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【正文】 ?誘餌蛋白的標(biāo)記技術(shù) PNAS, 2022 JBC, 2022 FEBS J, 2022 ?樣品蛋白的分離和固定技術(shù) Ligand blot的應(yīng)用 BBRC, 2022 1. 轉(zhuǎn)膜前需要將蛋白質(zhì)復(fù)性，不能完全恢復(fù)到天然狀態(tài)； Ligand blot技術(shù)的 缺點(diǎn) 2. 需要對蛋白進(jìn)行標(biāo)記或要制備抗體； 2. 靈敏度不高，很難鑒定分離低表達(dá)量的相互作用蛋白； 2. 實(shí)驗(yàn)在體外進(jìn)行，很難鑒定修飾的蛋白或蛋白復(fù)合體。如果用蛋白質(zhì) X的抗體免疫沉淀 X，那么與 X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì) Y也能沉淀下來。被吸附的蛋白可以通過改變洗脫液或者洗脫條件而回收下來，然后對其進(jìn)行分析鑒定。 ? 一系列噬菌體文庫的構(gòu)建 — 噬菌體展示技術(shù)煥發(fā)出了新的生命力。 酵母雙雜交系統(tǒng)工作原理 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)流程 酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用范圍 1. 檢測已知蛋白質(zhì)之間的相互作用； 2. 確定蛋白質(zhì)相互作用功能區(qū)域位點(diǎn)； 3. 篩選與靶蛋白發(fā)生相互作用的未知蛋白。 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò) 蛋白質(zhì)相互作用的檢測和分析方法 一，酵母雙雜交系統(tǒng)， Yeast TwoHybrid System； 二，噬菌體表面展示技術(shù) ， Phage Display； 1. 谷胱苷肽 S轉(zhuǎn)移酶沉淀， GSTpull down； 三，基于親和層析的蛋白質(zhì)相互作用研究平臺(tái) 2. 免疫共沉淀， Coimmunoprecipitation； 3. 親和印跡， Ligand blot。生命科學(xué)進(jìn)展 羅曉霞 中心法則 生命現(xiàn)象的研究逐漸由獲取基因序列信息轉(zhuǎn)向研究基因功能，基因功能的具體體現(xiàn)者就是蛋白質(zhì)。 一，酵母雙雜交系統(tǒng) Yeast TwoHybrid System ? 1989年 Field 和 Song等人在酵母細(xì)胞中設(shè)計(jì)的分析蛋白質(zhì)相互作用的方法，以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)構(gòu)和活性特點(diǎn)為基礎(chǔ)的。 ? 不需分離和標(biāo)記靶蛋白，采用高拷貝和強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體使雜合蛋白過量表達(dá)，避免蛋白質(zhì)純化過程； ? 檢測在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，真實(shí)反應(yīng)體內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用情況； ? 敏感度高，可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用； ? 可進(jìn)行高通量篩選； ? 成本低，無需特殊的檢測設(shè)備。 噬菌體展示技術(shù)的發(fā)展簡史 利用固相支持物上的抗體或受體，采用親和篩選法從噬菌體文庫中篩選出能結(jié)合篩選分子的目的噬菌體。 1. 谷胱苷肽 S轉(zhuǎn)移酶沉淀試驗(yàn) (GSTpull down) 1988年 smith等利用谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出 GST融合蛋白，從此 GST融合蛋白在蛋白質(zhì)相互作用研究領(lǐng)域里得到了極大的推廣。之后 純化靶蛋白免疫復(fù)合物 ， 凝膠電泳分離后 ， 質(zhì)譜鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。 Ligand blot技術(shù)的 優(yōu)點(diǎn) 1. 操作簡便，尤其是對于在變性條件下也能發(fā)生相互作用的蛋白的鑒定和驗(yàn)證； 2. 可鑒定靶蛋白與受體的結(jié)合位點(diǎn)。
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