【正文】 向啟動(dòng)子的結(jié)合部位，并跨入了轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，開始轉(zhuǎn)錄。 核心酶沿模板 DNA前移，進(jìn)入延長階段。 這種形狀說明： 2022/5/25 31 ? 依賴 Rho 因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? 非依賴 Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止 三、原核生物轉(zhuǎn)錄終止分為依賴 ρ(Rho)因子與非依賴 ρ因子兩大類 轉(zhuǎn)錄終止 指 RNA聚合酶在 DNA模板上停頓下來不再前進(jìn) ， 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來 。 ? ρ因子能結(jié)合 RNA， 又以對(duì) poly C的結(jié)合力最強(qiáng) 。 （一）依賴 ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? ρ因子： 2022/5/25 33 ? ρ因子的作用原理： 2022/5/25 34 ? 目前認(rèn)為 ， ρ因子終止轉(zhuǎn)錄的作用是：與 RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物結(jié)合 ， 結(jié)合后 ρ因子和RNA聚合酶都可發(fā)生構(gòu)象變化 ， 從而使RNA聚合酶停頓 ， 解螺旋酶的活性使DNA/RNA雜化雙鏈拆離 ， 利于產(chǎn)物從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中釋放 。 ? RNA產(chǎn)物 3’端往往形成 莖環(huán)結(jié)構(gòu) ，該結(jié)構(gòu)阻礙 RNA聚合酶前移。 寡聚 U有利于RNA不再依附 DNA模板鏈而脫出。 2022/5/25 38 ? 莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理： ? 使 RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓； ? 使轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解離， RNA產(chǎn)物釋放。pppG 5? 3? 3?5? RNApol 2022/5/25 39 第三節(jié) 真核生物的轉(zhuǎn)錄過程 The Process of Transcription in Eukaryote ? 真核生物的轉(zhuǎn)錄過程比原核復(fù)雜。 一、 真核生物有三種 RNA聚合酶 RNA聚合酶 Ⅰ （ RNA PolⅠ ） RNA聚合酶 Ⅱ （ RNA PolⅡ ） RNA聚合酶 Ⅲ （ RNA Pol Ⅲ ） 2022/5/25 40 真核生物的 RNA聚合酶 種類 I II III 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 45srRNA hnRNA 5srRNA、 tRNA、 snRNA 對(duì)鵝膏蕈堿的反應(yīng) 耐受 極敏感 中度敏感 酶圖 2022/5/25 41 ? 真核生物 RNA聚合酶的結(jié)構(gòu)比原核生物復(fù)雜， 所有真核生物的 RNA聚合酶都有兩個(gè)不同的大亞基和十幾個(gè)小亞基 . ? RNA聚合酶 Ⅱ 由 12個(gè)亞基組成 ， 其最大的亞基稱為 RBP1。 CTD對(duì)于維持細(xì)胞的活性是必需的 。 ? 真核生物的轉(zhuǎn)錄起始上游區(qū)段比原核生物多樣化 ? 轉(zhuǎn)錄起始時(shí)， RNApol不直接結(jié)合模板 ，其起始過程比原核生物復(fù)雜。 ? 起始點(diǎn)上游多數(shù)有共同的 TATA序列 ， 稱為 Hognest盒或 TATA盒 (TATA box)。 2022/5/25 45 ? 許多 RNA聚合酶 II識(shí)別的啟動(dòng)子具有保守的共有序列：位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)附近的起始子(intiator， Inr) 。 ? 增強(qiáng)子 是能夠結(jié)合特異基因調(diào)節(jié)蛋白 ， 促進(jìn)鄰近或遠(yuǎn)隔特定基因表達(dá)的 DNA序列 。 ?