【正文】 驗(yàn)性肝纖維化的有效性，為開發(fā)中藥新劑型、提高藥物在靶組織濃度、降低有效劑量、減輕副作用和提高療效提供實(shí)踐基礎(chǔ)。XXXXXXXXX 的藥代動力學(xué)特征、組織分布特征和XXXXXXX ： 研究構(gòu)建XXXXXXXX，為抗肝纖維化藥物新劑型開發(fā)提供新型靶向載體。 究。 大鼠HSC分離培養(yǎng)，XXXXXXX 修飾脂質(zhì)體與肝星狀細(xì)胞體外結(jié)合活性研究。165(5): 、研究目標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵問題 ： XXXXX化學(xué)合成與鑒定，二硬脂酸磷酯酰胺XXXXXXXXXX 合成與鑒定。125(1): Ludbrook SB, Barry ST, Delves CJ, et integrin alphavbeta3 is a receptor for the latencyassociated peptides of transforming growth factors beta1 and J 2003。100(3): Breitkopf K, Haas S, Wiercinska E, et strategies for the treatment of chronic liver Clin Exp Res 2005。參考文獻(xiàn) Friedman of disease: Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2004。本研究將為XXXXXXXX等提供理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。結(jié)合國內(nèi)外同行的研究報(bào)道與我們的研究基礎(chǔ)，不難推斷，XXXXXXXXXXXXXXXXX。XXXXXXXXXXXXXXXXX?；谝陨舷盗醒芯炕A(chǔ)與設(shè)想，緊跟國內(nèi)外在制劑學(xué)方面的進(jìn)展，我們擬設(shè)計(jì)XXXXXXXXXXX。RGDM6P新型復(fù)合分子的研制成功及其對HSC靶向與抑制功能的發(fā)現(xiàn)，有助于我們?nèi)パ芯扛嗟腍SC靶向選擇性高、局部作用強(qiáng)、系統(tǒng)毒性小的新型藥物和(或)制劑，從而提高藥物的療效、減輕毒性反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，M6P能提高RGD作用于HSC的靶向性，增加其局部濃度，使RGDM6P顯示出較RGD更強(qiáng)的抑制作用[14]。我們的研究發(fā)現(xiàn)，RGD和RGDM6P均可抑制HSC活化。綜上所述，XXXXXXX，如能XXXXXX，可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)XXXXX治療。②XXXXXX。在肝纖維化過程中，TGFβ信號通路還與整合素信號通路存在密切聯(lián)系。抑制TGFβ1對HSC的作用一直以來均是抗肝纖維化重要著眼點(diǎn)[3]。這些全新研究成果進(jìn)一步增強(qiáng)了我們開發(fā)這一傳統(tǒng)中藥的信心。新近，我們在國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)，低濃度Tet能上調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor factor β，TGFβ）抑制性信號分子Smad 7表達(dá)，調(diào)控TGFβSmad信號通路，抑制體外培養(yǎng)靜止期HSC活化，阻斷TGFβ1促靜止期HSC活化效應(yīng)，Tet還誘導(dǎo)活化HSC活化逆轉(zhuǎn)。近年國內(nèi)Tet抗肝纖維化研究也由此逐漸走向低谷。我們研究室在過去的十幾年中，對Tet抗肝纖維化作用及機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究，證實(shí)Tet是抗肝纖維化有效藥物。粉防己堿（tetrandrine，又名漢防己甲素）是中藥粉防己（Stephania tetrandra S Moore）的主要有效生物堿成分，具有廣泛的藥理作用。報(bào)告正文（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究內(nèi)容1立項(xiàng)依據(jù)肝纖維化是嚴(yán)重威脅人類健康的重要疾病之一，迄今沒有滿意的治療方法。