【正文】 程度的變異。另外，在提高作物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、賴氨酸等）改變作物品質(zhì)方面也取得了一定進(jìn)展。第五章原生質(zhì)體：指采用機(jī)械或酶解法去掉細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞 由于沒(méi)有細(xì)胞壁，原生質(zhì)體為作物遺傳改良和植物學(xué)研究提供了極為有利的試驗(yàn)材料。 酶法可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量原生質(zhì)體216。 缺點(diǎn)是：不純的酶制劑所含雜質(zhì)對(duì)原生質(zhì)體可能有不同程度的毒害作用原生質(zhì)體融合的意義（應(yīng)用找不到）216。 原生質(zhì)體融合技術(shù)是實(shí)現(xiàn)基因重組的一條新途徑，目前利用細(xì)胞融合已從很多作物種、屬間，甚至科間獲得體細(xì)胞雜種，創(chuàng)造了一些自然界不存在的植物類型（1） 克服有性雜交不親和和生殖障礙216。原生質(zhì)體融合不涉及到雌雄性配子，從而可以克服生殖障礙216。 作物栽培品種常常缺乏某些抗性性狀，在栽培中處于不利地位216。 植物的細(xì)胞質(zhì)控制著很多優(yōu)良的性狀，如線粒體控制胞質(zhì)雄性不育，葉綠體控制的抗除草劑特性216。但原生質(zhì)體融合則可以達(dá)到此目的第六章? 單倍體在遺傳和育種中的應(yīng)用價(jià)值? 一、在植物育種中使后代迅速純合? 二、提高選擇效率? 三、排除雜種優(yōu)勢(shì)對(duì)后代選擇的干擾? 四、遺傳研究的良好實(shí)驗(yàn)材料體系 ? 五、突變體的篩選? 六、消除致死基因? 七、選育新型自交系 ? 八、遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料? 培養(yǎng)條件下小孢子的發(fā)育途徑? 1）營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑? 2）生殖細(xì)胞發(fā)育途徑? 3）營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑? 4）花粉均等分裂途徑? 小孢子培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在哪些方面? 小孢子培養(yǎng)在某些方面比花藥培養(yǎng)有一定優(yōu)勢(shì)? 花藥培養(yǎng)有時(shí)會(huì)由于花藥中的有害物質(zhì)而不能誘導(dǎo)小孢子啟動(dòng)第一次分裂，小孢子培養(yǎng)則不會(huì)? 花粉已是單倍體細(xì)胞，誘發(fā)都是單倍體植株或雙單倍體，不含有因藥壁、花絲、藥隔等體細(xì)胞組織的干擾而形成的體細(xì)胞植株? 獲得的材料總是純合的，不管它是二倍體還是三倍體? 由于花粉能均勻地接觸化學(xué)的和物理的誘變因素，花粉是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料? 可觀察到由單個(gè)細(xì)胞開(kāi)始雄核發(fā)育的全過(guò)程，是一個(gè)很好的遺傳與發(fā)育研究的材料體系? 小孢子培養(yǎng)的應(yīng)用第七章? II型限制性內(nèi)切酶的特點(diǎn)及剪切方式? 能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈? 識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的，是DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一? 識(shí)別的專一核苷酸順序最常見(jiàn)的是4個(gè)或6個(gè)核苷酸，少數(shù)也有識(shí)別5個(gè)核苷酸以及7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)和11個(gè)核苷酸的? 