zhǎng)良好[2]。 黃酮類化合物活性及生理作用黃酮類化合物（flavonoids）是一類存在于自然界的、具有2苯基色原酮（flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。黃酮廣泛存在于植物的各部位，主要集中在花、葉、果實(shí)中，有研究指出，喜樹(shù)葉中黃酮類化合物含量豐富。此外，黃酮在食品中的應(yīng)用也很廣，它在食品中主要用于天然甜味劑、天然抗氧化劑、天然色素、保健食品等方面[47]。已有從黃芩、水芹、銀杏葉、竹葉、龍柏葉、楮樹(shù)葉中提取分離了許多黃酮類化合物[4]。從喜樹(shù)中提取總黃酮的研究也鮮見(jiàn)報(bào)道。毛燕等研究了不同條件對(duì)水提取喜樹(shù)翅果總黃酮含量提取的影響，發(fā)現(xiàn)最佳提取條件為：溶劑體積40 mL，提取時(shí)間60 min，提取溫度90100℃，％[6]。喜樹(shù)總黃酮含量最高的部位是果實(shí)，其次是葉和根，最低為莖。國(guó)內(nèi)有研究涉及喜樹(shù)葉黃酮提取的索氏提取法，水提取法，微波提取法等，還有正交實(shí)驗(yàn)研究黃酮的提取，但對(duì)于響應(yīng)面的應(yīng)用在這個(gè)方面還沒(méi)有涉及[711]。相對(duì)于正交設(shè)計(jì)，響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)次數(shù)少、周期短，求得的同歸方程精度高，是一種能研究幾種因素間交互作用的回歸分析方法[1217]。為此響應(yīng)面分析法（也稱響應(yīng)曲面法）應(yīng)運(yùn)而生。本質(zhì)上來(lái)說(shuō)，響應(yīng)面法是一套統(tǒng)計(jì)方法,用這種方法來(lái)尋找考慮了輸入變量值的變異或不確定性之后的最佳響應(yīng)值[12]。顯然，要構(gòu)造這樣的響應(yīng)面并進(jìn)行分析以確定最優(yōu)條件或?qū)ふ易顑?yōu)區(qū)域，首先必須通過(guò)大量的量測(cè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)建立一個(gè)合適的數(shù)學(xué)模型（建模），然后再用此數(shù)學(xué)模型作圖。對(duì)于非線性體系可作適當(dāng)處理化為線性形式?；瘜W(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域是RSM最重要的應(yīng)用領(lǐng)域，RSM在這兩個(gè)學(xué)科的研究中充分展現(xiàn)了它的優(yōu)點(diǎn)[12]。本論文以風(fēng)干喜樹(shù)葉為原料，在喜樹(shù)葉的黃酮提取研究中，將單因素和響應(yīng)面分析法應(yīng)用于乙醇回流提取喜樹(shù)葉黃酮工藝，研究回流提取的條件及其對(duì)提取結(jié)果即黃酮的得率的影響，尋求各因素的綜合優(yōu)化條件，為提高喜樹(shù)葉黃酮利用率以及為工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的理論參考。在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下，黃酮類化合物與鋁鹽生成鰲合物，加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色，是因?yàn)閬喯跛徕c還原黃酮，加硝酸鋁絡(luò)合，加氫氧化鈉使黃酮類化合物開(kāi)環(huán)，生成2’OH查耳酮而顯色。利用黃酮類化合物中的3羥基、4羥基、5羥基、4羰基或鄰二位酚羥基，與Al3＋進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物的原理測(cè)定其含量。 主要藥品與試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、95%乙醇、石油醚、亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉。 主要儀器與器具T6可見(jiàn)分光光度計(jì)、TE124S電子天平、RE52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、回流提取裝置、DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、燒杯，容量瓶，移液管，移液槍，量筒，比色管等。采用Soxhlet提取法，以沸程為30℃60℃的石油醚為脫脂劑于45℃水浴中脫脂3次每次2小時(shí)，充分除去樣品中脂類和脂溶性色素。 相關(guān)溶液的配制5%亞硝酸鈉溶液： g亞硝酸鈉，置燒杯充分溶解，定容到50 mL容量瓶。1 mol/L氫氧化鈉：準(zhǔn)確稱量10 g氫氧化鈉，置燒杯充分溶解，定容到250 mL容量瓶。50%，60%，80%，90%乙醇溶液用類似方法配得。 黃酮含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[5]：稱取約50 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于稱量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重，干燥器中冷卻，精確稱取25 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇定容至25 mL， mL定容到25 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。以空白溶液作參比，在λ= 510 nm處測(cè)吸光度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)液濃度(C)與吸光度(A)的回歸方程A = kC + b。取該溶至10 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，搖勻。 黃酮含量測(cè)定方法按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法操作，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度C?？傸S酮提取率（mg/g）= CNV/m式中，C 為測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度（mg/mL）；N 為稀釋倍數(shù)，；V 為最初樣品定容體積（mL），數(shù)值為50；m為樣品質(zhì)量（g），數(shù)值為1。 提取次數(shù)的影響取樣品1 g，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1：40，恒溫70℃，回流提取兩次，每次120 min，分別萃取1 、2 、3 、4次，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。 提取溫度的影響取樣品1 g，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1：40，回流提取兩次，每次120 min，分別于50℃、60℃、70℃、80℃提取，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。參考文獻(xiàn)[17]，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上從料液比、提取次數(shù)、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間五個(gè)因素中精心篩選出3個(gè)對(duì)黃酮乙醇提取影響比較顯著的因素：料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度，在固定提取時(shí)間