【正文】 判斷 B異構(gòu)體 供試液譜圖中 A異構(gòu)體的峰面積 A異構(gòu)體 與 A、 B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng) 為 ~。 （鉀）的吸收度檢查： 供試液 ， 結(jié)果判斷： A280不得大于 三、 含量測定 HPLC、 碘量法 、 汞量法 、 酸堿滴定法 、 可見紫外分光光度法等 ?? ??? ????? ?? ? IIN a O H頭孢菌素族青霉素族 （水解） ?H碘量法 （一） 1. 原理 水解產(chǎn)物 ??????? ?? OSNaNa IOSNaI ＋＋定量過量 剩余 β內(nèi)酰胺類 反應(yīng)分兩步進(jìn)行： 1. 水解反應(yīng) (按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行 ) 2. 氧化 還原反應(yīng) (無固定的 量 關(guān)系 ， 受溫度 、 PH值和時(shí)間等因素影響 ， 應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測定 ) 例 注射用普魯卡因青霉素 含量測定 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，精密稱 取約 ，置 100ml量瓶中，加水使溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml， 置碘瓶中， 加 1mol/L氫氧化鈉溶液 1ml 放置 20分鐘，再加 1mol/L鹽酸溶液 1ml 與醋酸 醋酸鈉緩沖液 ()5ml，精密 加入碘滴定液 ()15ml，密塞， 搖勻，在 20～ 25℃ 暗處放置 20分鐘，用 硫代硫酸鈉滴定液（ ）滴定， 至近終點(diǎn)時(shí)加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并 強(qiáng)力振搖，至藍(lán)色消失；另精密量取供 試品溶液 5ml，置碘瓶中，加醋酸 醋酸 鈉緩沖液（ ） 5ml，精密加入碘滴 定液（ ） 15ml，密塞，搖勻， 在暗處放置 20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定 液（ ）滴定，作為空白。 V樣空 V樣 對(duì)照液 +緩沖液 +碘液 +回滴 +堿 +酸 +緩沖液 +碘液 +回滴 V對(duì)空 V對(duì) 2. 方法 供試液 +緩沖液 +碘液 +回滴 +堿 +酸 +緩沖液 +碘液 +回滴 ? 空白試驗(yàn) A、消除樣品已降解產(chǎn)物的干擾 B、消除樣品中其他消耗碘的雜質(zhì)的干擾 C、消除碘揮發(fā)造成的誤差 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定 空白 樣品 I2 Na2S2O3 I I2 ? 采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測定 A、可消除溫度、 pH、操作、環(huán)境等條件的影響 B、使本法測定結(jié)果與微生物檢定法一致 3. 條件 （ 1）弱酸性 堿 ↑ I2 → IO3 + I 酸 ↑ 普魯卡因與碘在酸性條件 下會(huì)產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀 （ 2）溫度 24～ 26℃ 溫度 ＞ 38 ℃ 未水解的供試品亦消耗碘 （ 3）水解時(shí)間 以水解 20分鐘后的 耗碘量最大 （ 4）反應(yīng)時(shí)間 反應(yīng) 20分鐘后， 耗碘量隨時(shí)間的 變化較小，可減小含量測定的誤 差 4. 特點(diǎn) （ 1）靈敏度高 樣品 : 碘 = 1 : 8 （ 2）反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高 V對(duì) 、 V對(duì)空 V樣 、 V樣空 1份含量 加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同 5. 計(jì)算 原料 %100????????平均裝量）（）（含量％＝樣對(duì)對(duì)對(duì)空樣樣空 DUWUCVVVVO汞量法 （二） 1. 原理 SHROH ??? ???青霉素族 （水解） HgRS ?）（青霉素族 ??Hg??.pH堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸，進(jìn)一步水解產(chǎn)物青霉胺 2. 方法 ? ?? ?總樣VNOHgH N ON a O H ???? ????? ????? ?? ???醋酸鹽緩沖液 滴定 水解 ? ?? ?降空醋酸鹽緩沖液 VNOHg ???? ??????? ?? ?? 滴定 樣 品 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定 例 青霉素鈉 含量測定 取本品約 50mg，精密稱定，加水 5ml溶解后，加 1mol/L氫氧化鈉溶液 5ml ，搖勻，放置 15分鐘，加 1mol/L硝酸溶 液 5ml，醋酸鹽緩沖液 ()20ml及水 20ml，搖勻，照電位滴定法 (附錄 Ⅶ A), 用鉑電極為指示電極，汞 硫酸亞汞電極 為參比電極，在 35～ 40℃ ，用硝酸汞滴 定液 ()緩慢滴定， （控制滴定過程約為 15分鐘），不計(jì)第 一個(gè)等當(dāng)點(diǎn)，計(jì)算第二個(gè)等當(dāng)點(diǎn)時(shí)消耗 滴定液的量。 另取本品約 ，精密稱定，加水 與上述醋酸鹽緩沖液各 25ml，振搖使完 全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定 液 ()滴定，終點(diǎn)判斷方法同上 . 每 1ml硝酸汞滴定液（ ）相當(dāng)于（按 C16H17N2NaO4S計(jì)算）。 討論 （ 1） 以第二次滴定突躍為終點(diǎn) 電位法指示終點(diǎn) （ 2） 反應(yīng)摩爾比 1 : 1 （ 3） 空白試驗(yàn) 消除已降解產(chǎn)物干擾 （ 4） 優(yōu)點(diǎn) 不需標(biāo)準(zhǔn)品 %WFTV%WFTV% ??????????????空空樣樣含量 計(jì)算 %FTWVWV% ???????? ）（含量空空樣樣 精密稱取含水量為 %的青霉素 鈉 ，按藥典方法測定總青霉素含 量時(shí)，用去硝酸汞滴定液 () 。以干 燥品計(jì)算，求樣品中青霉素的含量。 硫醇汞鹽法 酸水解－銅鹽法 羥肟酸比色法 nmCupH A???? ?? ???? ?? ??青霉烯酸青霉素族 （水解） 酸水解法（銅鹽法） （ 1）原理 穩(wěn)定劑 JP 青霉素族 酸性降解產(chǎn)物 （ 2）方法 標(biāo)樣枸櫞酸硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液供試液AAnmA ??? ???????? ?? ? 320H+ △ （ 3）特點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)條件隨各藥物穩(wěn)定性不同而定 標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法 硫醇汞鹽法 （ 1）原理 青霉烯酸硫醇汞鹽青霉素族 ?? ?? ?H g C l（咪唑） nmm a x ? ? ?? ? ?? ～青霉素族 催化劑 （ 2）方法 對(duì)照品法 標(biāo)樣咪唑硼酸緩沖液標(biāo)準(zhǔn)液供試液AAH g C l????? ??????? ??? 2pH 9 %WWAA% 對(duì)照品樣標(biāo)標(biāo)樣 ???（ 3）討論 a. 咪唑催化的水解產(chǎn)率高，硫 醇汞鹽穩(wěn)定（ ≥3h） b. 側(cè)鏈有 NH2時(shí)，需加醋酐先 將其乙?；蟛拍馨l(fā)生上述 反應(yīng) （ 4）特點(diǎn) A、簡便快速 B、用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，重現(xiàn)性良 好， RSD≤1% 羥肟酸比色法 Fe3+/3