識(shí)別順序是一個(gè)回文對(duì)稱順序，即有一個(gè)中心對(duì)稱軸，從這個(gè)軸朝二個(gè)方向“讀”都完全相同? 限制性內(nèi)切酶的剪切方式? 平頭末端(blunt ends)： 在同一位置上切割雙鏈，產(chǎn)生平頭末端? 粘性末端(sticky ends)：交錯(cuò)切割，結(jié)果形成兩條單鏈末端，這種末端的核苷酸順序是互補(bǔ)的，可形成氫鍵? 主要DNA聚合酶的作用? 常用的DNA聚合酶：? 大腸桿菌DNA聚合酶、大腸桿菌DNA聚合酶Ｉ的Klenow大片斷酶 Taq DNA聚合酶、T7DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶（PCR反應(yīng)的專用酶）、RNA反轉(zhuǎn)錄酶? 末端轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸化酶? 大腸桿菌DNA聚合酶Ｉ? DNA聚合酶Ｉ的酶活性：? 1. 5’ 3’的聚合酶活性；? 2. 5’ 3’的外切酶活性；? 3. 3’ 5’的外切酶活性（較低）。如果反應(yīng)物中存在一種dNTP時(shí)，它的水解作用進(jìn)行到暴露出同反應(yīng)物中唯一的dNTP互補(bǔ)的核苷酸時(shí)就會(huì)停止? 在反應(yīng)過(guò)程中，通過(guò)T4 DNA聚合作用，反應(yīng)物中的dNTP逐漸地取代了被外切活性刪除掉的DNA片斷上原有的核苷酸，因此叫做取代合成? T7具有5’→3’的聚合酶活性和很高的單鏈及雙鏈的3’ →5’核酸外切酶活性? DNA聚合酶? Taq DNA聚合酶（PCR反應(yīng)的專用酶）? Taq DNA聚合酶是從極度嗜熱的嗜熱水生菌Thermus aquaticus中純化得到的一種耐熱的依賴于DNA的DNA聚合酶? Taq DNA聚合酶能夠在94℃高溫環(huán)境中存活3小時(shí)以上，具有DNA聚合酶活性和5’3’外切酶活性? Taq DNA聚合酶的最佳聚合溫度在72℃80℃之間，在60℃時(shí)它的聚合活性不到最佳活性的1/2，在復(fù)性的條件下Taq DNA聚合酶的活性極低? 因此利用Taq DNA聚合酶的這種反應(yīng)特點(diǎn)可以有效地進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)? Taq DNA聚合酶是以DNA的雙鏈為模板通過(guò)變性、復(fù)性和延伸3個(gè)不同的過(guò)程來(lái)達(dá)到目的片段指數(shù)式的增長(zhǎng)? 反轉(zhuǎn)錄酶? 一類以RNA為模板來(lái)指導(dǎo)DNA合成的DNA聚合酶，所以又稱為依賴于RNA的DNA聚合酶? 具有反轉(zhuǎn)錄酶活性和RNaseH活性? 主要作用是以mRNA為模板合成cDNA? 對(duì)5’突出末端的DNA片斷作末端標(biāo)記? 末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶（terminal transferase? 催化5’脫氧核苷三磷酸進(jìn)行5’－3’方向的聚合作用，逐個(gè)地將脫氧核苷酸分子加到線性DNA分子的3’OH末端? 不需要模板，可以用含有的3’OH DNA片段為引物，在3’OH端加入核苷酸達(dá)幾百個(gè)? 它作用的底物可以是具有3’OH末端的單鏈DNA,也可以是具有3’OH突出末端的雙鏈DNA? 堿性磷酸酶? 用于脫去DNA（RNA）5’末端的磷酸根，使5’P成為5’OH，該過(guò)程稱核酸分子的脫磷酸作用? 當(dāng)需要5’端同位素標(biāo)記或?yàn)榱吮苊釪NA片段自身連接（或環(huán)化）時(shí)可進(jìn)行脫磷酸反應(yīng)各種載體的種類、結(jié)構(gòu)、容量及特點(diǎn)質(zhì)粒（plasmid）載體? 質(zhì)粒是一種獨(dú)立于染色體外的小分子環(huán)狀DNA，可自身復(fù)制和表達(dá)，有的質(zhì)粒還帶有可做為選擇性標(biāo)記的抗藥性基因，經(jīng)過(guò)適當(dāng)改選后便可成為良好的載體? 克隆的質(zhì)粒載體：允許外源的DNA插入，儲(chǔ)存? 