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如何申請國家自然科學(xué)基金-在線瀏覽

2025-07-14 03:17本頁面
  

【正文】 e)莢膜轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象, 1944年 Arery等證實了轉(zhuǎn)化物的化學(xué)本質(zhì)是 DNA,證明生命的遺傳物質(zhì)是 DNA。 本研究從肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化入手來探討其對細(xì)菌毒力表達(dá)的影響。 肺炎鏈球菌作為一種 自然界廣泛存在 的致病菌,肺炎鏈球菌可引起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病??股氐膽?yīng)用由于耐藥菌的迅速增加而越來越失去治療價值。 尋找體內(nèi)新的毒力基因,揭示肺炎球菌致病機(jī)理,才能從根本上解決其感染的治療問題。 對研究方法不熟悉,簡單移植或夸大其作用, 缺乏實際應(yīng)用的可行性 無法實現(xiàn)預(yù)期目標(biāo) 。 ( 撰寫方法:要 緊緊圍繞 本次申請項目的主題。 從研究方向展開, 較詳細(xì)地分析 國內(nèi)外在 本方向的研究進(jìn)展,引出闡明疾病發(fā)病機(jī)理或發(fā)明 新的治療方法的 關(guān)鍵問題 所在。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問題 。 成熟的方法要簡要介紹,重點闡明可以應(yīng)用于本研究的依據(jù)。 要特別注意的問題:必須對項目中所運用的技術(shù)方法的原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚,絕不能是一種簡單的移植。 提出本項目的研究設(shè)想。已經(jīng)肯定環(huán)境信號控制著細(xì)菌毒力基因表達(dá) [4]。 目前對肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化機(jī)理的研究概況:操縱子 CDE為多種環(huán)境因素如 Ca2+、 O2濃度、生長階段、細(xì)菌密度等調(diào)節(jié)其感受態(tài)發(fā)生的唯一共同調(diào)控點 [5, 6, 7],也是肺炎鏈球菌控制許多蛋白質(zhì)基因表達(dá)的開關(guān) [8]。 根據(jù)以上研究背景, 我們的研究思路為:采用插入失活的手段,分別使基因 C、 D、 E失活,從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。 本研究從轉(zhuǎn)化過程中感受態(tài)的形成方面探討其對肺炎鏈球菌毒力影響, 意義在于 : 有關(guān),而其形成與多種環(huán)境因素相關(guān),因此本課題為從體內(nèi)研究環(huán)境因素對于肺炎鏈球菌致病性的影響開辟了一條新的途徑。 注意事項 注意邏輯性和層次感,并隨時點題。 參考文獻(xiàn)必須提供作者全名、出處。 要注意參考國內(nèi)相關(guān)專業(yè)知名專家的論著。 三、研究方案 研究目標(biāo) 存在問題: 目標(biāo)過大 撰寫要求: 有限目標(biāo) , 與研究內(nèi)容相呼應(yīng) 如:探索 …… 問題,明確 …… 關(guān)系,揭示 …… 規(guī)律, 闡明 …… 原理(機(jī)制),建立 …… 方法等 本研究的目標(biāo)是: 探討 ,重點闡明 : 1) 體內(nèi)環(huán)境是否誘導(dǎo) ( 感受態(tài)的發(fā)生 ) 。 研究內(nèi)容: 存在問題:內(nèi)容過多,一個研究周期難以完成; 內(nèi)容分散,不能集中闡明研究目標(biāo)。 篇幅要適度,注意與技術(shù)路線區(qū)別。 研究內(nèi)容 (一 ):通過 CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實驗得到感受態(tài)缺陷的 。 pEVP3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 陷菌 , 并通過體外轉(zhuǎn)化實驗以確定其感受態(tài)缺陷 。( cinA是 基因,與外源基因的同源重組有關(guān),因此將熒光蛋白基因接于其后,熒光表達(dá)可報告感受態(tài)的發(fā)生)1) 將綠色熒光蛋白( gfp)基因替代 pEVP3質(zhì)粒中的 LacZ基因,得到熒光報告質(zhì)粒。 將 pEVP4質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)缺陷和非缺陷的 , 得到轉(zhuǎn)化菌株 。 1) 做體外轉(zhuǎn)化實驗 , 驗證所構(gòu)建的菌株能被熒光表達(dá)報告感受態(tài)的發(fā)生 , 且感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 。 研究內(nèi)容 (四 ):通過感受態(tài)缺陷和非缺陷菌的粘附實驗及體內(nèi)毒力實驗分析細(xì)菌的感受態(tài)發(fā)生是否與其致病毒力相關(guān) 。 2) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌注射入 BALB/ct小鼠體內(nèi) , 觀察二者感染小鼠的致死率是否不同 。 研究內(nèi)容 (五 ):檢測感受態(tài)缺陷及非缺陷菌基因 C、 D、 E在體外和體內(nèi)的表達(dá)情況 ,以進(jìn)一步驗證細(xì)菌毒力的改變是否與其感受態(tài)的形成有關(guān) 。 2)制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體,做 western blot。 撰寫要求:找出關(guān)鍵問題,寫出解決辦法。 為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)
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