生物化學(xué)-dna復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯-在線瀏覽
2025-03-05 12:13本頁面
【正文】 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 前導(dǎo)鏈 隨從鏈 崗崎片段 半不連續(xù) 復(fù)制 ?體內(nèi)僅存在 5’ →3 ’的 DNA聚合酶； ?新鏈延伸的方向只能是 5’→3 ’ 。 （復(fù)制方向與解鏈方向一致） 隨從鏈 (滯后鏈 ): 以 5’→ 3’方向的母鏈作為模板，沿 5’→ 3’方向合成一些 1000— 2022個核苷酸不連續(xù)的小片段，由小片段連接成隨從鏈。 半不連續(xù)復(fù)制 ： 領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制而隨從鏈不連續(xù)復(fù)制 。 DNA聚合酶 Ⅰ 用于 切除 RNA引物， 損傷后修復(fù)。 3’ 5’ 5’ 3’ 外切酶 聚合酶 N C 5’ 3’外切酶 小片段 大片段（ klenow片段） （ 常用的工具酶） DNA聚合酶 Ⅰ DNA聚合酶的校對作用 ? 依賴于 3個聚合酶的 3’ 末端外切酶活性，進(jìn)行校對和糾錯。 真核細(xì)胞的 DNA聚合酶 DNA－ pol α ， β ， γ ， δ ， ε DNA－ po1δ： 延長領(lǐng)頭鏈和隨從鏈； DNA—poIα： 合成 RNA引物； DNA－ polε： 校讀、修復(fù)和填補缺口。 DNA—po1γ： 催化線粒體 DNA的合成。 ? 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅰ 轉(zhuǎn)軸酶 ? 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 旋轉(zhuǎn)酶 ? 切斷 DNA雙螺旋中的 一股 ，張力下降后封閉。 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 改變 DNA分子構(gòu)象，理順 DNA鏈，使復(fù)制能順利進(jìn)行。 DNA連接酶 ? 催化二段 DNA鏈之間 3’,5’ 磷酸二酯鍵的形成 3’ OH 5’ 5’ 3’ O O P O O 有缺口的 DNA鏈 DNA連接酶 ATP AMP+PPi O O P O O 5’ 3’ 缺口封閉 ? 缺口填補 : ? 連接雙股 DNA分子中一鏈的缺口 ? 雙鏈 DNA分子中雙鏈的缺口 ? 不能 連接二分子單鏈 DNA DNA連接酶 的應(yīng)用 : . . : 限制性內(nèi)切酶切割后形成的粘性末端或平頭末端的連接 . 三、 原核 細(xì)胞 DNA的復(fù)制 合成所需材料： ①模板 DNA ② 原料：合成引物所需 NTP 合成 DNA所需的 dNTP ③ 酶： 合成方向： 5’→3’ ； 模板鏈解讀方向： 3’ → 5’ 合成步驟： (1)解旋 ：由拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 解除超螺旋； (2)解鏈 ：由 DNA解螺旋酶催化， SSB與單鏈 DNA結(jié)合，防止雙鏈間氫鍵再形成； (3)識別起點 ：由 DNA指導(dǎo)的引物酶完成； (4)RNA引物合成 ：以 DNA為模板，在引物酶催化下由DNA轉(zhuǎn)錄生成 510個核糖核苷酸鏈； (5)DNA鏈延長 ：在引物 3’OH基上，按堿基互補原則經(jīng) DNA聚合酶（主要是酶 Ⅲ ）催化 DNA鏈從 5’→3 ’延伸。 (6)切除引物，補齊缺口 ：由 DNA聚合酶（主要是酶Ⅰ ）催化，切去 RNA引物；按堿基互補原則，沿5’→3 ’方向，補齊缺口。 (8)校正并修復(fù) DNA：由 DNA聚合酶校正并切除錯配，再按 5’→3 ’方向加上正確核苷酸。 真核生物與原核類似，但更復(fù)雜，不同之處： 復(fù)制子 ? 端粒的復(fù)制： 端粒： 線形染色體末端的核苷酸序列。留下的空隙如沒法填補，細(xì)胞染色體DNA將面臨復(fù)制一次就縮短一些的問題。因為真核生物染色體線性 DNA分子末端存在著特殊的結(jié)構(gòu)稱為 端粒 。 功能： 1）起模板作用； 2）有逆轉(zhuǎn)錄酶的作用。 ? 是不依賴模板 DNA的復(fù)制來補償切除引物引起的末端縮短。 正常：體細(xì)胞端粒酶活性喪失，端粒的長度不斷縮短。 ?轉(zhuǎn)錄的 產(chǎn)物 ： 第二節(jié) RNA的生物合成 — 轉(zhuǎn)錄 轉(zhuǎn)錄： DNA指導(dǎo)下的 RNA合成。 一、轉(zhuǎn)錄與 DNA復(fù)制的相似之處： 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別 A U ， T A ， G CA T ， G C配對mR N A ， tR N A ， r R NA子代雙鏈 DN A（ 半保留復(fù)制）產(chǎn)物RN A 聚合酶（ RN A pol ）DN A 聚合酶酶NTPdNTP原料模板鏈轉(zhuǎn)錄（不對稱轉(zhuǎn)錄）兩股鏈均復(fù)制模板轉(zhuǎn)錄復(fù)制， ， ，（）酶二、轉(zhuǎn)錄的 模板 ： ? 模板鏈 ： DNA雙鏈中只一條鏈可做轉(zhuǎn)錄模板，又稱為“ Watson鏈 ”。 ? 二者可在同一條鏈上。 5′3′ 3′5′ 5′3′ NAla His 三、 RNA聚合酶 不需引物 ,在單核苷酸的 3’ OH上逐個加核苷酸。 5?3? 3?5? 結(jié)構(gòu)基因 調(diào)控序列 RNApol 起始 ? 啟動子 ： 與 RNA聚合酶結(jié)合啟動基因轉(zhuǎn)錄的 DNA序列，為 轉(zhuǎn)錄開始的位點 (上游的 35序列和 10序列 )。 B、核心酶沿模板移動，選擇 NTP，暫時形成 DNARNA雜交鏈。端 模板鏈 合成方向 基因 539。 DNA互補鏈取代雜交鏈中的 RNA，恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)。 釋放 RN
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