【正文】 烷一3,4二醇類 決明子中黃酮類功效近幾十年來(lái)隨著生物學(xué)、生物化學(xué)、生理學(xué)的日新月異的發(fā)展，黃酮類化合物的生物活性的研究引起了國(guó)內(nèi)外的重視。到2001年底，已鑒定的生物類黃酮有6400種。能夠降低冠心病發(fā)病率和死亡率，日本、美國(guó)等國(guó)家的調(diào)查得出類似的結(jié)論。隨年齡增長(zhǎng)，體內(nèi)自由基增多。(2) 抗癌抗腫瘤作用許多黃酮類化合物具有抗腫瘤抗癌功能。(3) 心血管功能黃酮類化合物是臨床治療心血管的疾病的良藥，有強(qiáng)心、擴(kuò)張冠狀血管、增加冠脈血流量、抗心率失常、降壓、降低血膽固醇并使其與磷脂比例趨于正常、降低毛細(xì)血管滲透性等作用。(4) 抗心腦血管疾病黃酮類化臺(tái)物具有擴(kuò)張血管的作用，可以改善心肌平滑肌的收縮舒張功能，其作用機(jī)制與黃酮類化合物調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞膜外Ca2+內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放有關(guān)[[]馬路, 江夢(mèng)溪, 劉劍剛, 史大卓, 陳可冀, 苗明. 決明子和山楂組分配伍對(duì)兔肝細(xì)胞膜高密度脂蛋白受體活性的影響[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2009,15(1):2428.]。此外淫羊藿昔也具有擴(kuò)張血管的作用。(6) 抑菌抗病毒黃酮類化合物抗菌抗病毒作用已經(jīng)得到醫(yī)藥界的肯定。黃芩素(BAI)是黃芩中抗菌的有效成分。黃芩也具有抗真菌活性，對(duì)多種致病性真菌，如白色念珠菌，許蘭毛癬菌等有一定抑制作用。(7) 降血糖血脂作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明葛根黃酮、飛薊素等具有有降血脂和降低膽固醇的作用。麥胚黃酮卷柏黃酮可降低糖尿病大鼠血清過(guò)氧化脂含量，增強(qiáng)谷光甘肽過(guò)氧化酶的活力。此外枸杞黃酮等也有降血脂的作用。近年來(lái)上市的保健產(chǎn)品中，大部分功效成分都屬于黃酮類化合物。 決明子中黃酮類化合物提取方法黃酮提取的方法很多，主要是根據(jù)黃酮化合物的結(jié)構(gòu)與來(lái)源的不同，溶解性差異較大，因此，應(yīng)根據(jù)其極性和水溶性的大小選擇合適的溶劑進(jìn)行提取。決明子中黃酮類化合物為極性較大的甘元，所以主要用有機(jī)溶劑提取法、微波提取法等方法。(1) 水提法水提法僅限于黃酮苷類物質(zhì)，在提取的過(guò)程中要考慮加水量、浸泡時(shí)問(wèn)、攪拌速度、煎煮時(shí)間及煎煮次數(shù)等因素。現(xiàn)在，很少單一使用本方法。主要用堿性溶液是吸氫氧化鈉和石灰水(氫氧化鈣水溶液)。石灰水可以使～些鞣質(zhì)和水溶性雜質(zhì)沉淀生成鈣鹽沉淀，但浸出效果不如氫氧化鈉水溶液效果好，同時(shí)有些黃類化合物能與鈣結(jié)合成不溶性物質(zhì)，不被溶出。(3) 有機(jī)溶劑提取法這是國(guó)內(nèi)外使用最廣泛的方法。此方法主要用于提取脂溶性基團(tuán)占優(yōu)勢(shì)的黃酮類物質(zhì)，對(duì)設(shè)備要求簡(jiǎn)單，產(chǎn)品得率高，但成本較高，雜質(zhì)含量也較高。有機(jī)溶劑提取中最常使用的溶劑是乙醇，乙醇的濃度對(duì)總黃酮的提取有較大的影響。本方法經(jīng)常與液——液萃取法、吸附洗脫法相結(jié)合，能得到更高純度的精制物。此法對(duì)黃酮類物質(zhì)的提取也取得了不錯(cuò)的效果，具有反應(yīng)高效性和強(qiáng)選擇性等特點(diǎn)，操作簡(jiǎn)單、副產(chǎn)物少，產(chǎn)率高及產(chǎn)物易提純等優(yōu)點(diǎn)。(5) 酶解法對(duì)于一些黃酮類物質(zhì)被細(xì)胞壁包圍不易提取的原料使用酶解的法比較實(shí)用。(6) 超臨界萃取法超臨界C02萃取技術(shù)是以液態(tài)C02為溶劑進(jìn)行提取的，是一種不同于傳統(tǒng)黃酮類物質(zhì)提取的新工藝，它的提取率與提取溫度、提取壓力、C02消耗量等因素有關(guān)。同時(shí)，還可以通過(guò)控制臨界溫度和壓力達(dá)到選擇性提取和分離純化的目的。目前還難以進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)，但本法在生產(chǎn)銀杏黃酮的技術(shù)上取得了重大突破. 黃酮類化合物的常用分析側(cè)定方法(1) 比色法這是分析提取物總黃酮含量最普遍的方法。AlCl3顯色法 以蘆丁為標(biāo)樣，在測(cè)定液中加入AlCl3搖勻，室溫放置10min，按分光光度法，在200500nm范圍內(nèi)迸行掃描，尋找二者重疊最吸收波長(zhǎng)，測(cè)定。