生命科學(xué)進(jìn)展ppt課件-在線瀏覽
2025-06-29 12:34本頁面
【正文】 GSTpull down方法是將誘餌蛋白質(zhì)和 GST標(biāo)簽融合表達(dá)。 GST X 谷胱甘肽 瓊脂糖球珠 細(xì)胞裂解物 4℃ 下孵育 2h GST融合蛋白 GST X GST X GST X Y GSTpull down篩選未知的結(jié)合蛋白 設(shè)置 GST對(duì)照，排除 GST的影響 Y Y Y Bind Wash to remove unbound protein Elute Analyze Bind GSTpull down驗(yàn)證兩個(gè)已知蛋白的相互作用 GST X 谷胱甘肽 瓊脂糖球珠 純化的 Y蛋白 4℃ 下孵育 2h GST融合蛋白 GST X GST X GST + + GST 純化的 Y蛋白 GST Y Y Y Bind Wash to remove unbound protein Detect Bind Bind 1. 不需要制備抗體來檢測(cè)結(jié)合情況； 2. 不需要對(duì)誘餌蛋白進(jìn)行標(biāo)記，避免了使用同位素等危險(xiǎn)物質(zhì)； GSTpull down的優(yōu)點(diǎn) GSTpull down的缺點(diǎn) 2. 假陽性。 1. 該方法只適用于確定體外的相互作用； 3. 融合蛋白可能會(huì)影響蛋白的真實(shí)結(jié)構(gòu)和功能。如果用蛋白質(zhì) X的抗體免疫沉淀 X，那么與 X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì) Y也能沉淀下來。 2. 免疫共沉淀 (Coimmunoprecipitation) Binding wash elution Y Y 細(xì)胞裂解物 Detection 免疫共沉淀技術(shù)流程 1. 檢測(cè)是在生理?xiàng)l件下進(jìn)行，可以真實(shí)地體現(xiàn)在生命過程中蛋白質(zhì)之間的相互作用； 2. 可進(jìn)行大規(guī)模的篩選； 3. 可檢測(cè)依賴于修飾的蛋白質(zhì)之間的相互作用 。 免疫共沉淀技術(shù)的 優(yōu)點(diǎn) 免疫共沉淀技術(shù)的 缺點(diǎn) 1. 靈敏性不高。受免疫球蛋白的干擾容易產(chǎn)生假陽性；需要制備高質(zhì)量抗體。 ?誘餌蛋白的標(biāo)記技術(shù) PNAS, 2022 JBC, 2022 FEBS J, 2022 ?樣品蛋白的分離和固定技術(shù) Ligand blot的應(yīng)用 BBRC, 2022 1. 轉(zhuǎn)膜前需要將蛋白質(zhì)復(fù)性，不能完全恢復(fù)到天然狀態(tài)； Ligand blot技術(shù)的 缺點(diǎn) 2. 需要對(duì)蛋白進(jìn)行標(biāo)記或要制備抗體； 2. 靈敏度不高，很難鑒定分離低表達(dá)量的相互作用蛋白； 2. 實(shí)驗(yàn)在體外進(jìn)行，很難鑒定修飾的蛋白或蛋白復(fù)合體。 Outline Regulatory RNAs in Bacteria Discovery of sRNA Target of sRNA Prediction sRNA in Bacillus cereus group Regulatory RNAs in Bacteria Riboswitches CRISPR sRNAs (small RNAs) Riboswitches 位于所調(diào)節(jié)的 mRNA的 5’端 與所調(diào)節(jié)的 mRNA一起轉(zhuǎn)錄
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1