微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(教案)-在線瀏覽
2025-06-03 23:19本頁(yè)面
【正文】 加 維生素 ，培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為 酸性 ，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將pH調(diào)節(jié)為 中性或微堿性 。1．5 無(wú)菌技術(shù)包括：（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品 相接觸。1．7 消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是 煮沸 消毒法；（2）對(duì)一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏 消毒法（作簡(jiǎn)要介紹）；（3）對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用 紫外線 進(jìn)行物理消毒。1．8滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用 灼燒 滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱 滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱 ；（3）培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用 高壓蒸汽 滅菌法，所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 ?！妓伎?〗對(duì)接種環(huán)滅菌時(shí)要用酒精燈的 充分燃燒 層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位?！妓伎?〗物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 有利于鍋內(nèi)溫度升高 ；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 100k Pa，溫度為 121℃ ，并維持 15～30 min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 零 時(shí)打開鍋蓋，其目的是防止 容器中的液體暴沸 。②營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。③pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。2．2 稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。2．3 溶化：①加水加熱熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化鈉繼續(xù)加熱；③加入瓊脂；④用蒸餾水定容到100mL。2．4 調(diào)pH：用1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至偏堿性。2．6 倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。④待平板冷卻凝固后，將平板倒過(guò)來(lái)放置。〖思考2〗倒平板的目的是防止培養(yǎng)基冷卻過(guò)程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面?？諝庵须s菌會(huì)在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基?！妓伎?〗試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。2．7．2平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。②在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。④將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種。⑥將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)伸入平板內(nèi)劃3～5條平行線，蓋上皿蓋，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。重復(fù)上述過(guò)程，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。⑧將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！妓伎?〗在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是獲得由單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。②用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號(hào)為101試管中，并吹打3次，使之混勻。依此類推。整個(gè)操作過(guò)程中使用了1支移液管。3．2 在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動(dòng)，但菌落數(shù)增多?！妓伎?0〗頻繁使用的菌種利用臨時(shí)保藏法保存，長(zhǎng)期保存菌種的方法是甘油管藏法。（三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基無(wú)菌技術(shù)純化大腸桿菌培養(yǎng)基的配制配制培養(yǎng)基的原則配制培養(yǎng)基的方法計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→加棉塞→滅菌→倒平板平板劃線法稀釋涂布法系列稀釋平板涂布（四）實(shí)例探究例1．關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是 解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。有的碳源只能是碳源，
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