【正文】 乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V－P（+）反應(yīng)。1176。1176。亦有主張?jiān)?8~50176。　　２）Barritt氏法：將試驗(yàn)菌接種于通用培養(yǎng)基，于36177。C培養(yǎng)4天、176。1176。　?。常┛焖俜ǎ?肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產(chǎn)酸反應(yīng)的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，乳化接種于其中，加入5%α萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動(dòng)后放置5min，判定結(jié)果。本試驗(yàn)一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。含碳化合物的利用細(xì)菌能否利用某些含碳化合物作為唯一碳源，反映該菌是否產(chǎn)生代謝這種化合物的有關(guān)酶系，因而作為鑒定依據(jù)?，F(xiàn)介紹1種合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有些細(xì)菌還可適當(dāng)補(bǔ)加各種維生素。可用于測(cè)定的底物種類很多，有單糖、雙糖、糖醇、脂肪酸、羥基酸及其他有機(jī)酸、醇、各種氨基酸類胺類以及碳?xì)浠衔锏取Ｒ蛱細(xì)浠衔锊蝗苡谒?，可在液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，或加入到45℃的固體培養(yǎng)基中，振蕩后立即倒成平板。接種和觀察結(jié)果：菌種最好做成懸液，避免帶入少量碳源干擾試驗(yàn)結(jié)果。每一測(cè)定菌必須接種未加碳水化合物的空白基礎(chǔ)培養(yǎng)基作對(duì)照。假若兩種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況差別不明顯，開在同一培養(yǎng)基上連續(xù)移種3次，如差別仍不明顯則以陰性論。細(xì)菌對(duì)糖類的利用有2種類型：1種是從糖類發(fā)酵產(chǎn)酸，不需要以分子氧作為最終受氫體，稱發(fā)酵型產(chǎn)酸；另一種則以分子氧作為最終受氫體，稱氧化型產(chǎn)酸。氧化型產(chǎn)酸量較少，所產(chǎn)生的酸常常被培養(yǎng)基中的蛋白胨分解時(shí)所產(chǎn)生的胺所中和，而不表現(xiàn)產(chǎn)酸。這一試驗(yàn)廣泛用于細(xì)菌鑒定。也可利用這一基礎(chǔ)培養(yǎng)基來(lái)測(cè)定細(xì)菌從其他糖類或醇類產(chǎn)酸的能力。另2管不封油為開管，同時(shí)還要有不接種的閉管作對(duì)照。（2）結(jié)果觀察：氧化型產(chǎn)酸――僅開管產(chǎn)酸，氧化作用弱的菌株往往先在上部產(chǎn)堿（1－2d），后來(lái)才稍變酸。糖或醇類發(fā)酵試驗(yàn)　　不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣?！　≡囼?yàn)方法：以無(wú)菌操作，用接種針或環(huán)移取純培養(yǎng)物少許，接種于發(fā)酵液體培養(yǎng)基管，若為半固體培養(yǎng)基，則用接種針作穿刺接種。176。本試驗(yàn)主要是檢查細(xì)菌對(duì)各種糖、醇和糖苷等的發(fā)酵能力，從而進(jìn)行各種細(xì)菌的鑒別，因而每次試驗(yàn)，常需同時(shí)接種多管。注：對(duì)于糖醇類發(fā)酵現(xiàn)在一般用糖、醇類細(xì)菌微量生化鑒定管在36℃18－24h即可出結(jié)果。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗(yàn)?！　∮忙凛涟愤M(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，陽(yáng)性紅色消退很快、故加入后應(yīng)立即判定結(jié)果。α萘胺具有致癌性、故使用時(shí)應(yīng)加注意。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來(lái)?！　≡囼?yàn)方法：將待試純培養(yǎng)物小量接種于試驗(yàn)培養(yǎng)基管，于36177?！　?shí)驗(yàn)證明靛基質(zhì)試劑可與17種不的靛基質(zhì)化合物作用而產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，若先用二甲苯或乙醚等進(jìn)行提取，再加試劑，則只有靛基質(zhì)或5甲基靛基質(zhì)在溶劑中呈現(xiàn)紅色，因而結(jié)果更為可靠。1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。此反應(yīng)在偏酸的條件下進(jìn)行。接種與觀察結(jié)果：用幼齡培養(yǎng)液作為菌種，直接接種。腸肝菌科的細(xì)菌于37℃培養(yǎng)4天觀察。對(duì)照管應(yīng)呈黃色反應(yīng)?！　