【正文】 劑對(duì)rhbFGF的穩(wěn)定性和生物活性的影響；采用正交及均勻設(shè)計(jì)考察藥效成分與輔料之間的協(xié)同性研究。. 外用溶液臨床前研究：根據(jù)現(xiàn)行的藥品注冊(cè)管理辦法，可免做藥理毒理實(shí)驗(yàn)，需按要求整理相關(guān)資料。. 重點(diǎn)解決的技術(shù)關(guān)鍵問(wèn)題. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）新劑型開(kāi)發(fā)中若保護(hù)劑選擇不當(dāng)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)主藥活性喪失或無(wú)法檢測(cè)或刺激性大等問(wèn)題，所以蛋白活性保護(hù)、檢測(cè)方法靈敏度與特異性問(wèn)題尚需優(yōu)化。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）是不穩(wěn)定蛋白，生產(chǎn)制備過(guò)程中若操作不當(dāng)或保護(hù)劑選擇不當(dāng)，易出現(xiàn)聚合、N端降解、活性喪失等問(wèn)題，從而導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量不合格，所以制備過(guò)程中重點(diǎn)提高蛋白穩(wěn)定性，并進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性的考察。4. 項(xiàng)目的技術(shù)特色和水平. 成果來(lái)源及知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子是國(guó)家一類(lèi)新藥，由北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司和暨南大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)研發(fā)中心共同研制，并取得多項(xiàng)國(guó)家專(zhuān)利和國(guó)際專(zhuān)利。南海朗肽制藥有限公司在取得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子技術(shù)之后，于2003年建立中試車(chē)間，進(jìn)行外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凍干制劑的生產(chǎn)和銷(xiāo)售。同時(shí)，在實(shí)現(xiàn)外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子產(chǎn)業(yè)化的過(guò)程中，以外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子為核心，研究開(kāi)發(fā)出一系列的新劑型，為本項(xiàng)目的后續(xù)發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。. 國(guó)外技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)1940年，Hoffman等在牛腦垂體提取物中發(fā)現(xiàn)一種能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)，70年代部分純化這些提取物，發(fā)現(xiàn)它是成纖維細(xì)胞的一種有絲分裂原(mitogen)，1975年定名為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Fibroblast growth factor ，F(xiàn)GF），并初步確定了它的理化性質(zhì)。1985年Esch，1986年GimenezGallego分別確定堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）和酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（aFGF）的氨基酸順序。Abraham等人在1986年獲得bFGF的cDNA克隆，從此bFGF的研究進(jìn)入分子生物學(xué)階段。bFGF對(duì)血管的形成、分化具有重要的誘導(dǎo)作用，因此它又可開(kāi)發(fā)為保健品添加劑。. 國(guó)內(nèi)技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子作為一種創(chuàng)面修復(fù)的較理想的藥物，在國(guó)內(nèi)已經(jīng)被批準(zhǔn)上市銷(xiāo)售。局部外用未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，對(duì)人體各器官系統(tǒng)功能無(wú)損害。第二代外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凍干制劑在南海朗肽制藥公司和北京雙鷺制藥公司進(jìn)行生產(chǎn)。