如何申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金-在線瀏覽
2025-07-14 03:17本頁(yè)面
【正文】 e)莢膜轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象， 1944年 Arery等證實(shí)了轉(zhuǎn)化物的化學(xué)本質(zhì)是 DNA，證明生命的遺傳物質(zhì)是 DNA。 本研究從肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化入手來(lái)探討其對(duì)細(xì)菌毒力表達(dá)的影響。 肺炎鏈球菌作為一種 自然界廣泛存在 的致病菌，肺炎鏈球菌可引起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病?？股氐膽?yīng)用由于耐藥菌的迅速增加而越來(lái)越失去治療價(jià)值。 尋找體內(nèi)新的毒力基因，揭示肺炎球菌致病機(jī)理，才能從根本上解決其感染的治療問(wèn)題。 對(duì)研究方法不熟悉，簡(jiǎn)單移植或夸大其作用， 缺乏實(shí)際應(yīng)用的可行性 無(wú)法實(shí)現(xiàn)預(yù)期目標(biāo) 。 ( 撰寫(xiě)方法：要 緊緊圍繞 本次申請(qǐng)項(xiàng)目的主題。 從研究方向展開(kāi)， 較詳細(xì)地分析 國(guó)內(nèi)外在 本方向的研究進(jìn)展，引出闡明疾病發(fā)病機(jī)理或發(fā)明 新的治療方法的 關(guān)鍵問(wèn)題 所在。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問(wèn)題 。 成熟的方法要簡(jiǎn)要介紹，重點(diǎn)闡明可以應(yīng)用于本研究的依據(jù)。 要特別注意的問(wèn)題：必須對(duì)項(xiàng)目中所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問(wèn)題要十分清楚，絕不能是一種簡(jiǎn)單的移植。 提出本項(xiàng)目的研究設(shè)想。已經(jīng)肯定環(huán)境信號(hào)控制著細(xì)菌毒力基因表達(dá) [4]。 目前對(duì)肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化機(jī)理的研究概況：操縱子 CDE為多種環(huán)境因素如 Ca2+、 O2濃度、生長(zhǎng)階段、細(xì)菌密度等調(diào)節(jié)其感受態(tài)發(fā)生的唯一共同調(diào)控點(diǎn) [5， 6， 7]，也是肺炎鏈球菌控制許多蛋白質(zhì)基因表達(dá)的開(kāi)關(guān) [8]。 根據(jù)以上研究背景， 我們的研究思路為：采用插入失活的手段，分別使基因 C、 D、 E失活，從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。 本研究從轉(zhuǎn)化過(guò)程中感受態(tài)的形成方面探討其對(duì)肺炎鏈球菌毒力影響， 意義在于 : 有關(guān)，而其形成與多種環(huán)境因素相關(guān)，因此本課題為從體內(nèi)研究環(huán)境因素對(duì)于肺炎鏈球菌致病性的影響開(kāi)辟了一條新的途徑。 注意事項(xiàng) 注意邏輯性和層次感，并隨時(shí)點(diǎn)題。 參考文獻(xiàn)必須提供作者全名、出處。 要注意參考國(guó)內(nèi)相關(guān)專(zhuān)業(yè)知名專(zhuān)家的論著。 三、研究方案 研究目標(biāo) 存在問(wèn)題： 目標(biāo)過(guò)大 撰寫(xiě)要求： 有限目標(biāo) ， 與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng) 如：探索 …… 問(wèn)題，明確 …… 關(guān)系，揭示 …… 規(guī)律， 闡明 …… 原理（機(jī)制），建立 …… 方法等 本研究的目標(biāo)是： 探討 ，重點(diǎn)闡明 : 1） 體內(nèi)環(huán)境是否誘導(dǎo) （ 感受態(tài)的發(fā)生 ） 。 研究?jī)?nèi)容： 存在問(wèn)題：內(nèi)容過(guò)多，一個(gè)研究周期難以完成； 內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。 篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。 研究?jī)?nèi)容 (一 )：通過(guò) CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)得到感受態(tài)缺陷的 。 pEVP3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 陷菌 ， 并通過(guò)體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以確定其感受態(tài)缺陷 。（ cinA是 基因，與外源基因的同源重組有關(guān)，因此將熒光蛋白基因接于其后，熒光表達(dá)可報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生）1) 將綠色熒光蛋白（ gfp）基因替代 pEVP3質(zhì)粒中的 LacZ基因，得到熒光報(bào)告質(zhì)粒。 將 pEVP4質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)缺陷和非缺陷的 ， 得到轉(zhuǎn)化菌株 。 1) 做體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) ， 驗(yàn)證所構(gòu)建的菌株能被熒光表達(dá)報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生 ， 且感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 。 研究?jī)?nèi)容 (四 )：通過(guò)感受態(tài)缺陷和非缺陷菌的粘附實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)分析細(xì)菌的感受態(tài)發(fā)生是否與其致病毒力相關(guān) 。 2) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌注射入 BALB/ct小鼠體內(nèi) ， 觀察二者感染小鼠的致死率是否不同 。 研究?jī)?nèi)容 (五 )：檢測(cè)感受態(tài)缺陷及非缺陷菌基因 C、 D、 E在體外和體內(nèi)的表達(dá)情況 ，以進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)菌毒力的改變是否與其感受態(tài)的形成有關(guān) 。 2）制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體，做 western blot。 撰寫(xiě)要求：找出關(guān)鍵問(wèn)題，寫(xiě)出解決辦法。 為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)
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