AlCl3顯色法原理是Al3+與3或5fE基與4羥基，或者B環(huán)的3’,4二鄰二酚羥基絡(luò)合顯色。 研究的目的與內(nèi)容本文的研究目的是應(yīng)用有機(jī)溶劑萃取方法，提取決明子中黃酮類化合物。本論文的研究包括以下內(nèi)容：(1) 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。(3) 不同提取劑對(duì)決明子中黃酮浸提效果的影響。(5) 提取溫度對(duì)決明子中黃酮浸提效果的影響。(7) 料液比對(duì)決明子中黃酮浸提效果的影響。 31 第2章 實(shí)驗(yàn)部分黃酮類化合物的溶解度與黃酮苷元的結(jié)構(gòu)及其配基的不同而有很大的差異，一般游離苷元難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑中。黃酮類化合物的羥基糖苷元化后，水溶解度較大，而在一些較低極性的有機(jī)溶劑中溶解度較低。糖鏈越長(zhǎng)，則水溶解度越大。表22 實(shí)驗(yàn)藥品名稱分子式純度生產(chǎn)廠家蘆丁標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)C27H30O16西安旭煌生物技術(shù)有限公司95%乙醇CH3CH2OH天津永晟精細(xì)化工有限公司無(wú)水甲醇CH3OH天津光復(fù)精細(xì)化工研究所丙酮CH3COCH天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司石油醚天津永晟精細(xì)化工有限公司亞硝酸鈉NaNO2天津永晟精細(xì)化工有限公司硝酸鋁Al2(NO3)3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 實(shí)驗(yàn)流程及裝置圖實(shí)驗(yàn)流程如圖21所示。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0mL、加入5%，搖勻，放置6min后加入10%Al(N03)，搖勻，放置6min后加入4%，再用30%乙醇定容，搖勻，以30%乙醇為空白參比，l0min后用lcm比色皿于510nm測(cè)定吸光度A，得到蘆丁標(biāo)樣含量Y(μg/mL)與吸光度A間的關(guān)系，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線[[]陳林. 比色法測(cè)定枸杞袋泡茶中總黃酮含量[J]. 山東醫(yī)藥工業(yè), 2003,(22)2:2021.]。用濾紙包住并用棉線捆好，置于索氏提取器中，用100mL甲醇體積濃度75％，80℃水浴加熱回流，當(dāng)索氏提取器中的溶液由黃色接近無(wú)色時(shí)，取出用濾紙包住的決明子粉末，蒸餾回收甲醇至近干，加水約80mL溶解，加入20mL石油醚脫色2次，棄去醚層。取待測(cè)液10mL于50mL容量瓶中，用30％乙醇定容，以下按照測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液吸光度的方法測(cè)定吸光度A。從決明子中提取的黃酮含量可按下列公式計(jì)算：M(%)=[Y(100/10)(50/2)10106100]/w式中：100/10 和50/2—稀釋倍數(shù)；w—決明子重(g)。3. 決明子中總黃酮的提取及測(cè)定，按照設(shè)計(jì)的配方加入一定量的提取劑，在一定溫度下回流提取一定時(shí)間，趁熱減壓抽濾，濾渣加適量水洗滌、過(guò)濾．合并清液后得提取液，再蒸餾，回收溶劑至近干，再按照2中的步驟配置待測(cè)液，以下按照測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液吸光度的方法測(cè)定吸光度A，計(jì)算黃酮提取率[[]王小華, 鄧斌, 張曉軍, 王存嫦. 決明子黃酮類化合物的提取工藝研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2008, 24: 711.[20]Hongbin Zhu, Yuzhi Wang, Yuxuan Liu, Yalin Xia, Tian Tang. Analysis of Flavonoids in Portulaca oleracea L. by UV–Vis Spectrophotometry with Comparative Study on Different Extraction Technologies. Food Anal. Methods, 200,3:90–97]。5. 影響提取效果的因素(1) 乙醇濃度對(duì)浸提效果的影響分別采用65%、75%、80%、85%、95%的乙醇濃度按3的操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)，在80℃下，料液比為1:20，提取決明子中黃酮類化合物的試驗(yàn)，得出乙醇濃度對(duì)提取效果的影響。