（2）采用大腸桿菌溫控表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)，與第一代采用IPTG誘導(dǎo)型表達(dá)載體相比，大大降低了生產(chǎn)成本，具有極強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。. 項(xiàng)目技術(shù)特點(diǎn)以及與現(xiàn)有技術(shù)或工藝比較具有的優(yōu)勢(shì)：. 基因來(lái)源于東方人血紅細(xì)胞，采用RTPCR方法直接克隆人的bFGF基因。. 重組蛋白是人源化的基因表達(dá)產(chǎn)物，與人體100%同源，應(yīng)用于人體具有免疫原性和致敏性低等優(yōu)點(diǎn)。. 對(duì)瘢痕形成影響不同常規(guī)藥物治療創(chuàng)傷、潰瘍由于是抗感染被動(dòng)修復(fù)過(guò)程，因而容易留下瘢痕和色素沉著；而重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子質(zhì)量創(chuàng)傷、潰瘍由于是主動(dòng)修復(fù)過(guò)程，愈合時(shí)間段，因而可有效減少瘢痕形成和色素沉著。5. 項(xiàng)目的技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo). 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子產(chǎn)業(yè)化的主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)和水平目的蛋白表達(dá)率將在20~30%之間，產(chǎn)量可達(dá)每升培養(yǎng)物80~100mg，目的蛋白收率可達(dá)50%，純度≥98%，比活性≥1106IU/mg；凍干收率達(dá)95%以上，技術(shù)水平可達(dá)國(guó)內(nèi)先進(jìn)。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）系列制劑的研究開(kāi)發(fā)的主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)和水平. 建立重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子外用凝膠和滴眼液的穩(wěn)定生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。. 獲得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子外用凝膠的生產(chǎn)批件。. 開(kāi)發(fā)出10~20個(gè)重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）美容化妝品。. 2009年7月至2011年7月，完成重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凝膠劑的臨床試驗(yàn)。. 2009年10月至2011年12月，完成重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子滴眼液臨床前研究。三、 項(xiàng)目技術(shù)路線1. 技術(shù)總路線從人血細(xì)胞提取mRNA 反轉(zhuǎn)錄PCRbFGF基因 分子克隆技術(shù)構(gòu)建基因工程菌株 發(fā)酵生產(chǎn) 分離純化rhbFGF原料 保護(hù)劑 rhbFGF外用凝膠、外用溶液、滴眼液 真空凍干rhbFGF凍干制劑成品2. 關(guān)鍵技術(shù)及創(chuàng)新點(diǎn)分析. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）產(chǎn)業(yè)化重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）產(chǎn)業(yè)化需要解決的首要問(wèn)題是原料來(lái)源，本項(xiàng)目通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵工藝和純化工藝，使得目的蛋白重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)量大大提高至100mg/L，已經(jīng)達(dá)到國(guó)內(nèi)外領(lǐng)先水平，保證了產(chǎn)業(yè)化及后續(xù)制劑開(kāi)發(fā)的原料來(lái)源問(wèn)題；其次，通過(guò)優(yōu)化凍干工藝，使得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凍干制劑的水分在3%以下，既保證了重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性穩(wěn)定性，又保證了凍干粉的外觀形狀。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）外用凝膠的關(guān)鍵技術(shù)和創(chuàng)新點(diǎn)分析目前國(guó)內(nèi)外rhbFGF只有凍干制劑上市，rhbFGF凝膠劑完成后將為臨床提供基于濕性愈合理論的新藥，與凍干制劑比，臨床使用頻率由每日使用、每日兩次該成隔日使用、每日一次，而且減少換藥粘連、提高療效。