【正文】 temic research of the treatment of other immune injury disease. KEY WORD βchitosan with different molecular weight αchitosan with different molecular weight 6amine6deoxidation chitosan Newcastle disease Virus Antiviral mechanism 摘要 5 第一章 緒論 新城疫病毒的介紹及防治現(xiàn)狀 新城疫 是由新城疫病毒（ NDV）引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為典型癥狀的高度接觸性、急性敗血性傳染 病 [1, 2]。 關(guān)鍵詞 不同分子量 β殼聚糖 不同分子量 α殼聚糖 6胺代 6脫氧殼聚糖衍生物 新城疫病毒 抗病毒機理 摘要 3 ABSTRACT Newcastle disease (ND) is an acute septic and contact susceptible infectious disease caused by Newcastle disease virus (NDV). It resulted in blooding in respiratory tract and digestive tract mucosa. Currently, the treatments against ND are mainly adopts the prevention methods—— vaccines. In recent years, a large number of studies have shown that marine polysaccharide has antiviral activity and improve the body immunity. Chitosan as an only positively charged natural polysaccharide has terrific biological activities, such as the increase of immunity, antitumor, antibacterial, lipidlowering and moisturizing. What’s more important, chitosan and its derivatives were found that they can inhibit dozens of plant virus and viroid infection. But if it against NDV has not been reported at home and abroad. Therefore, we take chitosan with different molecular weight (Mw), different modified groups and different form as research object in this article to select the best product against Newcastle disease virus. The results indicated by the hemagglutination titer of allantoic fluid in chicken embryo. At the same time, using the fluorescent quantitative PCR technology, we detected the change of immune factors in order to determine that if the chitosan and its derivatives has activated and regulated the immune system in the process of antiviral. It’s useful to determine the influence of chitosan and its derivatives on the body39。 因此， β殼聚糖和6胺代 6脫氧殼聚糖衍生物 的 抗病毒機理 應(yīng)有所 不同， 值得我們 進一步研究 。 熒光定量 PCR的測定結(jié)果 表明： 低分子量 α殼聚糖 、 β殼聚糖 都能有效增加 IL IFNα、 IFNβ、 TNFα等免疫因子的轉(zhuǎn)錄，但 并沒有 導(dǎo)致病毒 RNA的致謝 明顯下降。 具體結(jié)果如下： 測試樣品均具有抗新城疫病毒活性，分子量、分子結(jié)構(gòu) 、 修飾基團 、產(chǎn)品濃度和接種方式 對活性影響顯著。 但其是否具有抗新城疫病毒活性，國內(nèi)外還未見報道。 近年來大量研究表明，海洋生物多糖具有抗病毒和提高機體免疫力的活性 。 學(xué)生 何曉飛摘要 1 摘要 新城疫是由新城疫病毒（ NDV）引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為典型癥狀的高度接觸性、急性敗血性傳染病。 感謝羅豐雷 師姐 、鄒平 師姐 、 楊皓月 師姐 、王晶 師姐 、 李儼 師兄 、宋琳 師姐 、張恩惠 師兄 、周苗苗、岳洋、黃勇 師弟 、張曉倩 師妹 、劉衛(wèi)翔 師弟 、金秋師妹 、孫 雨 豪 師弟 、楊 悅 師妹 等實驗室兄弟姐妹們給予的支持與幫助 ， 在此 一并 表示感謝。 愿老師 在以后的工作生活中，萬事如意， 幸福安康！ 十分感謝三年來 課題組 李鵬程老師的 關(guān)心與指導(dǎo)，生活中，李老師平易近人、關(guān)心學(xué)生；科研中，李老師嚴謹認真，銳意創(chuàng)新。從生活瑣事到實驗注意，事事躬親 ，對學(xué)生關(guān)心愛護極佳。十分感謝三年來，我的指導(dǎo)老師 ——邢榮娥老師，在生活和學(xué)習(xí)上給予的悉心指導(dǎo)與幫助 ，讓我對過去充滿懷念、對現(xiàn)在充滿感恩、 對以后充滿信心 。 （保密論文在解密后適用本授權(quán)書） 學(xué)位論文作者簽字： 日期： 導(dǎo)師簽字： 日期： 摘要 3 The preparation of chitosan and its derivatives and their inhibition effect on Newcastle disease virus By He Xiaofei (Marine Pharmacology) Directed by Xing Ronge A Dissertation Submitted to The University of Chinese Academy of Sciences In partial fulfillment of the requirement For the degree of Master of Science Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences May, 20xx 致謝 致謝 時光匆 匆而逝，三年好似昨天。 論文作者簽名： 日期： 學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本人完全了解中國科學(xué)院海洋研究所有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意海洋研究所保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。摘要 1 密級 :，，， 碩士學(xué)位論文 殼聚糖 衍生物 的制備及 其 抗新城疫病毒 活性 研究 作者姓名 ： 何曉飛 指導(dǎo)教師 : 邢榮娥副研究員 中國科學(xué)院海洋研究所 學(xué)位類別 : 學(xué)術(shù)型碩士 學(xué)科專業(yè) : 海洋藥物學(xué) 培養(yǎng)單位 : 中國科學(xué)院海洋研究所 學(xué)位授予單位： 中國科學(xué)院大學(xué) 20xx 年 05 月 致謝 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。本聲明的法律責(zé)任人由本人承擔(dān)。本人授權(quán)中國科學(xué)院海洋研究所可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。一年的北上求學(xué)，兩年的實驗探索，時至今日 已接近尾聲。 邢老師 以其熱情開朗的生活態(tài)度 、嚴謹客觀的研究認識、 努力認真的工作作風(fēng) 深深影響著我。 萬分榮幸，能有這樣一位博學(xué)、謙遜、嚴謹而又善良的老師指導(dǎo)我青春里最重要的道路。諄諄教誨、高尚師德學(xué)生永不敢忘，謹此畢業(yè)之際，特向李老師表達學(xué)生深深的感謝之情，望您身體健康，合家歡樂！ 在三年的學(xué)習(xí)生活中，感謝劉松老師、于華華老師、李克成老師、秦玉 坤老師、王雪芹老師、李榮鋒老師、陳曉琳老師給予的極大幫助與指導(dǎo)，在此特別表示感謝。 特別感謝奧蘭百特尹燕博老師課題組對抗病毒實驗的支持與指導(dǎo)， 感謝張全斌老師課題組在儀器設(shè)備上的 幫助 與支持 ，也感謝家人一直以來的關(guān)心、支持與體諒。目前 針對雞新城疫病毒 主要采用疫苗方法， 以預(yù)防為主 。殼聚糖 作為天然存在的唯一帶正電荷的多糖， 具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗菌 、降脂、保濕 等 非常好的生理活性 ，且研究發(fā)現(xiàn)， 殼聚糖及其衍生物 可抑制幾十種植物病毒、類病毒的侵染 。 因此， 本文 以不同分子量、 不同結(jié)構(gòu)類型、 不同基團修飾的 α殼聚糖、 β殼聚糖和 6胺 取 代 6脫氧殼聚糖衍生物 為研究對象， 雞胚尿囊液中血凝效價的降低作用為指標，篩選出最佳抗 雞新城疫病毒的 產(chǎn)品；同時，采用熒光定量PCR技術(shù)，測定免疫因子的變化，以此確定殼聚糖及其衍生物在對抗新城疫病毒的過程中，對于免疫系統(tǒng)的激活與調(diào)控，從而確定殼聚糖及其衍生物對于機體免疫系統(tǒng)的影響及藥效機制 。 1） α殼聚糖 和 β殼聚糖 抑制新城疫病毒 的最佳分子量分別為 4513Da 和 5743Da； 2） β殼聚糖的抗新城疫病毒活性明顯優(yōu)于α殼聚糖， β殼聚糖 在分子量為 3kDa6kDa 時，在直接抑制病 毒 的 接種 方式 下可有效降低血凝效價至 0，效果非常顯著 ； 3） 6脫氧 N鄰苯二甲酰基殼聚糖和6脫氧 6溴代 N鄰苯二甲?；鶜ぞ厶?顯著提高了 抗 新城疫 病毒活性 ，在直接抑制病毒的 試驗中 可有效降低血凝效價至 0； 4）在濃度方面， 8g/L分子量為3624Da 和 2g/L 分子量為 5743Da 的 β殼聚糖 ， 1g/L的 6脫氧 N鄰苯二甲?；鶜ぞ厶呛?6脫氧 6溴代 N鄰苯二甲?；鶜ぞ厶蔷?將 新城疫 病毒 血凝效價 降至 0。經(jīng)胺 取 代修飾的 殼聚糖衍生物雖然 具有顯著 的抗新城疫病毒效果，但 對于免疫因子 轉(zhuǎn)錄 影響表現(xiàn)獨特 ，有效降低了病毒 RNA。本文 研究 為 獲得一種 綠色低毒、 治療有效、價格低廉的抗 新城疫 病毒藥物 提供了 可能 ，同時 ， 對于免疫損傷性疾病 新城疫的研究 也 為我們 系統(tǒng)性研究 治療其他 免疫損傷性疾病 打下了 重要基礎(chǔ)。s immune system and its efficacy mechanism. Specific results are as follows: All test samples have antiviral activity against NDV influenced by Mw, modified group, the concentration of the product and the way of vaccination significantly. 1