【正文】 驗性肝纖維化的有效性，為開發(fā)中藥新劑型、提高藥物在靶組織濃度、降低有效劑量、減輕副作用和提高療效提供實踐基礎。XXXXXXXXX 的藥代動力學特征、組織分布特征和XXXXXXX ： 研究構建XXXXXXXX，為抗肝纖維化藥物新劑型開發(fā)提供新型靶向載體。 究。 大鼠HSC分離培養(yǎng)，XXXXXXX 修飾脂質體與肝星狀細胞體外結合活性研究。165(5): 、研究目標，以及擬解決的關鍵問題 ： XXXXX化學合成與鑒定，二硬脂酸磷酯酰胺XXXXXXXXXX 合成與鑒定。125(1): Ludbrook SB, Barry ST, Delves CJ, et integrin alphavbeta3 is a receptor for the latencyassociated peptides of transforming growth factors beta1 and J 2003。100(3): Breitkopf K, Haas S, Wiercinska E, et strategies for the treatment of chronic liver Clin Exp Res 2005。參考文獻 Friedman of disease: Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2004。本研究將為XXXXXXXX等提供理論與實踐基礎。結合國內外同行的研究報道與我們的研究基礎，不難推斷，XXXXXXXXXXXXXXXXX。XXXXXXXXXXXXXXXXX?；谝陨舷盗醒芯炕A與設想，緊跟國內外在制劑學方面的進展，我們擬設計XXXXXXXXXXX。RGDM6P新型復合分子的研制成功及其對HSC靶向與抑制功能的發(fā)現(xiàn)，有助于我們去研究更多的HSC靶向選擇性高、局部作用強、系統(tǒng)毒性小的新型藥物和(或)制劑，從而提高藥物的療效、減輕毒性反應。研究還發(fā)現(xiàn)，M6P能提高RGD作用于HSC的靶向性，增加其局部濃度，使RGDM6P顯示出較RGD更強的抑制作用[14]。我們的研究發(fā)現(xiàn)，RGD和RGDM6P均可抑制HSC活化。綜上所述，XXXXXXX，如能XXXXXX，可進一步實現(xiàn)XXXXX治療。②XXXXXX。在肝纖維化過程中，TGFβ信號通路還與整合素信號通路存在密切聯(lián)系。抑制TGFβ1對HSC的作用一直以來均是抗肝纖維化重要著眼點[3]。這些全新研究成果進一步增強了我們開發(fā)這一傳統(tǒng)中藥的信心。新近，我們在國內外首次發(fā)現(xiàn)，低濃度Tet能上調轉化生長因子β（transforming growth factor factor β，TGFβ）抑制性信號分子Smad 7表達，調控TGFβSmad信號通路，抑制體外培養(yǎng)靜止期HSC活化，阻斷TGFβ1促靜止期HSC活化效應，Tet還誘導活化HSC活化逆轉。近年國內Tet抗肝纖維化研究也由此逐漸走向低谷。我們研究室在過去的十幾年中，對Tet抗肝纖維化作用及機制進行了系統(tǒng)研究，證實Tet是抗肝纖維化有效藥物。粉防己堿（tetrandrine，又名漢防己甲素）是中藥粉防己（Stephania tetrandra S Moore）的主要有效生物堿成分，具有廣泛的藥理作用。報告正文（一）立項依據(jù)與研究內容1立項依據(jù)肝纖維化是嚴重威脅人類健康的重要疾病之一，迄今沒有滿意的治療方法。第一篇：申報國家自然科學基金項目申請書樣板申報國家自然科學基金項目申請書樣板各位申請人：科研處從全國成功申報國家自然科學基金項目中挑選了一份嚴格按照報告正文撰寫提綱要求撰寫，并在撰寫的整體布局、寫作方法上比較適宜的申請書作為樣板申請書，提供給其他申請人在撰寫申請書時參考。注：考慮到本項目也將申請國家自然科學基金，從技術保密方面考慮，涉及核心技術和關鍵問題之處將以“XXXXXXX”代替。目前國內外絕大多數(shù)學者認為，肝星狀細胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纖維化的關鍵，抑制HSC的激活對肝纖維化的防治有重要價值[1]?？垢卫w維化是Tet的重要應用領域之一。然而，由于Tet的劑量安全范圍較小，以往研究發(fā)現(xiàn)的抗肝纖維化有效劑量與中毒劑量比較接近，故成為限制其臨床應用的重要因素。為減少毒副反應，拓展該藥物的臨床應用，我們近四年從降低Tet的單藥劑量、聯(lián)合用藥及改造藥物毒性基團等方面進行實驗性探索。部分最新研究成果已經整理成文發(fā)表在本領域有一定影響力的SCI索引源期刊上，并被SCI收錄(收錄號 IDS Number: 963XN)[2]（相關文章參詳見申請人簡歷及附件二、三）。TGFβ1是目前認識的最重要的促肝纖維化因子。Smad 7是HSC TGFβ信號通路的最主要負反饋調節(jié)信號分子，上調Smad 7是抑制TGFβ對HSC不良生物效應的有措施之一[4]。這表現(xiàn)在三個方面：①XXXXXX。③XXXXXXXXX。基于以上研究結果，我們研究室在國家自然科學基金資助下，過去三年中應用化學方法合成了RGD和M6P，并將RGD與M6P結合成一新型復合分子RGDM6P，研究比較了它們對HSC靶向性及在抑制其功能中的作用（項目名稱：RGD修飾細胞生物信息調控分子和綴合基因的功能研究，編號：30170412）。