【正文】 酮類化合物溶解性（極性）規(guī)律 : 花色素 類雖系 平面型分子， 但因以離子形 式存在，具有 鹽的通性，故 親水性較強(qiáng)，水溶度較大。 酸性規(guī)律 a、 7， 4‘ OH酸性強(qiáng)于其他位置羥基的酸性（處于羰基對位，羰基的共軛誘導(dǎo)）。 c、酚羥基數(shù)目越多，酸性越強(qiáng)。 可與強(qiáng)無機(jī)酸如濃硫酸，鹽酸生成 洋 鹽，但極不穩(wěn)定，加水即可分解。 ?黃酮、黃酮醇 —— 黃 ~橙色，并有熒光 ?二氫黃酮 —— 橙紅（冷）、紫紅（熱） ?查耳酮 —— 橙紅 ~洋紅 ?異黃酮（二氫） —— 黃色 ?橙酮 —— 紅 ~洋紅 H 2 OH C lC lOO HOO 四、顯色反應(yīng) (一 )還原反應(yīng) 1. 鹽酸 鎂粉（鹽酸 鋅粉）反應(yīng) —— 鑒定 黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇 —— （＋） 橙紅 紫紅色 B環(huán)有 OH或 OCH3取代時(shí)，顏色隨之加深 查耳酮、橙酮、兒茶素 —— （－） 但遇濃 HCL色變，需做空白對照 異黃酮 —— 個(gè)別陽性，大多陰性 2. 四氫硼鈉（鉀）反應(yīng) —— 專屬鑒別 二氫黃酮類 —— （＋ )紅 紫色 其 它 —— （－） 取樣品 10mg溶于甲醇，加 NaBH4 10mg，再滴加 1%濃鹽酸或濃硫酸，呈紅 紫色。 1. 鋁鹽 常用試劑： 1%AlCl3或 Al(NO3)3 生成絡(luò)合物為 黃色 (?max=415nm)，并有熒光。 醋酸鉛可沉淀具有鄰二酚羥基或兼有 3OH, 4=O或 5OH, 4=O者。 3. 鋯鹽 : 常用試劑： 2%二氯氧化鋯甲醇液 觀 察 顏 色2 % 枸 櫞 酸 甲 醇 液黃 色1 m l 2 % Z r O C l 21 0 m l 甲 醇 溶樣 品 0 . 5 1 m g黃 色 不 褪黃 色 褪 去2 % 枸 櫞 酸黃 色 鋯 絡(luò) 合 物 鋯 鹽3 O H , 4 = O5 O H , 4 = O絡(luò)合物穩(wěn)定性次序： 3OH,4酮基絡(luò)合物 5OH,4酮基絡(luò)合物 4. 鎂鹽 醋酸鎂 甲醇液作顯色劑，可在紙上進(jìn)行，加熱，紫外檢視： 二氫黃酮（醇） 類 —— 天藍(lán)色熒光 若具有 C5OH，色澤更明顯。 5. 氯化鍶 (SrCl2) 具有 鄰二酚羥基 的黃酮 —— 綠 棕色 黑色沉淀。 在 枸櫞酸丙酮 存在條件下，只 顯黃色而無熒光 。 1. 二氫黃酮類 易在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)異構(gòu)體 (查耳酮類化合物 )， 顯橙 紅色 。 3. 黃酮類 當(dāng)分子中有 鄰二酚羥基 取代或 3,4’ 二羥基取代時(shí)，在堿液中不安定，很快氧化， 由黃色 ?深紅色 ?綠棕色沉淀 。 （六） Gibbs反應(yīng) —— 5OH對位未被取代的黃酮 。 Gibbs試劑 : 甲液： %2,6二氯苯醌 4氯亞胺的乙醇溶液。 多用 CHCl Et2O、 EtOAc等極性較小有機(jī)溶劑提取 對于多 OCH3化的成分，用苯、石油醚提??； 對于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、雙黃酮、羥基黃酮等，用 EtOAc、 EtOH、 Me2CO、 MeOH等溶劑提取。 3. 含酚羥基的苷或苷元 ， 可用堿水或堿性醇提取 。 注意事項(xiàng)： ①酸堿度不宜過大 ?避免在強(qiáng)堿性、加熱條件下，破壞黃酮母核； ?酸化時(shí)酸性也不易過強(qiáng)，以免生成佯鹽使析出黃酮又溶解了 ②鄰二酚羥基的保護(hù) ?堿性條件下，鄰二酚羥基易被氧化，加硼砂保護(hù) ③加石灰乳可除去果膠、粘液等水溶性酸性雜質(zhì) （可使含羥基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀 ） 3． 炭粉吸附法 適用于苷類的精制工作。 依次用沸甲醇、沸水、 7%酚 /水、 15%酚 /醇洗脫，分步收集、檢查、合并。 吸附原理 異黃酮、二氫黃酮（醇） 氯仿 甲醇不同比例 （ 105℃ ， 高度甲基化或乙?；S酮（醇） 混合溶劑洗脫 活化） （極性?。? （加水失活或不活化） （極性大） （ 80:20:1）等比例 1．硅膠柱色譜 2．氧化鋁柱色譜（少） 具有 3OH或 5OH 、 4羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物與鋁離子絡(luò)和而被牢固吸附，難于洗脫。 —— 制備分離 洗脫劑：常用水 乙醇 水可洗下非黃酮的水溶性成分及少數(shù)黃酮 苷； 10%30%醇可洗下黃酮苷； 5095%乙醇可 洗下黃酮苷元 各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由 弱至強(qiáng) 依次為： 水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液 吸附規(guī)律： （ 1）酚羥基數(shù)目越多，吸附能力越強(qiáng)。 3OH或 5OH黃酮的吸附力小于其他位置 OH黃酮； 鄰二酚羥基黃酮的吸附力弱于間位或?qū)ξ环恿u基黃酮 （ 3）分子內(nèi)芳香化程度越高，共軛雙鍵越多，吸附力越強(qiáng)。 