第一篇：申報(bào)國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請書樣板申報(bào)國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請書樣板各位申請人：科研處從全國成功申報(bào)國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目中挑選了一份嚴(yán)格按照報(bào)告正文撰寫提綱要求撰寫，并在撰寫的整體布局、寫作方法上比較適宜的申請書作為樣板申請書，提供給其他申請人在撰寫申請書時(shí)參考。注：考慮到本項(xiàng)目也將申請國家自然科學(xué)基金，從技術(shù)保密方面考慮，涉及核心技術(shù)和關(guān)鍵問題之處將以“XXXXXXX”代替。目前國內(nèi)外絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纖維化的關(guān)鍵，抑制HSC的激活對肝纖維化的防治有重要價(jià)值[1]?？垢卫w維化是Tet的重要應(yīng)用領(lǐng)域之一。然而，由于Tet的劑量安全范圍較小，以往研究發(fā)現(xiàn)的抗肝纖維化有效劑量與中毒劑量比較接近，故成為限制其臨床應(yīng)用的重要因素。為減少毒副反應(yīng)，拓展該藥物的臨床應(yīng)用，我們近四年從降低Tet的單藥劑量、聯(lián)合用藥及改造藥物毒性基團(tuán)等方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性探索。部分最新研究成果已經(jīng)整理成文發(fā)表在本領(lǐng)域有一定影響力的SCI索引源期刊上，并被SCI收錄(收錄號 IDS Number: 963XN)[2]（相關(guān)文章參詳見申請人簡歷及附件二、三）。TGFβ1是目前認(rèn)識的最重要的促肝纖維化因子。Smad 7是HSC TGFβ信號通路的最主要負(fù)反饋調(diào)節(jié)信號分子，上調(diào)Smad 7是抑制TGFβ對HSC不良生物效應(yīng)的有措施之一[4]。這表現(xiàn)在三個(gè)方面：①XXXXXX。③XXXXXXXXX?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，我們研究室在國家自然科學(xué)基金資助下，過去三年中應(yīng)用化學(xué)方法合成了RGD和M6P，并將RGD與M6P結(jié)合成一新型復(fù)合分子RGDM6P，研究比較了它們對HSC靶向性及在抑制其功能中的作用（項(xiàng)目名稱：RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究，編號：30170412）。RGD在抑制TGFβ激活同時(shí)，還可阻止HSC與ECM結(jié)合，阻斷整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。我們首次證實(shí)，新型復(fù)合分子RGDM6P用于抗肝纖維化治療，無論在對HSC靶向的特異性，還是多位點(diǎn)聯(lián)合作用方面，都優(yōu)于單一的含RGD序列的肽段或M6P（參見基金結(jié)題摘要，相關(guān)文章參見申請人簡歷及附件四）。結(jié)合我們對Tet藥理作用的分子機(jī)制的研究結(jié)果，不難發(fā)現(xiàn)，XXXXXXXX。當(dāng)前，受體調(diào)節(jié)藥物靶向（receptormediated drug targeting）作為一種新型的給藥系統(tǒng)受到人們的重視[16]。迄今為止，尚未見到XXXXXXXXXXX。綜上所述，我們擬在XXXXXXXXXX。XXXXXXXXXX可以設(shè)想，如能取得預(yù)期效果，經(jīng)過良好設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)研究后，這一XXXXXX應(yīng)用于臨床的時(shí)間不會太久，前景廣闊。1(2): Chen YW, Li DG, Wu JX, et inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factorbeta in vitro via upregulation of Smad Ethnopharmacol 2005。29(11 Suppl): Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in 2003。369(Pt 2): Annes JP, Chen Y, Munger JS, et alphaVbeta6mediated activation of latent TGFbeta requires the latent TGFbeta binding Cell Biol 2004。 不同類型脂質(zhì)體的制備、技術(shù)參數(shù)優(yōu)化、物理性質(zhì)鑒定和脂質(zhì)體藥物包封率、載藥量、配體結(jié)合率鑒定與提高。 