反式作用因子中 ， 直接或間接結(jié)合 RNA聚合酶的 ， 則稱為 轉(zhuǎn)錄因子 ( transcriptional factors, TF)。 ? 通常包括： – 可誘導(dǎo)因子或上游因子與增強(qiáng)子或啟動(dòng)子上游元件的結(jié)合； – 通用轉(zhuǎn)錄因子在啟動(dòng)子處的組裝； – 輔激活因子和 /或中介子在通用轉(zhuǎn)錄因子 /RNA聚合酶 II復(fù)合物與可誘導(dǎo)因子 、 上游因子之間的輔助和中介作用 。 2022/5/25 51 Ⅱ 型基因中的四類轉(zhuǎn)錄因子 轉(zhuǎn)錄因子 具體組分 結(jié)合序列 功能 基本組分 TBP,TFⅡ A,B,E,G,F和 H TBP結(jié)合TATA盒 轉(zhuǎn)錄起始定位； 轉(zhuǎn)錄起始和延長 輔激活因子 TAFs和中介子 在可誘導(dǎo)因子和上游因子與基本轉(zhuǎn)錄因子、 RNA聚合酶結(jié)合中起聯(lián)結(jié)和中介作用 上游因子 SP ATF、CTF等 啟動(dòng)子上游元件 協(xié)助基本轉(zhuǎn)錄因子，提高轉(zhuǎn)錄效率和專一性 可誘導(dǎo)因子 如 MyoD、HIF1等 增強(qiáng)子等遠(yuǎn)隔調(diào)控序列 時(shí)間和空間（組織）特異性地調(diào)控轉(zhuǎn)錄 2022/5/25 52 （三） 轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物 ? 真核生物 RNApol不與 DNA分子直接結(jié)合，而需依靠眾多的轉(zhuǎn)錄因子。 ?形成 PIC的順序如下： TATA PIC TF II D TF II A TF II B TF II E RNApol II/TF II D TATA 由 RNAPol Ⅱ 催化轉(zhuǎn)錄的 PIC形成 Ⅱ A Ⅱ B POLⅡ TFⅡ F Ⅱ H Ⅱ E TBP TAF TFⅡ DⅡ AⅡ BDNA復(fù)合物 POLⅡ TFⅡ F Ⅱ A Ⅱ B TBP TAF TATA Ⅱ H Ⅱ E CTD P PIC組裝完成， TFⅡ H使 CTD磷酸化 2022/5/25 54 ?PIC的形成與轉(zhuǎn)錄 2022/5/25 55 （四）少數(shù)幾個(gè)反式作用因子的搭配啟動(dòng)特定基因的轉(zhuǎn)錄 （拼板理論） ? 為了保證轉(zhuǎn)錄的準(zhǔn)確性 ， 不同基因需不同轉(zhuǎn)錄因子 。 ? 拼板理論 (piecing theory) ： – 幾個(gè) 特定的 反式作用因子 （ 主要是可誘導(dǎo)因子和上游因子 ） 之間互相作用 ， 再與基本轉(zhuǎn)錄因子 、RNA聚合酶搭配而 有針對(duì)性地結(jié)合 、 轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的基因 。 2022/5/25 56 三 、真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程中沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象 ?真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似 ， 但因有核膜相隔 ， 沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象 。 ?轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到 核小體移位和解聚 現(xiàn)象 。 ?真核生物 mRNA有聚腺苷酸 (poly A)尾巴結(jié)構(gòu) ，是轉(zhuǎn)錄后才加進(jìn)去的 。 ?已發(fā)現(xiàn) ， 在讀碼框架的下游 ， 常有一組共同序列 AATAAA， 再下游還有相當(dāng)多的 GT序列 。 2022/5/25 59 轉(zhuǎn)錄終止與加尾修飾 2022/5/25 60 第四節(jié) 真核生物 RNA的加工 Posttranscriptional Modification of Eukaryotic RNA ? 真核生物轉(zhuǎn)錄生成的 RNA分子是初級(jí)RNA轉(zhuǎn)錄物 (primary RNA transcript)， 幾乎所有的初級(jí) RNA轉(zhuǎn)錄物都要經(jīng)過加工， 才能成為具有功能的成熟的 RNA。 2022/5/25 61 ? 幾種主要的修飾方式： 1. 剪接 (splicing) 2. 剪切 (