≡囼?yàn)方法：在含有硫代硫酸鈉等指示劑的培養(yǎng)基中，沿管壁穿刺接種，于36177。陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至6天。1℃培養(yǎng)1~6天。1檸檬酸鹽或丙酸鹽的利用某些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽或丙酸鹽作為碳源，及磷酸胺作為氮源，將檸檬酸分解為二氧化碳，則培養(yǎng)基中由于有游離鈉離子存在而呈堿性。1利用丙二酸鹽試驗(yàn)丙二酸鹽是三羧酸循環(huán)中琥珀酸脫氫酶的抑制劑。許多微生物代謝有三羧酸循環(huán)，而琥珀酸脫氫是三羧酸循環(huán)的一個(gè)環(huán)節(jié)，丙二酸與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)琥珀酸脫氫酶，與丙二酸不被分解，所以琥珀酸脫氫酶被占據(jù)，不能釋放出來(lái)催化琥珀酸脫氫反應(yīng)，抑制了三羧酸循環(huán)。如測(cè)定培養(yǎng)基生長(zhǎng)并變藍(lán)色，表示可利用丙二酸鹽，為陽(yáng)性結(jié)果。1葡萄糖酸鹽的氧化假單胞菌屬和腸道桿菌科的細(xì)菌，可氧化葡萄糖酸為2－酮基葡萄糖酸。試驗(yàn)方法：％葡萄糖酸鹽（可用葡萄糖酸鈉或葡萄糖酸鈣）的溶液。刮取適溫培養(yǎng)18－24小時(shí)的菌苔至2mL的葡萄糖酸鹽溶液中制成濃的菌懸液，置30℃過(guò)夜，放在沸水浴中加熱10分鐘，試管中液體由藍(lán)色變?yōu)辄S綠，綠橙色或出現(xiàn)紅色沉淀者為陽(yáng)性反應(yīng)，如溶液不變色者為陰性。1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基未接種的下部，可作為對(duì)照。1β半乳糖苷酶（ONPG）的測(cè)定本試驗(yàn)應(yīng)用于腸肝菌科的鑒定。（3） ，測(cè)定管置于37℃水浴培養(yǎng)。1耐鹽性試驗(yàn)本試驗(yàn)是觀察滲透壓對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。一般可根據(jù)不同種類的菌株，選擇其適合生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，在其中加入不同量的NaCl，接種后觀察其生長(zhǎng)與否，以判斷其耐鹽性。培養(yǎng)基要求十分澄清，接種時(shí)應(yīng)采用幼齡菌液，直針接種，適溫培養(yǎng)3－7d，與未接種的對(duì)照管對(duì)比，目測(cè)生長(zhǎng)情況。接種與觀察結(jié)果：將測(cè)試菌的菌液，環(huán)接在有卵黃的試管和不加卵黃的對(duì)照管中，適溫培養(yǎng)3或5天觀察。另一種方法：以無(wú)菌操作取出卵黃，放入滅菌的三角瓶中，加相當(dāng)于等量的生理鹽水搖勻后，取10mL卵黃液加入到溶化的約50－55℃的200mL肉汁胨瓊脂培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入培養(yǎng)皿，制成卵黃平板，過(guò)夜后即可使用。每株菌至少重復(fù)點(diǎn)接兩皿。2石蕊牛奶的反應(yīng)牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。細(xì)菌對(duì)牛奶的作用有一下幾種：（1） 產(chǎn)酸――細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使石蕊變紅。（3） 胨化――細(xì)菌產(chǎn)生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶變得比較澄清。（5） 凝乳酶凝固――有些細(xì)菌能產(chǎn)生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此時(shí)石蕊常呈藍(lán)色或不變色。接種與觀察結(jié)果：接種待測(cè)菌株，適溫培養(yǎng)7d或14d，按上述特征觀察和記錄牛奶產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、凝固或胨化等反應(yīng)。待冷至45－50℃時(shí)，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。適溫培養(yǎng)5天，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透明。2酪氨酸水解將L－，8磅20分鐘滅菌，然后于100mL無(wú)菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂混合，傾倒平板，待凝固后，將測(cè)試菌接種于平皿上，培養(yǎng)7到14d，記錄酪氨酸結(jié)晶是否被水解而變透明。本試驗(yàn)用于腸肝菌科和某些芽孢桿菌屬的鑒定。取10％的FeCl3水溶液4－5滴，滴加在生長(zhǎng)菌苔的斜面上，當(dāng)斜面和試劑液面處呈藍(lán)綠色時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)，表示從苯丙氨酸形成苯丙酮酸。該反