不符合氫鍵吸附規(guī)律 符合氫鍵吸附規(guī)律 主要用兩種型號的凝膠 SephadexG型（適用于水溶性成分分離） SephadexLH20型（可用于親脂性成分分離） 原理： 游離黃酮 —— 吸附 作用 洗脫順序：極性小 ?大 。 總的洗脫順序： 糖多的苷 ?糖少的苷 ?游離苷元（極性小 ?大） 常用洗脫劑： ①堿水 （ ） ，鹽水（ ） ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿 （二） pH梯度萃取法 —— 利用酸性強(qiáng)弱 適合于 酸性強(qiáng)弱不同 的黃酮苷元的分離。 （ 2）硼酸絡(luò)合法 根據(jù)具有 鄰二酚 羥基的黃酮與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水的性質(zhì)與其它類型黃酮分離。 第四節(jié) 黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定 目前主要采用的方法有： ①色譜方法 與標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)對照 PPC或 TLC得到的 Rf ②化學(xué)鑒別反應(yīng) 顯色、鉛鹽沉淀 ③光譜方法 UV光譜：分析對比樣品在甲醇溶液中及加入酸、堿或金屬鹽類試劑后 UV光譜的變化 1HNMR、 13CNMR、 MS 一、色譜法在黃酮類鑒定中的作用 (PPC) 原理：分配原理 適用范圍：黃酮苷元及苷的分離鑒別 苷元則多采用醇性溶劑展開， 苷類成分可采用雙相展開， 第一相展開：醇性溶劑，如 BAW系統(tǒng)（正丁醇： 醋酸：水 4： 1： 5） — 分配原理 第二相展開：水性溶劑，如醋酸水 — 吸附原理 雙相色譜 第 I向 醇性展開劑 第 II向 水性展開劑 （ BAW、 TBA、水飽和正丁醇） （ 2~6%HAc、 3%NaCl、 1%HCl） 正相色譜 反相色譜 固定相（水）極性 流動相 Rf規(guī)律：極性小的化合物 Rf大 極性大的化合物 Rf大 苷元（ ） 單糖苷 雙糖苷（ ） 苷元中，平面型分子 非平面型分子 Rf規(guī)律與左邊相反 母核相同，一 OH二 OH三 OH四 OH五 OH黃酮 苷元的分離鑒別 黃酮苷及花色素類 2. 薄層層析 (TLC) １）硅膠薄層 用于弱極性黃酮。 各種色譜的檢識： 日光下觀察 — 多數(shù)黃酮有黃色斑點(diǎn) 紫外光下觀察 — 多數(shù)黃酮呈黃綠色熒光斑點(diǎn) 氨蒸氣熏 — 多數(shù)黃酮有顏色變化 噴顯色劑（ 2%AlCl3甲醇液） — 多數(shù)黃酮黃色變 深，熒光加強(qiáng) 二、紫外光譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用 可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。 （一）在甲醇溶液中的紫外光譜 多數(shù)黃酮類化合物由兩個(gè)主要吸收帶組成： 帶 Ⅰ （ 300400nm） —— 由 B環(huán)桂皮?；到y(tǒng)引起，主要反應(yīng) B環(huán)取代情況； 帶 Ⅱ （ 220280 nm） —— 由 A環(huán)苯甲?；到y(tǒng)引起，主要反應(yīng) A環(huán)取代情況 ABOOOOR－OOR－峰 帶 Ⅱ , 2 2 0 ~ 2 8 0 n m 峰 帶 Ⅰ , 3 0 0 ~ 4 0 0 n mB 環(huán) 桂 皮 酰 系 統(tǒng)A 環(huán) 苯 甲 酰 系 統(tǒng) （ 1）黃酮、黃酮醇： 在 200400 nm之間出現(xiàn)兩個(gè)主要吸收峰，二者峰形相似， 但帶 Ⅰ 位置不同 ，可據(jù)此進(jìn)行分類。 帶 Ⅱ 的峰位主要受 A環(huán)氧取代程度的影響，但 B環(huán)的取代基可影響它的形狀。 （ 2）查耳酮及橙酮類： 共同特征 是帶 Ⅰ 強(qiáng)，為主峰；帶 Ⅱ 較弱，為次強(qiáng)峰。 （ 3）異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇 有由 A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)引起的帶 Ⅱ 吸收 但因 B環(huán)不與吡喃酮環(huán)上的羰基共軛（或共軛很弱），故帶 Ⅰ 很弱。 2） NaOAc為弱堿，僅使酸性較強(qiáng)者，如 7,4’ OH解離。 形成絡(luò)合物越穩(wěn)定，紅移越多。 1) 黃酮（醇）及異黃酮： H6(～ , d, J=)； H8(～ , d, J=) 7O糖苷： H6(～ , d, J=)； H8(～ , d, J=) 2) 二氫黃酮及二氫黃酮醇： H6(～ , d, J=)； H8(～ , d, J=) 7O糖苷： H6(～ , d, J=)； H8(～ , d, J=) H 6 , H 8 , ? 5 . 7 6 . 9 , J = 2 . 5 H zH 6 較 H 8 高 場 86OOH OO H 2． 7OH黃酮 H 5 ? 7 . 7 8 . 2 ( d , J = 9 H z )H 6 ? ? 6 . 4 7 . 1 ? ( d d , J = 9 , 2 . 5 H z ) H 8 ? 6 . 8 7 . 0 ( d , J = 2 .