核酸類藥物ppt課件-在線瀏覽
2025-02-22 12:06本頁(yè)面
【正文】 （ 二 ） DNA的提取與制備 1． 工業(yè)用 DNA的提取 取新鮮冷凍魚精 20kg， 用絞肉機(jī)粉碎 2次成漿狀 ，加入等體積水 ， 攪拌均勻 ， 傾入反應(yīng)鍋內(nèi) ， 緩慢攪拌 ，升溫至 100℃ ， 保溫 15分鐘 ， 迅速冷卻至 20～ 25℃ ，離心除去魚精蛋白等沉淀物 ， 獲得 35L含熱變性 DNA的溶液 ， 經(jīng)精確測(cè)定 DNA含量后直接可用于 酶法降解生產(chǎn)脫氧核苷酸 。 具有生物活性 DNA的制備 動(dòng)物內(nèi)臟 （ 肝 、 脾 、 胸腺 ） 加 4倍重量生理鹽水經(jīng) 組織搗碎機(jī) 搗碎 1分鐘 ， 勻漿于 2500r／ pm離心 30分鐘 ， 沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌 3次 ， 每次洗后離心 ， 將沉淀懸浮于 20倍重量的冷生理鹽水中 ， 再搗碎 3分鐘 ， 加入 2倍量 5％ 的 （ 用 45%乙醇作溶劑 ） 十二烷基磺酸鈉 ， 并攪拌 2～ 3小時(shí) ， 在 0℃ 2500r／ pm離心 ， 在上層液中加入等體積的 冷 95％ 乙醇 ， 離心即可得到纖維狀 DNA， 再用冷乙醇和丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得粗品 DNA。 二 、 用酶解法 、 發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸 （ 一 ） 酶解法及堿水解法制備核苷酸 酶解法制備脫氧核苷酸 桔青霉 產(chǎn)生 5`磷酸二脂酶 紅酵母 產(chǎn)生 3`磷酸二脂酶 酶解法制備戊糖核苷酸 我國(guó)從 60年代開始使用 核酸酶 P1降解核糖核酸生產(chǎn)單核苷酸 ， 日本年產(chǎn) 呈味核苷酸 （ 肌苷酸和鳥苷酸 ）3000噸 ， 其中 60%是使用酶解法生產(chǎn)的 。雙酶法生產(chǎn)（ I十 G）工藝 。 在國(guó)內(nèi)用谷氨酸產(chǎn)生菌體自溶法生產(chǎn) 5‘核苷酸 。取 RNA配成 3％ ～ %的水溶液 ， 加氫氧化鈉達(dá)／ L濃度 ， 升溫至 38℃ ， 保溫 16～ 20小時(shí) ， 用6mol／ L鹽酸中和至 ， 從 RNA水解成 2′， 3＇ 核苷酸的降解率達(dá) 95％ 以上 ， 將 2′， 3＇ 混合核苷酸制成每片含 50～ 100mg的片劑 ， 經(jīng)臨床使用 ， 對(duì)非特異性血小板減少癥 、 對(duì)白血球減少癥 、 癌腫的化療和放療后的升白血球均有較好療效 。 例一：肌苷 2mmol／ L懸浮于 5ml磷酸三乙酯中 ， 溫度控制 0℃ ， 添加氯化氧磷 6mmol／ L， 水 2mmol／ L，反應(yīng) 2h， 5＇ IMP摩爾產(chǎn)率達(dá) 91％ 。 三 、 核苷的制備 本節(jié)敘述核苷的 化學(xué)法 和 發(fā)酵法 生產(chǎn) 。8） （ 二 ） 發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 發(fā)酵法生產(chǎn) 核苷 是近代發(fā)酵工程領(lǐng)域中的杰出成果 ，產(chǎn)率高 ， 周期短 ， 控制容易 ， 產(chǎn)量大 。 1． 發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷 (枯草桿菌 ) 發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷 (肌苷產(chǎn)生菌 ) 發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷 (產(chǎn)氨短桿菌 ) 第二節(jié) 核酸類藥物 核酸類藥物 可分 兩大類 。 缺乏這類物質(zhì)會(huì)使生物體代謝造成障礙 ，發(fā)生病態(tài) 。 第二類為自然結(jié)構(gòu)堿基 、 核苷 、 核苷酸結(jié)構(gòu)的類似物或聚合物 ， 這一類核酸類藥物是當(dāng)今人類治療病毒 、 腫瘤 、 艾滋病的重要手段 ， 也是 產(chǎn)生干擾素 、免疫抑制 的臨床藥物 。 大大提高收率 ， 降低成本 。 AZT的藥理作用是人體內(nèi)經(jīng) 磷酸化 后生成了 3`疊氮 2′脫氧胸腺嘧啶核苷酸，后者 取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸參與病毒 DNA的合成，含有 AZT成份的 DNA不能繼續(xù)復(fù)制，從而達(dá)到阻止病毒增殖的目的 。 已見報(bào)道的胸苷合成方法還有兩條途徑： ① 從 2′脫氧胞苷或 2′脫氧鳥苷或 2＇ 脫氧腺苷
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