【正文】 檢測企業(yè)陰 /陽性參考品的符合情況，陽性參考品重在評估產(chǎn)品包容性，陰性參 考品旨在評價試劑特異性。 （分析靈敏度）申報產(chǎn)品最低檢測限的性能評估資料應包含最低檢測限的確定及驗證過程。 申報產(chǎn)品檢測企業(yè)最低檢測限參考品，檢測結果應滿足相應要求。臨床樣本收集過程中應考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的 B、 C、 D 型）。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評價中所用樣本應至少包含精密度參考品及若干臨床樣本。 設定合理的精密度評價周期，例如：為期至少 20 天的檢測，每天至少由 2 人完成不少于 2 次的完整檢測，從而對批內(nèi) /批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。 交叉反應： 申請人應針對可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進行交叉反應驗證，用于交叉反應驗證的樣品，除乙型肝炎病毒相關標志物外，評估 HBeAg檢測試劑交叉反應的樣本應盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關病原體抗原陽性樣本； 評估抗 HBe檢測試劑交叉反應的樣本應盡量采用臨床相關病原體抗體陽性樣本。建議在病毒感染的醫(yī)學決定水平進行交叉反應的驗證，申請人應詳細 說明交叉反應樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結果等。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度條件（“最差條件”）下進行評價，干擾物質(zhì)的選取應至少包括：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風濕因子、自身抗體及常見治療性藥物等。 其他抗凝劑研究，如申請人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清，建議申請人采用血清血漿同源比對的方式對抗凝劑干擾進行研究，研究應能夠覆蓋所有聲稱的 抗凝劑種類。用于該項研究的樣本可為人工構建樣本，建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應的研究結果。 換的檢測，應進行相應性能研究。研究應當顯示出患者發(fā)生血清學轉換過程中 HBeAg 消失、抗 HBe 出現(xiàn)的趨勢，同時，申報產(chǎn)品檢測結果應與已上市同類產(chǎn)品檢測結果一致，或滿足商業(yè)化的血清轉換盤的使用要求。建議申請人采用受試者工作特征（ ROC）曲線的方式進行臨界值的研究，明確臨界值的計算公式。研究所需的樣本量應滿足統(tǒng)計學要求。 在陽性判斷值設定后，申請人應當選取一定數(shù)量陰、陽性真實臨床樣本進行實驗驗證。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。對于實時穩(wěn)定性研究，應 提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。 （七）臨床試驗臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技 術指導原則》的要求。臨床試驗可采用試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對比試劑）進行比較研究，評價兩種方法檢測結果的一致性，評價指標通常包括陽性符合率、陰性符合率等。 如申報產(chǎn)品在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預期用途下，有新的臨床預期用途（如：定量檢測產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測等），應采用試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究，對產(chǎn)品新預期用途進行臨 床評價。 如申報產(chǎn)品性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準的比較研究和試驗用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結合，對產(chǎn)品的臨床性能進行綜合評價，從而支持預期用途所聲稱的內(nèi)容。 根據(jù)產(chǎn)品臨床驗證的目的，入組人群應包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。如申報產(chǎn)品聲稱可適用于“疾病監(jiān)測”，臨床試驗應入組符合要求的病例，進行患者跟蹤隨訪研究。如申報產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含血清、血 漿等多個樣本類型，應針對不同樣本類型進行同源比對。 3 家（含 3 家）符合要求的臨床試驗機構開展。 試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性 符合率等。 到準確評價的必要條件。臨床試驗樣本量估算的方法有很多，如單組目標值法、優(yōu)效性試驗的樣本量估算等。樣本量估算過程中，評價指標的臨床可接受標準（ P0）即 HBeAg、抗 HBe檢測試劑臨床陰 /陽性符合率應大于 95%。 樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應高于 10%。 ，應與臨床試驗目的一致，如臨床試驗目的為驗證申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計分析一般以 2 2 表的形式總結兩種分析方法的檢測結果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、 Kappa 值等指標及其可信區(qū) 間。 如產(chǎn)品臨床試驗采用其他統(tǒng)計學模型進行統(tǒng)計分析，如優(yōu)效性試驗等，應充分說明其合理性。研究者應充分考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結果對受試者的風險性，應提交倫理委員會的審查意見。整個試驗過程都應處于有效的質(zhì) 量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。評價過程應評估境外和境內(nèi)人群中 HBV 的流行情況存在的差異。 HBeAg、抗 HBe 檢測試劑的產(chǎn)品性能指標應主要包括：物理性狀、陰 /陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。 按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應符合相關編寫規(guī)范的要求。產(chǎn)品檢驗報告應符合相應的國家標準品、參考品的要求。產(chǎn)品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導 原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 17 號）的要求，進口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。 結合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求， HBeAg、抗 HBe檢測試劑說明書編寫應重點關注以下內(nèi)容。如申報產(chǎn)品存在新的預期用途，應有充分的臨床試驗證據(jù)作為支持。檢驗結果的解釋應以陽性判斷值的研究結論為依據(jù)。 ，主要包括以下內(nèi)容： 本試劑檢測結果應結合患者臨床癥狀及其他 相關醫(yī)學檢查結果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。 申報產(chǎn)品應明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。 第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術審查指導原則 一、前言 本指導原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品 質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術要求。 本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術的不斷發(fā)展，其相關內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導原則執(zhí)行。 — 2— 術人員、儀器設 備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求建立相應的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。 、規(guī)范的原則，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。 ：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。這類原料可用于包被酶標反應板、標記相關酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應商要 求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質(zhì)量標準，分子量大小應在正確的條帶位臵。 （ 4）效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含量 測定結果，通過倍比稀釋法進行。 （ 5）功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關性。這些生物原料的質(zhì)量標準應符合 2021 年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》規(guī)定的標準要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。無菌試驗：將血清直接 37℃放臵 7 天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或 — 4— 沉淀。 球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應≤2mg/ml。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時，溶解時間應≤ 15 分鐘， pH值應為 。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥ 95%。（ 3）酪蛋白： 應符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應。 3.化學原材料 化學原材料的質(zhì)量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應符合《中國生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標準（ 2021 年版）》分析 純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)?；瘜W原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。②吸附能力和精密性采用合適的方法進行檢驗。 CV 值結果應符合相關產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標準，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫(yī)療 器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定》建立相應質(zhì)量控制標準。如該產(chǎn)品具有國家標準品或參考品，應使用國家標準品（參考品）進行標化；若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 （三）試劑盒各組分的生產(chǎn) 酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標反應板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應在相應的生物安全實驗室完成。對于定量檢測試劑，其標準品（或校準品）溶液應具有量值溯源性。 包被前應對酶標反應板進行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標反應板的批號、數(shù)量、標識。不同批號的板條不能混用。 應對包被過程進行相應的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、 pH 值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。 分裝及包裝均應按照相應的標準操作規(guī)程要求進行。 （四）質(zhì)量控制 （ 1）半成品抽樣 檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各 — 8— 組分，作號標記、待檢。半成品檢驗，一般使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化后的企業(yè)參考品。 檢驗指標一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應達到相應的質(zhì)量標準要求。對定量檢測試劑，同時應分析其線性相關系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測結果的準確性。試劑盒各組分應留樣， 2 8℃定期作穩(wěn)定性考 核，同時作 37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結果應符合產(chǎn)品的質(zhì)量標準。抽樣數(shù)量應包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。 每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。若該診斷試劑沒有國家 — 9— 標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 四、名詞解釋 酶聯(lián)免疫法：是指在酶標板