rhbFGF凝膠劑處方中的卡波姆和透明質(zhì)酸的合理配比使其兼具緩釋和保濕功能；凝膠劑加入可與bFGF特異結(jié)合的肝素，以增強(qiáng)bFGF與受體的結(jié)合能力，并增強(qiáng)對(duì)酸、堿、熱等因素的抗性，加入肝素后，生物學(xué)活性提高至少2倍，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；脂質(zhì)體主要由天然磷脂和膽固醇組成，進(jìn)入體內(nèi)后可被生物降解，不會(huì)積累在體內(nèi)，且免疫原性小。通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞和融合作用，脂質(zhì)體可直接將藥物送入細(xì)胞內(nèi)，避免使用高濃度游離藥物；凝膠劑作為脂質(zhì)體局部給藥的載體，可在脂質(zhì)體周?chē)纬梢坏榔琳峡刂浦|(zhì)體中藥物釋放的速率，避免藥物的突釋效應(yīng)，同時(shí)凝膠劑手感細(xì)膩，易清洗。外用溶液是在加入可與FGF特異結(jié)合的肝素，以增強(qiáng)FGF與受體的結(jié)合能力，并增強(qiáng)對(duì)酸、堿、熱等因素的抗性，同時(shí)，加入生物活性保護(hù)劑海藻糖，從而實(shí)現(xiàn)FGF的液體保存狀態(tài)，減少了復(fù)溶過(guò)程可能的污染，成本更低，使用更安全。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rhbFGF）滴眼液的關(guān)鍵技術(shù)和創(chuàng)新點(diǎn)分析眼表疾病是我國(guó)最主要和最常見(jiàn)的致盲眼病之一，該病病因復(fù)雜，治療棘手，常因診治延誤導(dǎo)致愈合延遲或者不愈合，甚至致盲。蛋白質(zhì)類(lèi)滴眼液的研制，關(guān)鍵是解決這類(lèi)藥物的穩(wěn)定性問(wèn)題，在一定溶液條件下，rhbFGF分子中Met、Cys、His、Trp及Tyr的某些基團(tuán)與各種活潑氧具有很高的反應(yīng)性易受到氧化，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的活性下降，容易發(fā)生水不溶性聚集而沉淀。另外，本項(xiàng)目在國(guó)內(nèi)率先建立動(dòng)物角膜上皮激光損傷模型并建立定量評(píng)價(jià)角膜上皮恢復(fù)指標(biāo)：角膜上皮損傷修復(fù)，難于進(jìn)行定量評(píng)價(jià)，因此很難科學(xué)評(píng)價(jià)一個(gè)藥物對(duì)角膜上皮細(xì)胞的修復(fù)程度。鑒于角膜損傷修復(fù)后透光率的大小間接反應(yīng)角膜的修復(fù)情況，損傷修復(fù)后角膜上皮細(xì)胞數(shù)量反應(yīng)角膜細(xì)胞的再生水平，本項(xiàng)目藥效學(xué)評(píng)價(jià)中建立了三個(gè)科學(xué)可行的定量評(píng)價(jià)指標(biāo)：角膜透光率OD值，MTT方法檢測(cè)角膜上皮細(xì)胞數(shù)量，角膜損傷斑面積。能興集團(tuán)以房地產(chǎn)、商業(yè)、陶瓷等產(chǎn)業(yè)為主營(yíng)業(yè)務(wù)，是年納稅超億元的中國(guó)500強(qiáng)企業(yè)，暨南大學(xué)是具有百年歷史的嶺南名校，在生物工程、企業(yè)管理等領(lǐng)域具有傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)。截止至2009年6月30日，公司已生產(chǎn)外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80萬(wàn)支，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，成品一次檢驗(yàn)合格率達(dá)100%，原液一次檢驗(yàn)合格率為99%，據(jù)正在進(jìn)行考察的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示產(chǎn)品穩(wěn)定性良好。此生產(chǎn)基地包括生產(chǎn)車(chē)間5000m2，質(zhì)檢研發(fā)中心1000 m2，綜合樓6000m2，及庫(kù)房與公用輔助用房2200m2。新生產(chǎn)基地可進(jìn)行多種生物原料的生產(chǎn)和多種劑型的制造，如凍干制劑，噴霧劑，凝膠劑，滴眼劑，膜劑和小容量注射劑等，總產(chǎn)量可達(dá)年產(chǎn)800萬(wàn)支外用重組成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及相關(guān)系列產(chǎn)品。