(3) 料液比對(duì)浸提效果的影響分別采用1:1:1:21:1:35(g:mL)的料液比例按3的操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)，以濃度為75%的乙醇為提取劑，提取溫度為80℃時(shí)，提取決明子中黃酮類化合物的試驗(yàn)，得出料液比對(duì)提取效果的影響。單因素實(shí)驗(yàn)條件見表23所示。表24 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表水平因素乙醇體積分?jǐn)?shù)(A) %溫度(B) ℃料液比(C) g:mL浸提時(shí)間(D h165701:20275801:25385901:30表25 L9(34)正交表ABCD111112122231333421235223162312731328321393321 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中主要事項(xiàng)(1) 決明子粉碎粒度要均勻，使用前要經(jīng)過(guò)一定的干燥處理。(3) 蒸餾回收乙醇過(guò)程中，溫度上升到90℃左右是，停止加熱，防止過(guò)熱使黃酮分解。(5) 配置黃酮標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)，加入顯色劑后，需靜止一段時(shí)間，再加下一種藥品?？梢姺止夤舛扔?jì)的波長(zhǎng)選取510nm。(++)/3=，由圖31的。M(%)=[102510106100]/3=%。選取溶劑的要求是:(1) 溶劑對(duì)所需成分的溶解度要大，對(duì)雜質(zhì)的溶解度要小，或反之。(3) 溶劑要經(jīng)濟(jì)易得，并具有一定的安全性．(4) 沸點(diǎn)應(yīng)適中，便于回收反復(fù)使用。圖32 提取劑的影響提取劑種類吸光度A提取率(%)黃酮濃度(μg/mL)沸水堿性水溶液（PH=9）1375%乙醇75%甲醇75%丙酮提取溶劑種類對(duì)黃酮的提取率的影響效果見圖32圖32 提取劑種類的影響從圖21以看出，在提取時(shí)間，提取料液比和一定的情況下，以水為提取劑的提取效果最差。以甲醇、乙醇和丙酮作為提取劑時(shí)效果較好，三種提取劑提取效率相差不大，綜合考慮沸點(diǎn)、分子極性、化學(xué)性質(zhì)、毒性、成本等因素選擇提取劑?？紤]到提取效果、提取溶劑成本以及殘留等因素，以乙醇提取劑為最佳。圖33 提取劑濃度的影響乙醇體積濃度(%)吸光度A提取率(%)黃酮濃度(μg/mL)6575808595提取溶劑濃度對(duì)黃酮的提取率的影響效果見圖33圖33 提取劑濃度的影響由圖33從65％到75％隨著提取時(shí)乙醇濃度的增加，黃酮的提取率明顯增加，乙醇濃度為80％時(shí)，黃酮提提取率與75%變化不大，當(dāng)濃度升到85％時(shí)黃酮提提取率隨著乙醇濃度的繼續(xù)增加，黃酮提取率下降。因此，確定乙醇的體積濃度以75％為好因此，以濃度為75％的乙醇作為提取劑時(shí)，決明子中黃酮類化合物的提取率達(dá)到最高。但溫度達(dá)到90℃，提取率略有下降?；蛘呤窃诖藴囟认?，黃酮發(fā)生氧化分解。 圖35 提取時(shí)間的影響提取時(shí)間(h)吸光度A提取率(%)黃酮濃度(μg/mL).提取時(shí)間對(duì)黃酮的提取率的影響效果見圖33圖35提取時(shí)間的影響根據(jù)圖35可知。 料液比的影響實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用1:1:1:21:1:35(g:mL)，5種不同的料液比，提取條件為75%的乙醇為提取劑，提取溫度為80℃，結(jié)果見表36圖36 料液比的影響料液比(g:mL)吸光度A提取率(%)黃酮濃度(μg/mL)1:10.1:201:251:30（續(xù)表）料液比(g:mL)吸光度A提取率(%)黃酮濃度(μg/mL)1:35圖36 料液比的影響根據(jù)圖36可知，黃酮提取率隨提取劑量的增大而增大，這是因?yàn)橐掖加昧吭酱螅扇芙獾狞S酮也就越大，但當(dāng)固液比達(dá)到1:20后，提取率增大的趨勢(shì)不是很明顯，因此，考慮到采用較大的固液比時(shí)，不僅增加了乙醇的用量，還增大了后續(xù)工序的難度，最終導(dǎo)致生產(chǎn)成本的增加，故選用l:20的固液比作為最優(yōu)值。表37 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果乙醇濃度/%提取溫度/℃料液比/g:ml提取時(shí)間/h實(shí)驗(yàn)結(jié)果/%實(shí)驗(yàn)11111實(shí)驗(yàn)21222實(shí)驗(yàn)31333（續(xù)表）乙醇濃度/%提取溫度/℃料液比/g:ml提取時(shí)間/h實(shí)驗(yàn)結(jié)果/%實(shí)驗(yàn)42123實(shí)驗(yàn)52231實(shí)驗(yàn)62312實(shí)驗(yàn)73132實(shí)驗(yàn)83213實(shí)驗(yàn)93321均值1均值2均值3