【正文】 源DNA分子可以插入原核細胞DNA復制體系的特定區(qū)段：基因克隆載體是一類能夠承載外源基因并將其帶入受體細胞得以穩(wěn)定維持的DNA分子。 載體：是基因工程的目的和基本手段，是選用合適的載體把供體DNA（外源基因）運載到受體細胞內，從而復制擴增大量的目的DNA分子或轉錄表達為相應的產(chǎn)物。表達產(chǎn)物穩(wěn)定。：。⒊費用高。： ⒈不能合成太長的基因 目前 DNA 合成儀所合成的寡核苷酸片段僅為 50～60 bp，因此只適用于克隆小分子肽的基因。再按相應的密碼子推導出DNA的核甘酸序列。⒈ mRNA的純化⒉ cDNA第一鏈的合成⒊ cDNA第二鏈的合成⒋ cDNA的克隆⒌ 將重組體導入宿主細胞：⒍ cDNA文庫的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法⒎ 目的cDNA克隆的分離和鑒定：核酸探針雜交法、免疫反應鑒定法②化學合成法 ：較小的蛋白質或多肽的編碼基因可以用化學合成法合成。（步驟）⒈目的基因的克?、矘嫿―AN重組體⒊DAN重組體轉入宿主菌⒋構建工程菌⒌工程菌發(fā)酵⒍表達產(chǎn)物的分離純化⒎產(chǎn)品的檢驗等基因工程藥物制藥的主要程序獲得目的基因→組建重組質?！鷺嫿üこ叹ɑ蚣毎囵B(yǎng)工程菌 →產(chǎn)物分離純化→除菌過濾→半成品檢定→成品檢定→包裝 克隆真核基因常用方法：逆轉錄法和化學合成法。 ，存在不足之處，可以通過基因工程和蛋白質工程進行改造。 ，以便對其生理、生化和結構進行深入的研究，從而擴大這些物質的應用范圍。④酶類，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶原激活劑及超氧化物岐化酶等。②細胞因子，如各種干擾素、白細胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子及凝血因子。：以mRNA為模板,tRNA作為運載工具,將活化的氨基酸在核糖體上合成蛋白質的過程。 基因按功能分為：①結構基因 ②調控基因 DNA的結構與性能⒈DNA的結構：四種核苷酸（A T C G）連接一級結構、DNA二級結構（α，β），雙螺旋結構。 概念:DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質的最小功能單位。對于許多傳染性疾病來說，預防比治療更重要。3新型生物反應器有:、包括基因治療藥、基因疫苗、反義藥物、植物、 按照醫(yī)學用途分類：，治療疾病是生物藥物的主要功能。⑨蛋白質工程是基因工程的發(fā)展，它將分子生物學、結構生物學、計算機技術結合起來，形成一門高度綜合的學科。⑤轉基因植物和動物取得重大突破⑥現(xiàn)代生物技術在農業(yè)上的廣泛應用將給農業(yè)和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來新的飛躍。③基因工程藥物和疫苗的研究和開發(fā)突發(fā)猛進。1. 現(xiàn)代生物技術包括?2. 現(xiàn)代生物技術的發(fā)展趨勢?3. 新型生物反應器?4. 生物技術藥物分類5. 生物技術藥物的特點6. 生物技術在制藥中的應用7. 基因的概念與特性8. DNA的復制與表達9. 基因工程制藥 醫(yī)用活性蛋白和多肽類10. 基因工程技術生產(chǎn)藥品的優(yōu)點11. 基因工程藥物生產(chǎn)的過程12. 目的基因的獲得、克隆真核基因常用方法13. 人工化學合成基因的限制14. 基因篩選的新方法、對已發(fā)現(xiàn)基因的改造15. 最佳的基因表達體系16. 適合目的基因表達的宿主細胞應滿足哪些要求17. 大腸桿菌中的基因表達18. 原核細胞的基因組特點19. 基因克隆載體的定義、特點20. 質粒的分類21. 真核基因在原核細胞中表達載體必須具備條件22. 影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素23. 基因工程菌生長代謝的特點（菌體的生長與能量、前體供應的關系）24. 基因工程菌的不穩(wěn)定性（質粒、分裂、結構不穩(wěn)定）、其主要機制25. 常見分裂不穩(wěn)定的兩個因素、提高質粒穩(wěn)定性的方法26. 基因工程菌的培養(yǎng)方式27. 影響發(fā)酵的因素有28. 高密度發(fā)酵特點、影響因素29. 實現(xiàn)高密度發(fā)酵的方法30. 基因工程藥物的分離純化31. 分離純化的方法、基本原理32. 分離純化工藝應遵循的原則33. 基因工程藥物的質量控制、保存34. 動物細胞的形態(tài)、生理特點35. 動物細胞來源的藥物的種類36. 動物細胞的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基37. 動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法、特點、培養(yǎng)方式38. 動物細胞生物反應器的類型、理想反應器的基本要求39. 動物細胞產(chǎn)品純化方法、動物細胞制藥的前景40. 單克隆抗體及其制備41. 基因工程抗體及其制備42. 噬菌體抗體庫技術的基本方法、特點43. 基因工程抗體表達44. 抗體診斷試劑的類型45. 抗體治療藥物的種類46. 植物組織和器官的培養(yǎng)47. 次級代謝產(chǎn)物特點、作用48. 植物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基的組成、固定化反應器49. 影響植物次級代謝產(chǎn)物生產(chǎn)和累積的因素50. 