溫州醫(yī)學(xué)院通過(guò)近10年的銳意進(jìn)取，在生物制藥領(lǐng)域同樣具備了較為雄厚的研發(fā)實(shí)力，目前，已建立了一個(gè)符合GLP要求的藥物開(kāi)發(fā)研究室和符合GMP要求的藥物中試研究基地，總面積超過(guò)了3000平方米，設(shè)備總投資超過(guò)2000萬(wàn)元，同時(shí)建有浙江省生物技術(shù)制藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、國(guó)家新藥開(kāi)發(fā)工程研究中心制劑工程研究基地、浙江省遺傳學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等科研平臺(tái)，擁有1個(gè)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心和7家附屬三甲醫(yī)院，建立了2個(gè)國(guó)家GCP臨床研究基地。核心研究團(tuán)隊(duì)目前有高級(jí)職稱(chēng)37人:其中特聘院士2人；教育部“長(zhǎng)江學(xué)者”1人；“新世紀(jì)百千萬(wàn)人才工程”國(guó)家級(jí)人選2人；“新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃”獲得者3人；博導(dǎo)16人；碩士導(dǎo)師21人。本課題的主要技術(shù)負(fù)責(zé)人李校堃教授等人圍繞生長(zhǎng)因子系列藥物開(kāi)展了大量富有成效的工作，獲得了數(shù)十個(gè)包括國(guó)家“863”、“973”和國(guó)家自然基金等科研課題，在國(guó)內(nèi)外發(fā)表學(xué)術(shù)論文200余篇，其中SCI收錄79篇（包括《LANCET》、《PNAS》、《JCMM》等知名雜志），申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利39項(xiàng)，獲授權(quán)9項(xiàng)，科研團(tuán)隊(duì)過(guò)去十年間共獲得了3個(gè)國(guó)家一類(lèi)新藥新藥證書(shū)（rbbFGF衛(wèi)藥證字S01號(hào)）、rhbFGF國(guó)藥準(zhǔn)字S200100rhaFGF國(guó)藥證字S20060078)和1個(gè)三類(lèi)醫(yī)療器械（(rFGF生物海綿國(guó)食藥械（準(zhǔn)）字2004第3640131號(hào))并均成功實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化，創(chuàng)造了可觀的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，同時(shí)以上述研究為基礎(chǔ)，積極開(kāi)展產(chǎn)學(xué)研相結(jié)合的發(fā)展模式，孵化了3個(gè)國(guó)家發(fā)改委產(chǎn)業(yè)示范工程基地，建立了兩個(gè)教育部工程中心和1個(gè)國(guó)家工程研究中心。 3. 項(xiàng)目骨干及分工姓名年齡職稱(chēng)分工所在單位李校堃46教授技術(shù)總監(jiān)溫州醫(yī)學(xué)院黃亞?wèn)|39副研究員藥理藥效等臨床前研究暨南大學(xué)付廷靈45高級(jí)工程師生產(chǎn)及GMP車(chē)間管理南海朗肽制藥有限公司黃啟斌37中級(jí)工程師臨床試驗(yàn)、報(bào)批南海朗肽制藥有限公司劉罕奇38中級(jí)工程師成員，中試、生產(chǎn)南海朗肽制藥有限公司曲紅艷38中級(jí)工程師成員，質(zhì)量控制南海朗肽制藥有限公司李帝興30助理工程師成員，中試、生產(chǎn)南海朗肽制藥有限公司張?jiān)?8助理工程師成員，中試、生產(chǎn)南海朗肽制藥有限公司項(xiàng)目總負(fù)責(zé)人：李校堃：男，46歲，醫(yī)學(xué)博士，“長(zhǎng)江學(xué)者”特聘教授，國(guó)家百千萬(wàn)人才、教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才、省有突出貢獻(xiàn)中青年專(zhuān)家，享受?chē)?guó)務(wù)院特殊津貼，廣東暨大基因藥物工程研究中心有限公司首席科學(xué)家。付廷靈先生畢業(yè)于北京科技大學(xué)，在金融、資本運(yùn)營(yíng)和企業(yè)管理領(lǐng)域具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，曾經(jīng)在北京的證券公司專(zhuān)門(mén)從事企業(yè)上市輔導(dǎo)工作，參與了國(guó)內(nèi)多家大型企業(yè)的上市申請(qǐng)和推廣工作，在業(yè)界具有較大影響。在朗肽公司2年多的發(fā)展歷程中，付廷靈先生均負(fù)主要經(jīng)營(yíng)責(zé)任，組織人員在較短的時(shí)間內(nèi)完成了企業(yè)的籌建，藥品生產(chǎn)許可證申報(bào)和GMP認(rèn)證等關(guān)系企業(yè)生存的資格申報(bào)和認(rèn)證工作，并順利獲得相關(guān)證件，確保企業(yè)快速進(jìn)入正常營(yíng)運(yùn)軌道。這些重要項(xiàng)目申報(bào)工作的成功，充分展示了付廷靈先生腳踏實(shí)地的工作作風(fēng)，堅(jiān)韌不拔的工作意志，以及較為成熟的項(xiàng)目控制和營(yíng)運(yùn)能力。