【正文】 器，即包含兩個(gè)光柵或兩個(gè)棱鏡，或一個(gè)棱鏡一個(gè)光柵，這樣可以減少雜散光，提高儀器的分辨能力。 較長(zhǎng)的光波偏折的角度大，較短的光波偏折角度小?？叹€處不透光，光只能在兩條刻線中間的平面處透過去。其光波由紫外線到長(zhǎng)波方向越來越密。 玻璃棱鏡只能用于可見光區(qū)；石英棱鏡或反射光柵可用于紫外、可見及近紅外光區(qū)。 （二）單色器 單色器是指能將不同波長(zhǎng)的入射光分散為單色光的裝置，主要由透鏡（聚焦作用）、輸入輸出狹縫（阻擋不需要的光）和 散射 裝置（把白色光散成不同波長(zhǎng)的光，是一種 分辨器 ）組成。 紫外光區(qū)用 氫弧燈或氘燈 ，其波長(zhǎng)在 180－375nm。見圖 6－ 1。 二、可見紫外分光光度計(jì) 分光光度法使用的儀器是分光光度計(jì)。 本章討論可見及紫外分光光度法，由于可見紫外吸收光譜是由電子躍遷產(chǎn)生的，因此波長(zhǎng)為 100－ 800nm的光線才有足夠的能量引起電子躍遷。 1cE h v h h c??＝ ＝ ＝ 可將電磁波波長(zhǎng)劃分為若干波段區(qū)域各波段能量不同，引起物質(zhì)運(yùn)動(dòng)的形式亦不同。單個(gè)光量子的能量與波長(zhǎng)的關(guān)系可用普朗克（ plank）公式表示 式中： E—— 能量； h—— 普朗克常量 從公式可見，光量子的波長(zhǎng)與其能量成反比，波長(zhǎng)愈長(zhǎng)，能量愈小。所謂微粒性，即指光是由光量子（或光子）的一種粒子組成。 式中： λ—— 波長(zhǎng) c—— 光速 v—— 頻率 σ—— 波數(shù)，為每厘米長(zhǎng)度中波的數(shù)目，即波長(zhǎng)的倒數(shù)，單位為1/cm。 （一）光的波動(dòng)性 光作為電磁波，具有波動(dòng)性的特征，可用波長(zhǎng)（ λ）、頻率（ v）及波數(shù)（ σ）來表示。 吸收光譜是由物質(zhì)吸收光能而產(chǎn)生?？梢娮贤夥止夤舛确? ? 一、 分光光度法的基本概念 ? 二、可見紫外分光光度計(jì) ? 三、分光光度法的基本定律 ? 四、分子結(jié)構(gòu)與電子光譜 ? 五、定 量 分 析 ? 六、在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用 一、分光光度法的基本概念 分光光度法是根據(jù)物質(zhì)對(duì)光具有選擇性的吸收特征而建立起來的一種分析方法，通常又稱吸收光譜法。吸收光譜是可見光譜、紫外光譜和紅外光譜的統(tǒng)稱。光具有波粒二重性，它既是電磁波又是輻射能。三者的關(guān)系可用以下表示。 cv?＝ cv ?＝ 1? ?＝（二）光的微粒性 —— 普朗克公式 光作為輻射能又具有微粒性的特征。光輻射的能量是一份一份的。 （三）可見紫外、紅外光區(qū)的劃分 根據(jù)電磁波具有波粒二重性的特點(diǎn)，可把自然界存在的各種電磁波按波長(zhǎng)順序排列成譜，稱為電磁波譜，如表 6－ 1所示。物質(zhì)吸收紫外光和可見光則引起分子中價(jià)電子的躍遷；物質(zhì)吸收紅外光則引起分子振動(dòng)，因此可見紫外光譜又稱為 電子光譜 ，紅外光譜又稱為分子振動(dòng)光譜 。 分為三個(gè)區(qū)域 : 100－ 200nm 遠(yuǎn)紫外區(qū) 200－ 400nm 近紫外區(qū) 400－ 800nm 可見光區(qū)域。分光光度計(jì)的種類很多，其儀器結(jié)構(gòu)的主要部件都是由光源、分光系統(tǒng)（ 單色器 ）、吸收池、檢測(cè)器和記錄儀所組成。 （一）光源 在可見紫外分光光度計(jì)上常用的光源是鎢絲燈和氫弧燈 (或氘燈 ) 可見光區(qū)用 鎢絲白熾燈 ，其波長(zhǎng)在 320－2500nm之間。 用氫燈或氘燈作為光源，燈管上必須裝有 石英窗 （因玻璃對(duì)紫外光有吸收）。散射器是單色器的核心，由棱鏡或衍射光柵組成。 棱鏡的色散原理 ：不同波長(zhǎng)的光在玻璃或石英中的折射率不同，波長(zhǎng)短的光折射率大，波長(zhǎng)長(zhǎng)的光折射率小，當(dāng)平行的混合光經(jīng)過棱鏡后，就會(huì)使不同波長(zhǎng)的光按次序偏折分開，而成光譜。 