XXXXX 修飾XXXXXXXXX 對肝星狀細(xì)胞活化、增殖、XXXXXXX信號通路影響。 XXXXXXXX 對膽總管結(jié)扎和CCl4大鼠肝纖維化防治作用。 研究XXXXXX 對HSC生物活性影響及機(jī)制，為中西藥結(jié)合肝纖維化雙靶向、多靶點(diǎn)、協(xié)同治療提供理論基礎(chǔ)。 擬解決的關(guān)鍵問題： 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定XXXXXXXX 制備。 XXXXXX 體內(nèi)HSC靶向性、抗肝纖維化效果比較與評價(jià)。應(yīng)用XXXXXXXXXX。高效液相（HPLC）、質(zhì)譜等方法鑒定合成產(chǎn)物純度及分子量。XXXXXXXXXXXX。高效液相（HPLC）和質(zhì)譜分析法進(jìn)物產(chǎn)物純化與鑒定。具體方法如下：XXXXXXXXXX。(3)均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化處方根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及文獻(xiàn)，確定影響包封率的主要因素。第三部分 XXXXX修飾長循環(huán)脂質(zhì)體與HSC體外結(jié)合活性 采用兩步膠原酶灌注和密度梯度離心法分離大鼠HSC，選擇靜止態(tài)和激活態(tài)的HSC，接種于6孔板上(105/mL)。(1)配體結(jié)合的濃度效應(yīng)關(guān)系XXXXXXXXXXX。(3)競爭抑制XXXXXXXXXX。(5)平衡解離常數(shù)(Kd)和細(xì)胞最大結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(Bmax)XXXXXXXXXXX。新鮮分離的HSC，體外培養(yǎng)48 h后，作為靜止期HSC用于下游實(shí)驗(yàn)，或培養(yǎng)1 w后消化傳代，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，作為活化的HSC用于下游實(shí)驗(yàn)。(2)XXXXXX對TGFβ1效應(yīng)影響 XXXXXXXXXXXX。第五部分 XXXXXXXXXXXX(1)XXXXXXXX 在肝纖維化大鼠體內(nèi)的器官分布XXXXXXXXXX。(3)XXXXXXX 在肝纖維化大鼠肝臟內(nèi)分布 采用XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX。(2)分組及處理XXXXXXXXXXXXXX。技術(shù)路線圖XXXXXXXXXXXXXXX。本研究是參閱大量文獻(xiàn)并結(jié)合自身以往深厚的肝纖維化防治研究基礎(chǔ)，特別是結(jié)合近四年國家自然科學(xué)基金資助研究成果，在XXXX 化學(xué)合成及功能研究、低劑量XXX抗肝纖維化作用和機(jī)制的前期工作基礎(chǔ)上，提出的多途徑、互補(bǔ)協(xié)同與靶向治療肝纖維化的新探索。 相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。本課題組由掌握以上技術(shù)的成員組成，相關(guān)技術(shù)已應(yīng)用于科研工作。申請人長期從事肝纖維化防治研究，先后承擔(dān)包括國家自然基金在內(nèi)的各類科研項(xiàng)目15項(xiàng)，指導(dǎo)或協(xié)助指導(dǎo)博士后、博士生及碩士生70余名。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)指導(dǎo)者、熟練技術(shù)人員及輔助人員等各司其職，可保障研究有條不紊的進(jìn)行。本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處 本課題首次嘗試?yán)肵XXXXXX構(gòu)建HSC特異性受體調(diào)節(jié)藥物靶向載體。 本課題首次研究XXXXX生物小分子通過XXXXX與中藥粉防己堿相聯(lián)合，多途徑、互補(bǔ)與協(xié)同防治肝纖維化。年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計(jì)劃： 預(yù)期研究成果 獲得快速、有效和大量合成XXXXXXX和高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定XXXXXXXX的技參數(shù)，并合成足量研究相關(guān)產(chǎn)物。 在體內(nèi)XXXXXXXXX，有效降低有效劑量、提高療效和降低副作用。（二）研究基礎(chǔ)與工作條件 1 研究基