生命科學(xué)進(jìn)展ppt課件-wenkub
2023-05-27 12:34:04 本頁面
【正文】 起 mRNA降解或者翻譯終止 Waters and Storz ,Cell, 2022 TransEncoded Base Pairing sRNAs 往往位于基因之間的間隔區(qū)，有獨(dú)立的啟動子和轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn) 長度一般 50到 600bp，主要是 50到 200nt之間 與目標(biāo)基因相隔較遠(yuǎn) 與目標(biāo)基因形成不完全的匹配，往往需要輔助蛋白來加強(qiáng)這種匹配 與目標(biāo)基因的匹配的區(qū)域一般 1025bp Pichon et al., Bioinformatics, 2022。受免疫球蛋白的干擾容易產(chǎn)生假陽性；需要制備高質(zhì)量抗體。 2. 免疫共沉淀 (Coimmunoprecipitation) Binding wash elution Y Y 細(xì)胞裂解物 Detection 免疫共沉淀技術(shù)流程 1. 檢測是在生理?xiàng)l件下進(jìn)行，可以真實(shí)地體現(xiàn)在生命過程中蛋白質(zhì)之間的相互作用； 2. 可進(jìn)行大規(guī)模的篩選； 3. 可檢測依賴于修飾的蛋白質(zhì)之間的相互作用 。 1. 該方法只適用于確定體外的相互作用； 3. 融合蛋白可能會影響蛋白的真實(shí)結(jié)構(gòu)和功能。 GSTpull down方法是將誘餌蛋白質(zhì)和 GST標(biāo)簽融合表達(dá)。 噬菌體表面展示優(yōu)點(diǎn) ? 需要標(biāo)記的抗體或配體來檢測結(jié)合情況； ? 外源蛋白大小受到限制，不能研究大分子量蛋白質(zhì)的相互作用； ? 原核表達(dá)體系中外源蛋白質(zhì)無法正確折疊或修飾； ? 融合蛋白可能會影響到蛋白質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)或生物活性。 在噬菌體 pIII和 pⅧ 衣殼蛋白 N端插入外源待篩基因編碼的蛋白或 cDNA文庫，形成的融合蛋白表達(dá)在噬菌體顆粒的表面； 外源多肽或蛋白質(zhì)表達(dá)在噬菌體的表面，其編碼基因可通過分泌型噬菌體的單鏈 DNA測序推導(dǎo)出來。 ? 1988年 Parmley — 將已知抗原決定簇與噬菌體 PⅢ N端融合呈現(xiàn)在其表面。 ? 基因型和表型相聯(lián)系，可直接得到相互作用蛋白的編碼序列。 ? GAL4分子的 DNA結(jié)合域可以和上游激活序列 (upstream activating sequence， UAS)結(jié)合，而轉(zhuǎn)錄激活域則能激活 UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。 ? Stelzl 等 (2022)和 Raul 等 (2022)則先后分析了人腦組織、人已知 ORF中大規(guī)模的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。 ? 蛋白質(zhì)之間相互作用以及通過相互作用而形成的蛋白復(fù)合物是細(xì)胞各種基本功能的主要完成者。 前言： 蛋白質(zhì)相互作用 ? 蛋白質(zhì)可以通過某種方式與蛋白質(zhì)，核酸或其他分子之間發(fā)生相互作用而形成一定形態(tài)的蛋白復(fù)合物。 多亞基蛋白復(fù)合體 酶 底物 抗原 抗體 研究蛋白質(zhì)相互作用的重要意義 ? 絕大多數(shù)疾病都是由特定蛋白質(zhì)相互作用所致。 ? 每一種蛋白質(zhì)不是孤立存在于細(xì)胞中，而是與其它蛋白質(zhì)或核酸或其他小分子一起進(jìn)行相互作用來行使其功能，從而使得細(xì)胞中所有蛋白質(zhì)形成一個(gè)相互作用的網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)功能相同和相似的蛋白質(zhì)在一起組成相關(guān)的功能模塊，以完成相關(guān)的生理功能。 ? Rain 等 (2022)用該法
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