光柵的色散原理：光柵是在石英或玻璃表面上刻劃許多等距離的平行線，大約每 15000－ 30000條線。這些平面形成極微小的縫， 光透過小縫時(shí)即產(chǎn)生繞射現(xiàn)象。 從棱鏡或光柵射出的光經(jīng) 旋轉(zhuǎn)反射鏡 就可依次射出狹縫，經(jīng)聚焦后達(dá)到吸收池。 （三）吸收池 吸收池是用以盛裝樣品溶液進(jìn)行測(cè)定的容器。 池厚（內(nèi)徑）有 ， 1， 2cm等幾種，一般使用 1cm的，吸收池的光潔度對(duì)測(cè)定影響很大， 透明光學(xué)面不得用手指拿，不得用毛刷等硬物擦洗，通常用擦鏡紙擦洗 。 （四）檢測(cè)器 檢測(cè)器的功能是檢測(cè)光信號(hào)并將其轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)。 光電倍增管是當(dāng)前應(yīng)用最多的一種檢測(cè)器，它的作用是利用二次電子發(fā)射以放大光電流， 放大倍數(shù)可達(dá) 108倍 。 （五）測(cè)量信號(hào)指示系統(tǒng) 用光電倍增管作檢測(cè)器，需要將檢測(cè)器信號(hào)放大以后用記錄器記錄下來，不同型號(hào)分光光度計(jì)記錄裝置不同，目前許多由微處理機(jī)控制的紫外可見分光光度計(jì)，可自動(dòng)調(diào)零，自動(dòng)篩選波長(zhǎng)，自動(dòng)設(shè)置參數(shù)、掃描與計(jì)算均自動(dòng)完成，大大減少了人為誤差。定律具體內(nèi)容是：當(dāng)一束平行的單色光（ I0）射入具有 平行平面 的吸光介質(zhì)（溶液）時(shí)，一部分（ I）透過介質(zhì)（溶液），一部分光被介質(zhì)（溶液）所吸收。 比爾定律基本公式如下： 式中： A—— 吸光度（ absorbence） T—— 透光度（ transmittance）或稱透射率； I0—— 入射光強(qiáng)度； I—— 透過強(qiáng)度； L—— 光程長(zhǎng)度即樣品溶液的厚度（通常為吸收池的 厚度）； C—— 樣品溶液的濃度； K—— 。 ? ?a b s o r p tiv ityALC 吸 光 系 數(shù)0ITI?1lo g lo gA T K C LT? ? ? ? 在具體應(yīng)用時(shí)，被測(cè)溶液濃度可用 mol/L或百分濃度來表示。 E與 ε的關(guān)系如下： 式中： m—— 物質(zhì)的分子量 11cmE％11cm10Em??％ ＝11 c mE 0 .1 m? ?％＝ 測(cè)定 ε值得意義 (1) 根據(jù) ε值的大小，可以確定化合物吸光度的強(qiáng)弱， ε值＞ 104為強(qiáng)吸收， ε ＝ 103－ 104為較強(qiáng)吸收， ε ＝ 102－ 103為較弱吸收， ε ＜102為弱吸收。又如 n→σ* 及 π→π* 躍遷，所需能量相差不多，但二者中 π→π* 躍遷幾率較大，因此 ε值比 n→σ* 的大，約為 104，屬強(qiáng)吸收。 (4) 對(duì)同一化合物而言，在 不同波長(zhǎng)下具有不同的 ε值 ， 但在一定波長(zhǎng)下，它又是一個(gè)特征常數(shù) ，因此可作為有機(jī)化合物 定性 鑒定的參數(shù)之一。 （二）吸收曲線 吸收曲線又稱為光譜曲線或光吸收曲線，是指用 固定濃度及吸收池的厚度 ，在不同波長(zhǎng)下用分光光度計(jì)測(cè)得相應(yīng)的吸光度（ A），然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)作圖，所得的吸光度－波長(zhǎng)曲線，即為吸收曲線。 曲線的峰稱為吸收峰，它所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)，用 λmax表示。峰旁一個(gè)小的曲折稱為肩峰，在吸收曲線的波長(zhǎng)最短一端不成峰形的部分，稱為 末端吸收 。此外也可用百分透光度為縱坐標(biāo)，但應(yīng)用較少。從圖中看出， 同一物質(zhì)即使?jié)舛雀淖?，其吸收曲線形狀及最大吸收波