基因表達(dá)的質(zhì)粒載體：允許外源DNA的插入、儲(chǔ)存和表達(dá)（1）質(zhì)粒的生物學(xué)特性①質(zhì)粒DNA的構(gòu)型：SC型 共價(jià)閉合環(huán)形DNA（cccDNA） OC型 開(kāi)環(huán)DNA（ocDNA） L 型 線性DNA（cDNA）②不同質(zhì)粒的分子量大小差異相當(dāng)顯著：106～108D ③作為載體的質(zhì)粒都含有三種共同的組分： 復(fù)制基因、選擇性記號(hào)、多克隆位點(diǎn)④質(zhì)粒DNA編碼著一些重要的非染色體控制的遺傳性狀、抗性特征、代謝特征、修飾寄主生活方式的因子等⑤質(zhì)粒DNA的接合性 非接合型:不能整合到宿主的染色體上；不能通過(guò)“接合” 而轉(zhuǎn)移⑥質(zhì)粒DNA的復(fù)制類型：? 低拷貝的質(zhì)粒（1～3）：嚴(yán)緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒（接合型）? 高拷貝的質(zhì)粒（10~60）：松弛型復(fù)制控制的質(zhì)粒（非接合型） ⑦質(zhì)粒的不親合性? 在同一個(gè)大腸桿菌細(xì)胞，一般不能同時(shí)含有兩種不同的質(zhì)粒。 ? 基因組為長(zhǎng)度約為 50kb 的雙鏈 DNA 分子。? 進(jìn)入宿主細(xì)胞后，其兩端互補(bǔ)單鏈通過(guò)堿基配對(duì)形成環(huán)狀 DNA 分子，并隨宿主細(xì)胞復(fù)制。? λ噬菌體染色體上基因組成包括幾個(gè)不同的部分：? ①噬菌體頭部合成基因。? ②噬菌體的尾部合成基因。? ③與λ噬菌體的整合、重組等功能有關(guān)的基因，例如位于λ噬菌體中部的att, int, gam, red, six基因等。例如CIII，N，CI，cro和CII等位于λ噬菌體的右半部分。包括與λDNA合成有關(guān)的O，P，S，R基因等。這兩個(gè)位點(diǎn)可作為特定的切點(diǎn)以錨定插入ＤＮＡ的一端，便于限制性內(nèi)切酶分析。質(zhì)粒本身所帶的基因控制了質(zhì)粒的復(fù)制4．很少發(fā)生體內(nèi)重排 克隆載體具備的條件（課本216頁(yè)）（1） 克隆載體的DNA分子上通常含有1個(gè)或者多個(gè)克隆位點(diǎn)（多數(shù)情況下只具有一個(gè)多克隆位點(diǎn)）供外源的DNA片段插入到克隆載體上。（3） 載體必須具有可供選擇的標(biāo)記，如抗生素標(biāo)記?；蚩寺〉姆椒ǖ膽?yīng)用（我找不到，你們可以找找看）第八章一元載體、雙元載體：與Ti質(zhì)粒相同，其原理主要是Ri質(zhì)粒的Vir基因反式作用驅(qū)動(dòng)TDNA轉(zhuǎn)移。NptII基因編碼產(chǎn)物使選擇試劑磷酸化而失效。轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)的hpt基因產(chǎn)物通過(guò)磷酸化作用使潮霉素失去毒性。 Bar基因編碼的膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶，通過(guò)乙?；饔檬轨⒔z菌素失活。因而可以用熒光光譜法測(cè)定檢測(cè)容易、迅速且能定量，只需少量植物組織? 螢光素酶基因（Luc）來(lái)源最常用的是來(lái)自螢火蟲(chóng)的螢光素酶基因Vargulla的螢光素酶基因以及細(xì)菌螢光素酶基因luxA和luxB也已被用做報(bào)告基因檢測(cè)方法用去污劑處理細(xì)胞使之裂解，然后加入ATP、Mg2+和螢火蟲(chóng)的螢光素在有氧的條件下，螢光素酶就會(huì)催化螢光素進(jìn)行氧化反應(yīng)，產(chǎn)生AMP、CO2和黃綠色螢光? 氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT）基因? 綠色熒光蛋白（GFP）基因綠色熒光蛋白（Green Fluorescent Protein)來(lái)源于發(fā)光生物水母（Aequorea Vitoria）體內(nèi)的一種發(fā)光蛋白在水母體內(nèi)，水母蛋（aequorin）與Ca2+結(jié)合時(shí)會(huì)自發(fā)藍(lán)光，GF