植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)生物反應器的類型、性能比較51. 植物細胞固定化培養(yǎng)優(yōu)缺點52. 植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)程序53. 植物生物反應器選擇標準54. 植物細胞制藥的進展與展望55. 酶的特點、來源56. 酶工程的研究內容57. 利用微生物生產(chǎn)酶制劑的優(yōu)點58. 固定化酶的特點59. 酶和細胞固定化方法與制備技術60. 固定化細胞的特點61. 固定化細胞反應器的類型和特點62. 模擬酶的的概念及分類63. 酶的化學修飾的目的和意義64. 酶化學修飾的方法65. 修飾酶的特性66. 酶化學修飾的應用及其局限性67. 酶的化學修飾的前景68. 有機相酶反應的優(yōu)點、有機溶劑、影響69. 酶工程優(yōu)點70. 發(fā)酵工程的研究內容71. 優(yōu)良菌種的選育72. 誘變育種的方法和原理73. 營養(yǎng)缺陷型的作用74. 發(fā)酵類型、特點75. 發(fā)酵工藝控制76. 細胞破碎的方法及其優(yōu)缺點77. 理想的微生物細胞生物反應器基本要求78. 基因工程在發(fā)酵工程中的應用79. 基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種主要表現(xiàn)形式是什么? 主要機制是什么 ?15 / 1580. 在人胰島素AB鏈分別表達法中,為何將AB鏈編碼序列與b半乳糖苷酶基因融合？81. 闡述基因工程藥物研制有那些主要過程？82. 對鼠源性單克隆抗體進行改造的目的是什么？鼠源性單克隆抗體改造后的小分子抗體類型？83. 抗體治療藥物有哪些？:⑴重組DNA技術⑵細胞和原生質體融合技術⑶酶和細胞的固定化技術⑷植物脫毒和快速繁殖技術⑸動物和植物細胞的大量培養(yǎng)技術⑹動物胚胎工程技術⑺現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術⑻現(xiàn)代生物反應工程和分離工程技術⑼蛋白質工程技術⑽海洋生物技術2．現(xiàn)代生物技術的發(fā)展趨勢主要體現(xiàn)在下列幾個方面：①基因操作技術日新月異，不斷完善。②新技術、新方法一經(jīng)產(chǎn)生便迅速地通過商業(yè)渠道出售專項技術，并在市場上加以應用。④新的生物治療制劑的產(chǎn)業(yè)化前景十分光明，21世紀整個醫(yī)藥工業(yè)將面臨全面的更新改造。⑦闡明生物體基因組及其編碼蛋白質的結構與功能是當今生命科學發(fā)展的一個主流方向，⑧基因治療取得重大進展，有可能革新整個疾病的預防和治療領域。⑩信息技術的飛躍發(fā)展?jié)B透到生命科學領域中，形成形成引人注目、用途廣泛的生物信息學。具有速度快、靈敏度高、特異性強的特點。 ，（1）基因工程藥物品種的開發(fā)；（2）基因工程疫苗；（3）基因工程抗體；（4）基因診斷與基因治療；（5）應用基因工程技術建立新藥的篩選模型；（6）應用基因工程技術改良菌種，產(chǎn)生新的微生物藥物；（7）基因工程技術在改進藥物生產(chǎn)工藝中的應用；（8）利用轉基因動、植物生產(chǎn)蛋白質類藥物。特性：①基因可自我復制，②基因決定蛋白質結構，③基因可突變。⒉DNA的性質與功能:①吸收光譜260②電場中泳動③變性、復性、雜交 基因表達⒈轉錄：在RNA聚合酶的催化下以DNA為模板合成mRNA的過程。(1)分為三個階段：①起始②延長③終止(2)翻譯后的肽鏈加工:①羥基化②糖基化③磷酸化④乙?；? 醫(yī)用活性蛋白和多肽類包括：①免役性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體。③激素，如胰島素、生長激素、心鈉素。（如胰島素、干擾素、細胞因子等），為臨床使用建立有效的保障。 。 ，擴大藥物篩選來源。①逆轉錄法 ：逆轉錄法就是先分離純化目的基因的 mRNA，再反轉錄成 cDNA，然后進行 cDNA 的克隆表達。必須知道目的基因的核苷酸順序或目的蛋白質的氨基酸順序。用化學法合成目的基因DNA不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘性末端的DNA雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進行退火使連接成較長的DNA片段，再用連接酶連接成完整的基因。⒉遺傳密碼的簡并使選擇密碼子困難，用氨基酸順序推測核苷酸序列，得到的結果可能與天然基因不完全一致，易造成中性突變。 對已發(fā)現(xiàn)基因的改造應用基因修飾技術和點突變技術提高目的基因表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性、t1/提高表達量，降低毒性或免疫原性。目的基因的表達產(chǎn)量高。生物活性高和表達產(chǎn)物容易分離純化 適合目的基因表達的宿主細胞應滿足以下要求:；；、不產(chǎn)生內毒素；、需氧低、適當?shù)陌l(fā)酵溫度和細胞形態(tài)；5容易進行代謝調控；；、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取純化。 基因工程載體分為：克隆載體,轉錄載體,表達載體。2）目前經(jīng)常使用的載體，有質粒和病毒兩類。 特點：①具有復制子②有單一限制內切酶切位點或多克隆位點③有選擇性遺傳標記如抗藥基因④拷貝數(shù)高⑤生物安全性好 ⒈按復制型式①嚴緊型 ②松弛型 ⒉按基因轉移性①傳遞性質粒 ②非傳遞性質粒 ⒊按遺傳性狀產(chǎn)物分類:①抗生素抗性