制備hplc技術(shù)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-23 12:04本頁面
【正文】 之比有的甚至小于 1： 100000，進樣體積一般來說都大大小于色譜柱體積（小于 1： 100)。而在制備液相中，最大的區(qū)別就是超量進樣。需大型的色譜柱和大量的溶劑來分離較少的樣品，不經(jīng)濟 色譜柱超量載樣： 相同的條件下超量進樣 濃縮法和體積超載法 制備 HPLC技術(shù)問題 — 超量載樣 濃縮法超量載樣 體積法超量載樣 提高樣品的濃度，保持進樣體積不變；取決于組分在流動相中的溶解度；生產(chǎn)效率決定于選擇性；受固定相粒度大小的影響不大 取決于進樣體積，生產(chǎn)效率決定于制備柱直徑，需要小顆粒填料。同時，若樣品體積太大，分辨能力就會下降；若樣品過濃，則可能在柱的頂部形成沉淀。 可將樣品溶于不同于流動相的溶劑，但用此法時需很謹慎。應(yīng)該能用甲醇溶樣。在洗脫時，先讓洗脫液通過此小柱，然后在上分離柱（干法上樣）。一是解決了溶解的問題。 如果多肽類，調(diào)一下 PH值常常會得到很滿意的效果 首先如果調(diào)節(jié) PH值可以溶最好，不行用甲醇乙腈， DMSO， THF ，最好每次只加一種溶劑 試溶 注意！ 固體上樣 制備 HPLC技術(shù)問題 — 應(yīng)用舉例 如果樣品溶解在高比例甲醇中，上樣體積一定要小，否則就會不保留．原因是大量強極性的樣品溶劑破壞了柱平衡．有時會看到陡的前沿和長拖尾．甚至同一樣品出兩個峰． DMSO可能對柱子不是很好 順序也很重要，比如，先加水再加甲醇不溶，先加甲醇再加水就溶了 用二氯甲烷可能的問題是不混溶 注意問題 上樣量的調(diào)整： mp/ma=lp/la * r2p/r2a L:柱長； m：進樣量； r：色譜柱內(nèi)徑 p: 制備柱； a：分析柱 制備 HPLC技術(shù)問題 — 上樣量的選擇 上樣量主要根據(jù) a、柱子的大小 b、樣品的濃度 c、制備是否根據(jù)分析條件放大（例如制備柱是否還用分析用填料） 根據(jù)內(nèi)徑計算：內(nèi)徑放大 N倍，迚樣量大致可放大 N平方倍（柱長一定時） 將分析色譜上的結(jié)果放大到制備色譜中： 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 通常采用將分析 HPLC上的條件進行優(yōu)化、放大后應(yīng)用到制備 HPLC中。制備的首要概念是在達到純化的基礎(chǔ)上，降低成本，加快時間（提高效率） 。既然組分的分離需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的時候，優(yōu)化溶解性、特別是選擇性就是一項很重要的工作。 選擇性與超量載樣 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的選擇 從分析方法到制備方法的放大和方法的優(yōu)化需要三個步驟： 1. 優(yōu)化分析方法的 選擇性 。 3. 放大到制備柱。制備色譜中，最好的線形放大是在其他工藝條件不變的情況下，只改變柱子和流速，就可以放大生產(chǎn)，同時分離效果保持不變。 一般情況下，放大由加樣量變化決定。 小結(jié) 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 盡可能正相制備用正相分析柱摸條件 ,反相制備用反相分析摸條件 ,包括流動相的選擇性 , 基于分析柱上的條件及得到的相應(yīng)分離度可以大致判斷出初步的制備條件 , 如制備填料粒徑 ,柱長 ,洗脫條件 (需要考慮到經(jīng)濟性 ). 這些條件是初步的 ,此后需要做大量的優(yōu)化工作 . 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 如果推算條件適當(dāng) ,小進樣量條件下在制備柱上應(yīng)該得到較好的分離 , 在這個基礎(chǔ)上優(yōu)化洗脫條件 , 然后逐步增加進樣體積 ,試驗得到柱子能承受的最大進樣體積 , 然后在最大進樣體積下提高濃度 ,試驗得到柱子能承受的最大濃度 . 這里還有優(yōu)化方向的選擇 ,比如是追求最大單次純品回收率還是追求最大單次純品產(chǎn)量 ,方向不同 ,最佳條件就會不同 . 制備 HPLC技術(shù)問題 — 條件的優(yōu)化 基于分析和制備的不同目的，色譜方案是有很
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1