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2025-06-29 06:35本頁面
【正文】 穩(wěn)定性。 ? 連鎖分析是確定兩個遺傳標記或者更多遺傳標記 之間的物理關(guān)系，以確定致病基因的位置。 EST的應用 ? 構(gòu)建遺傳學圖譜 遺傳圖譜、物理圖譜和轉(zhuǎn)錄圖譜 ,是基因組計劃要獲得的 3張遺傳學圖譜。而且 ,由于 EST序列是轉(zhuǎn)錄基因的產(chǎn)物 ,可用來直接構(gòu)建遺傳連鎖圖 ,通過與基因組文庫序列比較 ,可以提供內(nèi)含子結(jié)構(gòu) ,可選擇剪切方式 ,轉(zhuǎn)錄起始和終止位點等信息。由于在構(gòu)建 cDNA文庫時要盡可能的選用全長 cDNA,所以一旦發(fā)現(xiàn)有價值的 EST,可以找到對應的克隆 ,獲得的全長 cDNA可以直接用于轉(zhuǎn)基因等研究。 EST的應用 ? 基因差異表達的研究 通過比較不同發(fā)育時期和每個發(fā)育時期不同組織器官 cDNA文庫中的 EST信息 ,可以繪出該物種在特定時間和空間的基因表達的發(fā)育順序譜。 EST的應用 ? 基因的定位克隆 以 EST為重要來源的染色體物理圖譜進一步方便了對抗病基因的連續(xù)分析 ,可將抗病基因定位在染色體中的狹小區(qū)段 ,縮小抗病基因的篩選范圍。 EST的應用 ? 比較基因組學的研究 利用 EST序列中古老保守序列來研究生物中間的進化關(guān)系 ,可以避免選擇家系、構(gòu)建群體、大量的統(tǒng)計分析等周期 ,長而繁瑣的遺傳圖譜的制作過程。 EST的應用 ? 用于制備 cDNA芯片 芯片技術(shù) ,是目前高通量篩選 EST的有效方法。 EST計劃的實施不僅獲得了關(guān)于表達基因的信息資源同時也獲得了大量已經(jīng)經(jīng)過功能鑒定了的 cDNA克隆資源而這些資源都是功能基因組研究所不可缺少的。 1. 將 5μg含有 oligo dT（引物）的磁珠與RNA混合。 3. 用 NlaⅢ 酶消化形成一條鏈末端有標簽的產(chǎn)物。 5. 用 Mme I切割每一個樣品形成約 60bp的標簽。 7. PCR擴增。 9. 連接片斷形成串聯(lián)體。 SAGE實例 DNA芯片 ? DNA芯片（ DNA chip）也叫基因芯片（ Gene chip） ? 是指在固相載體（玻璃，硅等）上有序地，高密度地（點間距小于 500μm）排列固定了大量的靶基因或寡核苷酸（也叫探針）。 基因芯片基本操作流程 ? 制備總 RNA mRNA經(jīng) RTPCR用 Cy3（正常對照組）和Cy5（實驗組）熒光標記目的基因，得到 cDNA探針 混合標記探針 與表達譜芯片上核苷酸片段（或基因）雜交 掃描 分析雜交結(jié)果 結(jié)論 基因芯片 基因芯片的應用 ? 生物信息學的工具 ? 基因相關(guān)性研究 ? 基因功能 ? 藥物設(shè)計和開發(fā) ? 潛在反義試劑開發(fā) ? 個體化醫(yī)療 ? 身份識別 ? 基因診斷 ? 其他與生物有關(guān)的領(lǐng)域 ? 特定基因檢
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