RGD在抑制TGFβ激活同時，還可阻止HSC與ECM結合，阻斷整合素信號轉導。我們首次證實，新型復合分子RGDM6P用于抗肝纖維化治療，無論在對HSC靶向的特異性，還是多位點聯(lián)合作用方面，都優(yōu)于單一的含RGD序列的肽段或M6P（參見基金結題摘要，相關文章參見申請人簡歷及附件四）。結合我們對Tet藥理作用的分子機制的研究結果，不難發(fā)現(xiàn)，XXXXXXXX。當前，受體調節(jié)藥物靶向（receptormediated drug targeting）作為一種新型的給藥系統(tǒng)受到人們的重視[16]。迄今為止，尚未見到XXXXXXXXXXX。綜上所述，我們擬在XXXXXXXXXX。XXXXXXXXXX可以設想，如能取得預期效果，經過良好設計的基礎研究后，這一XXXXXX應用于臨床的時間不會太久，前景廣闊。1(2): Chen YW, Li DG, Wu JX, et inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factorbeta in vitro via upregulation of Smad Ethnopharmacol 2005。29(11 Suppl): Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in 2003。369(Pt 2): Annes JP, Chen Y, Munger JS, et alphaVbeta6mediated activation of latent TGFbeta requires the latent TGFbeta binding Cell Biol 2004。 不同類型脂質體的制備、技術參數(shù)優(yōu)化、物理性質鑒定和脂質體藥物包封率、載藥量、配體結合率鑒定與提高。 XXXXX 修飾XXXXXXXXX 對肝星狀細胞活化、增殖、XXXXXXX信號通路影響。 XXXXXXXX 對膽總管結扎和CCl4大鼠肝纖維化防治作用。 研究XXXXXX 對HSC生物活性影響及機制，為中西藥結合肝纖維化雙靶向、多靶點、協(xié)同治療提供理論基礎。 擬解決的關鍵問題： 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定XXXXXXXX 制備。 XXXXXX 體內HSC靶向性、抗肝纖維化效果比較與評價。應用XXXXXXXXXX。高效液相（HPLC）、質譜等方法鑒定合成產物純度及分子量。XXXXXXXXXXXX。高效液相（HPLC）和質譜分析法進物產物純化與鑒定。具體方法如下：XXXXXXXXXX。(3)均勻設計優(yōu)化處方根據(jù)實驗結果及文獻，確定影響包封率的主要因素。第三部分 XXXXX修飾長循環(huán)脂質體與HSC體外結合活性 采用兩步膠原酶灌注和密度梯度離心法分離大鼠HSC，選擇靜止態(tài)和激活態(tài)的HSC，接種于6孔板上(105/mL)。(1)配體結合的濃度效應關系XXXXXXXXXXX。(3)競爭抑制XXXXXXXXXX。(5)平衡解離常數(shù)(Kd)和細胞最大結合位點數(shù)(Bmax)XXXXXXXXXXX。新鮮分離的HSC，體外培養(yǎng)48 h后，作為靜止期HSC用于下游實驗，或培養(yǎng)1 w后消化傳代，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，作為活化的HSC用于下游實驗。(2)XXXXXX對TGFβ1效應影響 XXXXXXXXXXXX。第五部分 XXXXXXXXXXXX(1)XXXXXXXX 在肝纖維化大鼠體內的器官分布XXXXXXXXXX。(3)XXXXXXX 在肝纖維化大鼠肝臟內分布 采用XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX。(2)分組及處理XXXXXXXXXXXXXX。技術路線圖XXXXXXXXXXXXXXX。本研究是參閱大量文獻并結合自身以往深厚的肝纖維化防治研究基礎，特別是結合近四年國家自然科學基金資助研究成果，在XXXX 化學合成及功能研究、低劑量XXX抗肝纖維化作用和機制的前期工作基礎上，提出的多途徑、互補協(xié)同與靶向治療肝纖維化的新探索。 相關實驗技術成熟，實驗結果可信。本課題組由掌握以上技術的成員組成，相關技術已應用于科研工作。申請人長期從事肝纖維化防治研究，先后承擔包括國家自然基金在內的各類科研項目15項，指導或協(xié)助指導博士后、博士生及碩士生70余名。實驗設計指導者、熟練技術人員及輔助人員等各司其職，可保障研究有條不紊的進行。本項目的特色與創(chuàng)新之處 本課題首次嘗試利用XXXXXXX構建HSC特異性受體調節(jié)藥物靶向載體。 本課題首次研究XXXXX生物小分子通過XXXXX與中藥粉防己堿相聯(lián)合，多途徑、互補與協(xié)同防治肝纖維化。年度研究計劃及預期研究結果 年度研究計劃： 預期研究成果 獲得快速、有效和大量合成XXXXXXX和高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定XXXXXXXX的技參數(shù)，并合成足量研究相關產物。 在體內XXXXXXXXX，有效降低有效劑量、提高療效和降低副作用。（二）研究基礎與工作條件 1 研究基