基因工程研究策略和實踐-展示頁
2024-09-26 20:49本頁面
【正文】 (1)分子量較小 ， 在細菌中有較多的拷貝數(shù) 。 主要用于原核細胞與真核細胞之間進行基因轉移 ， 通常是將載體和待克隆的真核生物 DNA片段先在細菌中克隆， 再轉移到真核細胞中表達 ， 并可提高外源基因的表達效 率 。 能在兩種不同的生物體內復制和往來穿梭的載體。 表達載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可 轉錄翻譯成多肽鏈而特意設計的載體稱為 表達載體 。 ? 表達型載體還應具有與宿主細胞相適應的啟動子、增強子、加尾信號等基因表達元件。 clone amplification) 六、目的 DNA在受體細胞中的表達 (gene expression) 一、目的基因的分離 ? 從 cDNA文庫中分離目的基因 ? 從基因組 DNA文庫中分離目的基因 ? PCR擴增目的基因片段 ? 化學方法人工合成基因 mRNA cDNA 雙鏈 cDNA 重組 DNA分子 cDNA文庫 逆轉錄酶 載體 受體菌 復制 cDNA文庫中分離目的基因 逆轉錄酶 A A A A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶 Ⅰ 堿水解 T T T T ?cDNA文庫僅包含正在表達的基因 ?不同物種、不同組織的 cDNA文庫不相同 ?基因總量少，易篩選 組織或細胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉化菌 限制性內切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉化細胞內由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 2. 從基因組 DNA文庫獲取目的基因 包含所有遺傳信息 構建難度大（單拷貝基因、長片段基因） 篩選難度大 用于研究基因在基因組中的情況 PCR擴增目的基因片段 ? 適用于克隆序列清楚的基因 ? 以基因組 DNA為模板，直接進行 PCR擴增較難 ? 多采用以 mRNA為模板的 RTPCR法 PCR擴增儀 4. 化學合成法獲取較短的目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列 二、載體 DNA 載體 (Vector) 載體是目的基因的運載工具，其作用是將目的基因帶入受體細胞中，并使目的基因擴增和表達?；蚬こ萄芯坎呗院蛯嵺` 基因決定性狀 ? 青霉素能產生青霉菌 ? 家蠶能吐出蠶絲為人類利用 定向改造基因的設想 1. 能否讓細菌“吐出”蠶絲？ 2. 能否讓微生物產生人胰島素、干擾素等昂貴藥物？ 經過多年的努力，科學家于 20世紀70年代創(chuàng)立了可以定向改造生物DNA的技術 基因工程 基因工程的概念 將獲取的目的基因片段在體外與載體 DNA通過人工剪切、連接構成 DNA重組體，將其導入受體細胞并使之無性繁殖（稱之為“克隆”）和表達，這種有目的的應用分子克隆技術 ,人為的改造基因、改變生物的遺傳性狀的系列過程 ,總稱為基因工程。 基因工程別名 DNA重組技術 操作環(huán)境 生物體外 操作對象 基因 操作水平 DNA水平 基本過程 剪切 →拼接 →導入 →表達 結果 人類需要的基因產物 基
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