植株生理生長指標的測定-在線瀏覽
2025-05-25 23:15本頁面
【正文】 催化植物體內(nèi)的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽（NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O）。生成的紅色偶氮化合物在540 nm有最大吸收峰，可用分光光度法測定。一般單位鮮重以μg氮/（g NR 的測定可分為活體法和離體法。Ⅰ離體法一、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料 水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。 ：Na2HPO42H2O 。 ％萘基乙烯胺溶液： mL無離子水中，貯于棕色瓶中。 mol/L ： Na2HPO43H2O溶于1000mL無離子水中。 2mg/mL NADH溶液：2mg mol/L （臨用前配制）。 二、實驗步驟 （一）標準曲線制作 取7支潔凈烘干的15mL刻度試管按表1順序加入試劑，配成0～ 的系列標準亞硝態(tài)氮溶液。以亞硝態(tài)氮（μg）為橫坐標（X），吸光度值為縱坐標（Y）建立回歸方程。酶的反應 mL試管中，混勻，在25℃水浴中保溫30min，對照不加NADH溶液。根據(jù)回歸方程計算出反應液中所產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量（μg）。Ⅱ活體法一、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）實驗材料 水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。 1％磺胺溶液：（25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/L HCl）。 mol/L KNO3溶液： mol/L 。（三）儀器設(shè)備 真空泵、真空干燥器、小燒杯、玻璃瓶塞、其他用具同離體法。反應：先向?qū)φ展苤屑尤?mL 30%三氯乙酸，然后各管中都加入9mL ，混勻后立即放入干燥器中，抽氣1min再通入空氣，再抽真空，反復幾次，以排除組織間隙的氣體，至葉片完全軟化沉入杯底，以便底物溶液進入組織。比色測定：將各管搖勻靜置2min后，各取2mL反應液，加入1mL磺胺和1mL萘基乙烯胺，搖勻顯色15min后，于4000r/min下離心5min，取上清液于540nm處測其吸光度。三、結(jié)果計算同離體法。根據(jù)朗伯比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和葉層厚度L成正比，即：A=αCL式中：α為比例常數(shù)，當溶液濃度以百分濃度為單位，葉層厚度為1cm時，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和。今欲測定葉綠素混合提取液中葉綠素a，葉綠素b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在3個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a，葉綠素b和類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。已知葉綠素a，葉綠素b的80%丙酮提取液在紅光區(qū)的最大吸收峰分別為663nm和645nm，已知在波長663nm下，葉綠素a，可根據(jù)加和性原則列出以下關(guān)系式：A663=+
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