截止至2009年6月30日，公司已生產(chǎn)外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80萬(wàn)支，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，成品一次檢驗(yàn)合格率達(dá)100%，原液一次檢驗(yàn)合格率為99%，據(jù)正在進(jìn)行考察的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示產(chǎn)品穩(wěn)定性良好。該生產(chǎn)基地已經(jīng)建設(shè)完成，已經(jīng)通過(guò)消防、環(huán)保驗(yàn)收，并已經(jīng)通過(guò)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局GMP認(rèn)證。五、 管理團(tuán)隊(duì)水平1. 管理層水平項(xiàng)目承擔(dān)主體管理層均具有碩士以上學(xué)歷，具備生物醫(yī)藥專(zhuān)業(yè)及經(jīng)濟(jì)學(xué)背景，并在國(guó)內(nèi)大型醫(yī)藥制藥企業(yè)擔(dān)任管理工作，積累了豐富的醫(yī)藥企業(yè)管理經(jīng)驗(yàn)。企業(yè)經(jīng)營(yíng)活動(dòng)始終圍繞創(chuàng)新藥物研發(fā)這一主營(yíng)業(yè)務(wù)展開(kāi)，已獲得2項(xiàng)國(guó)家新藥臨床批件受理號(hào)，發(fā)明專(zhuān)利3項(xiàng)，近三年來(lái)未出現(xiàn)重大投資失誤與決策失誤。在科技項(xiàng)目管理方面，相關(guān)業(yè)務(wù)處室所提倡的是尊重、理解、激勵(lì)與耐心的服務(wù)意識(shí)，尊重科研人員的思想意識(shí)，注重管理人員和科研人員的相互間溝通，避免冷漠的、生硬的照搬條例。一般在中期檢查后，都會(huì)深入課題組，一項(xiàng)項(xiàng)了解各課題的進(jìn)展情況，及時(shí)了解課題組的困難，千方百計(jì)地幫助他們解決。同時(shí)，學(xué)校要求課題負(fù)責(zé)人不管是因主觀或客觀原因所致的研究進(jìn)展緩慢，都應(yīng)該與相關(guān)學(xué)院及學(xué)校的同志反映情況，并一起想辦法克服困難、保質(zhì)保量按時(shí)結(jié)項(xiàng)。3. 本項(xiàng)目組織方式及管理機(jī)制就本科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目而言，將實(shí)行產(chǎn)學(xué)研分工協(xié)作的方式，牽頭單位和各合作單位將為項(xiàng)目的研究提供場(chǎng)地、人員和經(jīng)費(fèi)的保障。項(xiàng)目實(shí)施組長(zhǎng)負(fù)責(zé)制，在課題組長(zhǎng)的統(tǒng)籌下，合作四方成立項(xiàng)目實(shí)施委員會(huì)以及經(jīng)費(fèi)使用和監(jiān)督管理委員會(huì)，各參與單位指定1名項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和1名專(zhuān)項(xiàng)財(cái)務(wù)負(fù)責(zé)人。六、 項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化前景我國(guó)醫(yī)藥工業(yè)實(shí)現(xiàn)了連續(xù)多年15％以上的高速增長(zhǎng)，其中又以生物制藥工業(yè)最為矚目，在技術(shù)進(jìn)步的拉動(dòng)下，生物制藥業(yè)增速達(dá)到30％以上。我國(guó)人口眾多，每年各種婦科病、口腔病、糖尿病等疾病引起的慢性潰瘍的患者以及燒傷、創(chuàng)傷病人多達(dá)8399萬(wàn)人以上。（1）婦產(chǎn)科市場(chǎng)：婦科門(mén)診中，宮頸糜爛的患者接近一半。潛在消費(fèi)者人數(shù)估計(jì)：13（億人）30%50%% =1025萬(wàn)人，（其中30%為消費(fèi)能力較高的城鎮(zhèn)居民，50%為女性比例，%為發(fā)病率）。它常常在年齡20～45歲的人群中發(fā)生，發(fā)病率高達(dá)18～22%，女性多于男性。（3） 糖尿病性難愈性潰瘍創(chuàng)面專(zhuān)科市場(chǎng)：2005～2009年的全國(guó)抽樣調(diào)查表明，％，近年來(lái)已經(jīng)上升到5%左右。這種潰瘍長(zhǎng)期不能愈合、或愈合后仍反復(fù)發(fā)作,嚴(yán)重影響人們的工作與生活。潛在消費(fèi)者人數(shù)估計(jì)：13（億人）8‰10% =104萬(wàn)人，（其中8‰為發(fā)病率中位數(shù)，10%為住院及其他治療方式下可能為難愈性創(chuàng)面患者的估計(jì)比率）。（6） 大外科市場(chǎng)：包括普外、胸外、泌外、血管外科、骨科、急診外科、手術(shù)室、換藥室等，該市場(chǎng)容量很大。由此可見(jiàn)，我國(guó)對(duì)創(chuàng)傷、創(chuàng)面潰瘍治療