iywaaa生物技術(shù)制藥--展示頁
2024-08-19 09:38本頁面
【正文】 雜交瘤的獲得 ? 因免疫動物品系和骨髓瘤細胞在種系發(fā)生上距離越遠，產(chǎn)生的雜交瘤越不穩(wěn)定，故一般采用與骨髓瘤供體同一品系的動物進行免疫。 ? 通過克隆化選出最適當(dāng)?shù)膯慰寺】贵w。 ? 化學(xué)合成抗原，如精制的地高辛。制備的一般流程見下圖。由于這種抗體是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的 B淋巴細胞克隆產(chǎn)生的，因此稱為單克隆抗體?；鞠藛慰寺】贵w的鼠源性，相對分子質(zhì)量只有完整抗體分子的 1/80~1/3，而且鼠源性單克隆抗體的生物學(xué)活性如激活補體、促進吞噬功能（免疫調(diào)理）、抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒作用等，只保留同抗原特異性結(jié)合的活性。 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 基因工程技術(shù)為解決這兩個問題提供了可能。 ? 單克隆抗體還可作為載體制備導(dǎo)向藥物。 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測與某些疾病相關(guān)的抗原，輔助臨床診斷，或用放射性核素標記 單克隆抗體進行腫瘤顯像，進行免疫鑒定。hler和 Milstein等，單克隆抗體，其具有高度特異性、均一性，以及來源穩(wěn)定可大量生產(chǎn)等特點。 ? 20世紀 60年代初期：抗原決定簇，精制單價血清。生物技術(shù)制藥 第四章 抗體制藥 第四章 抗體制藥 ? 第一節(jié) 概述 ? 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 第三節(jié) 鼠源性單克隆抗體的改造 ? 第四節(jié) 基因工程抗體和抗體工程 ? 第五節(jié) 抗體診斷試劑 ? 第六節(jié) 抗體治療藥物 第一節(jié) 概述 ? 1890年： Behring和北里柴三郎等發(fā)現(xiàn)了白喉抗毒素，并建立了血清療法，開抗體制藥之先河。 ? 1937年： Tiselius等人用電泳法將血清蛋白分為白蛋白、甲種（ ?）球蛋白、乙種（ ? ）球蛋白和丙種（ ? ）球蛋白，并證明抗體活性主要存在于丙種球蛋白組分。 ? 1975年： K246。 ? 1984年：人 鼠嵌合抗體 ? 1984年至今：單克隆抗體的鼠源性及分子過大的問題得以解決，可僅作為與抗原特異性結(jié)合試劑。用于臨床治療，如針對 T淋巴細胞共有的分化抗原 CD3的單克隆抗體，用作免疫抑制劑。但是要解決以下兩個問題 ：（ 1）鼠源性單克隆抗體的免疫原性；（ 2）完整的抗體分子分子量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達不到有效的治療濃度。 ? 已通過基因工程技術(shù)，制備出改形抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識別單位等很多類型的抗體或抗體單位。 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 單克隆抗體是將抗體產(chǎn)生細胞與骨髓瘤細胞融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純一的單克隆細胞系而生產(chǎn)的。它是結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純度抗體。 單克隆抗體和 多克隆抗體的制備 抗原 脾 B淋巴細胞 融合 融合 淋巴細胞 骨髓瘤細胞 克隆 1 克隆 2 克隆 3 克隆 4 第二節(jié) 單克隆抗體 ? 一、抗原與動物免疫 ? 二、細胞融合與雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng) ? 三、篩選陽性克隆與克隆化 ? 四、雜交瘤細胞與抗體性狀的鑒定 ? 五、單克隆抗體的大量制備 ? 六、單克隆抗體的純化 一、抗原與動物免疫 ? （ 1）制備用于動物免疫的適當(dāng)抗原。 ? 多數(shù)情況下抗原物質(zhì)只能得到部分純化，甚至是極不純的混合物，如部分純化的干擾素。 ? 在制備惡性腫瘤細胞表面抗原的單克隆抗體時，情況較復(fù)雜，需用整個腫瘤細胞做為免疫原，經(jīng)過篩選、克隆化，制備出僅存在于腫瘤細胞而不存在于正常細胞上的表面標志分子上的單克隆抗體。目前常用的骨髓瘤細胞系多來自 BALB/c小鼠和 Lou大鼠，因此免疫動物也多采用相應(yīng)的品系，最常用的也是BALB/c小鼠。不同品系的小鼠與大鼠在對某類抗原的免疫應(yīng)答上是不同的。 一、抗原與動物免疫 ? （ 3）免疫方法：體內(nèi)免疫法和體外免疫法 ? 體內(nèi)免疫法：適用于免疫原性強、抗原量較多時應(yīng)用，一般用 8~12周齡的雌性鼠。一般在采集脾細胞前 3日由靜脈注射最后一次抗原，其目的是使對應(yīng)的 B淋巴細胞克隆受到可靠的最大限度的刺激，使其迅速地增殖分裂，因為細胞融合后增殖最好的細胞是迅速分裂的細胞。 一、抗原與動物免疫 ? （ 3）免疫方法：體內(nèi)免疫法和體外免疫法 ? 體外免疫法：用于不能采用體內(nèi)免疫法的情況下，如制備人源性單克隆抗體，或者抗原的免疫原性極弱且能引起免疫抑制時使用。其基本方法是用 4~8周齡 BALB/c小鼠的脾臟制成單個細胞懸液，再加入適當(dāng)抗原使其濃度達 ~5 ?g/ml， 在 5%CO37℃ 下培養(yǎng) 4~5天，再分離脾臟細胞，進行細胞融合。 ? （ 2）用于融合的骨髓瘤細胞應(yīng)具備條件：融合率高，自身不分泌抗體，所產(chǎn)生的雜交瘤細胞分泌抗體的能力強且長期穩(wěn)定等特點。特別是 SP2/0細胞系還具有容易培養(yǎng)、融合率高
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