第十八章基因診斷與基因治療genediagnosis-展示頁(yè)
2025-08-10 13:28本頁(yè)面
【正文】 → 檢測(cè)信號(hào)。 9 液相雜交 待測(cè)核酸樣本與特異性探針同時(shí)溶于雜交液中進(jìn)行雜交反應(yīng)； 固相雜交 待測(cè)核酸樣本先結(jié)合到固相支持物上，再與溶液中的特異性探針進(jìn)行雜交反應(yīng) 。 核酸探針 是指帶有標(biāo)記的、并已知堿基序列的 DNA或 RNA片段，能與待測(cè)樣本中單鏈核酸分子互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，進(jìn)而檢測(cè)同源序列。 變性： 升高溫度至 94℃ 左右 ，使核酸雙鏈解開(kāi)為兩條單鏈； 復(fù)性： 緩慢降低溫度（ 52℃ 左右 ），變性的兩條單鏈重新形成互 補(bǔ)雙鏈。 基本原理： 堿基互補(bǔ)、變性和復(fù)性 DNA與 DNA雜交： A=T、 G≡C 。 第十八章 基因診斷與基因治療 (gene diagnosis and therapy) 2 本章主要內(nèi)容 基因診斷 基因治療 3 一 . 基因診斷概念 利用分子生物學(xué)方法， 直接檢測(cè)基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否異常 ，從而對(duì)疾病作出診斷 ,為治療提供依據(jù)。 第一節(jié) 基 因 診 斷 4 二 . 基因診斷 特點(diǎn) ： 針對(duì)性強(qiáng)，特異性高 檢測(cè)靈敏度和精確性高 實(shí)用性強(qiáng)，診斷范圍廣 5 三 . 基因診斷常用技術(shù)方法 核酸分子雜交技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù) 生物芯片 基因測(cè)序 6 （一）核酸分子雜交技術(shù) 核酸分子雜交 是指一條單鏈核酸分子（ DNA或 RNA）通過(guò)堿基互補(bǔ)與另一條單鏈核酸分子形成穩(wěn)定雙鏈的過(guò)程。 DNA與 RNA雜交 : A=U、 G≡C 。 堿基互補(bǔ) 7 hybridization ? DNA:DNA 5’ A T G C C G A T 3’ T A C G G C DNA:RNA 5’ A T G C G T A 3’ U A C G C A U RNA:RNA 5’ A U G C U A C G 3’ U A C G A U G C 8 利用核酸雙鏈的 堿基互補(bǔ)、變性和復(fù)性的 原理，可以 用已知堿基序列的單鏈核酸片段 作為 探針 ，與待測(cè)樣本中的單鏈核酸互補(bǔ)配對(duì)，以判斷有無(wú)互補(bǔ)的同源核酸序列的存在。 探針標(biāo)記物 有 放射性核素 或 非放射性核素 （生物素、地高辛、熒光素等）兩大類。 常用固相雜交支持物： 硝酸纖維素膜、尼龍膜等－－－ 10 （固相雜交）操作程序 制備待測(cè)核酸樣品 分離、變性、轉(zhuǎn)移、固化 DNA片段 雜交 加入標(biāo)記核酸探針 檢測(cè)雜交信號(hào) 標(biāo)記核酸探針 預(yù)雜交 制備核酸探針 漂洗去除未參與雜交的標(biāo)記探針 11 3. 常用固相核酸雜交方法 Southern 印跡雜交法 （ Southern blotting ） Northern 印跡雜交法 （ Northern blotting ） 斑點(diǎn)雜交或狹縫雜交法 （ Spot/ Slot blot hybridization） 菌落雜交 （ colony hybridization） 夾心雜交法 （ sandwich hybridization） 原位雜交 （ hybridization in situ） 12 (1) Southern 印跡雜交法 限制性內(nèi)切酶酶切 檢測(cè)雜交信號(hào) 提取 DNA Southern 法可用于 檢測(cè)特異的 DNA序列片段 ,進(jìn)行基因定位、分子量測(cè)定等。 Northern法可用于檢測(cè)組織細(xì)胞中總 RNA或 mRNA 14 （ 3）斑點(diǎn)雜交或狹縫雜交法
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