【正文】 聲波容器中，用超聲波振蕩1015min，此法效果最差。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。流動(dòng)相使用前為什幺要脫氣？ 毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn): 柔韌性好. ***Agilent 公司同時(shí)備有1/16in 的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶 ,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。毛細(xì)管線分類： 綠色 。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為什幺Agilent 1100LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)?以23滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。 清洗液配制:在線Sealwash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。為什幺HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線Sealwash選項(xiàng)？尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。3mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過濾。處理樣品體積少于50μl。儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。 溶劑和樣品過濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。帶sealwash的 1100，要配制90%水+10%異丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，溶劑不能干涸。Agilent1100高壓液相色譜儀維護(hù)保養(yǎng)知識(shí)保養(yǎng)事項(xiàng)：色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如ACN適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相）對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。 退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗] ● (3)、單擊Ok. Results”框中Calculate右側(cè)的黑三角，選中Percent（面積百分比），其它選項(xiàng)不變。 打印報(bào)告: (4)、單擊左邊“√”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。(3)、如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。 Events”選項(xiàng)，選擇合適的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 積分: 反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。 做譜圖優(yōu)化,從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)。單擊Ok。（三）、數(shù)據(jù)分析方法編輯: 1等儀器Ready，基線平穩(wěn)，從Method菜單中選擇“Run method”，進(jìn)樣。Prefix—在Prefix 框中輸入前綴，在Counter 框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd0001，vwd0002……。 區(qū)別: control ”菜單中選擇“Sample info”選項(xiàng)，如上圖所示，輸入操作者名稱，在“Data file ”中選擇“Manual”或“Prefix”。 ● Multi Em：多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射）。 ● “Peak width”：大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值。大多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為10,若高濃度樣品峰被切平頭,則減少 PMT 值。 ●發(fā)射波長(zhǎng): 280900nm, 步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。 Emission: ● 停止時(shí)間： 出峰完畢。 響應(yīng)時(shí)間=4s. EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 柱溫箱: ● 用甲醇稀釋為1:10。 FLD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: Control ：Heater 設(shè)為On，若要循環(huán)流動(dòng)相，必須將“Recycling Valve”設(shè)為ON。 “Automatic recycling after analysis”在不進(jìn)行分析時(shí)可以讓流動(dòng)相循環(huán)，節(jié)省流動(dòng)相，檢測(cè)器連續(xù)運(yùn)行，可隨時(shí)投入使用。 若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀?！瘛癘ptical Unit Temperature”若環(huán)境溫度控制在177。 。 峰寬(響應(yīng)時(shí)間) : Off 。選中所用的燈。Slit—狹縫窄，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。參比帶寬BW：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。樣品帶寬BW： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。 ，波長(zhǎng)=300nm。 在”Peak width (Response time)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如 ●點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。 柱溫箱參數(shù)設(shè)定: ●點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面?！癐njection with Needle Wash”可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針?！襁x擇合適的進(jìn)樣方式, 進(jìn)樣體積 ,洗瓶位置為6號(hào)。 ● ●在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“Solvent B”,(A=100B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,編輯梯度。 ●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 方法信息：analysis ”外的三項(xiàng)，單擊Ok，進(jìn)入下一畫面。（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯：?jiǎn)螕鬙k。 1單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 valve。 單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump control選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換信道繼續(xù)Purge，直到所有要用信道無氣泡為止。 單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。 打開 1100 LC 各模塊電源。HPLC系統(tǒng)SOPWaters高效液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程高效液相色譜儀(Agilent 1100)操作注意事項(xiàng)色譜掃盲班Agilent1100高壓液相色譜儀基本操作步驟Agilent1100液相基本操作步驟(一)、開機(jī)：高效液相色譜知識(shí)收藏Agilent1100高壓液相色譜儀基本操作步驟Agilent1100液相基本操作步驟Agilent1100高壓液相色譜儀維護(hù)保養(yǎng)知識(shí)保養(yǎng)事項(xiàng)：高壓液相色譜HPLC常見故障及排除方法液相色譜柱使用及保養(yǎng)高壓液相色譜HPLC培訓(xùn)教程(一)高壓液相色譜HPLC培訓(xùn)教程(七)高效液相色譜儀中反相HPLC柱子的清潔和再生HPLC對(duì)流動(dòng)相的基本要求高 效 液 相 色 譜Waters600E2487 打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT （或Windows 2000）畫面,并運(yùn)行Bootp Server程序。 待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1100LC通訊，進(jìn)入的工作站畫面。 從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。 打開Purge閥。 8 、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。 單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump Control選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵， 關(guān)閉Purge 1單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫面，設(shè)Flow：。也可輸入停泵的體積。 開始編輯完整方法： ●從“Method”菜單中選擇“Edit entire method” 項(xiàng)，如上圖所示選中除“Data ●單擊Ok 進(jìn)入下一畫面。 泵參數(shù)設(shè)定：（以二元泵為例）在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。 單擊Ok進(jìn)入下一畫面。 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:“Standard Injection”只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能?！癠se injector program”可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。 ●在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more” 鍵,如圖所示,選中”Same as left”使柱溫箱的溫度左右一致。 VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ●在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),如254nm, (2s)。●在Timetable 中可以“Insert”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)，如1min點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。 DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ●檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm,BW=30nm, 參比波長(zhǎng)=350nm,BW=100nm。 ●檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無吸收或低吸收區(qū)域。Peak width（Response time）：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。 ●點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面。RID檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ●色譜條件: 進(jìn)樣體積: 20ul 。 光學(xué)單元溫度: 極性: 正 。 4s2℃,設(shè)定為Off,“Peak width”大多數(shù)分析設(shè)為4S，只有在高速分析下設(shè)為更短?！顸c(diǎn)擊RID圖標(biāo)，選擇RID手動(dòng)purge 參比池，將其設(shè)為On，并輸入Purge 時(shí)間。 色譜條件： ● 樣品：P/N 0101868704 進(jìn)樣體積：5ul。 ● 30℃ ?！?Excitation A: 激發(fā)波長(zhǎng):200700nm,步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。 ● PMT:● Multi Ex ： 多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)）。 ● 同時(shí)可以輸入范圍Range、步長(zhǎng)step、采集光譜。 在“ Run time checklist ”中選中“Data acquisition”，單擊Ok。 1單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名，如“test”，單擊Ok。 1從菜單 “View”中選中”O(jiān)nline signal” ,選中Windows 1,然后單擊Change 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊Ok.(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)12,選中Windows 2)。 1從“RunManual每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋。 1從Instrument 菜單選擇System on。 從“View”菜單中，單擊“Data analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。 從“File”菜單選擇“Load signal”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。從Ranges中選擇Auto scale及合適的顯示時(shí)間，單擊ok,或選擇”Use Ranges” 調(diào)整。 (1)、從“Integration”中選擇 “Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇“Integration(2)、從“Integration”菜單中選擇“Integrate”選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。 (1)、從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng)，進(jìn)入如上畫面。 (2)、單擊“Quantitative (4)、從“Report”菜單中選擇“Print report”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則單擊Report 底部的“Print”鈕。(四)、關(guān)機(jī): 關(guān)機(jī)前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如ACN），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。 ●關(guān)掉Agilent 1100電源開關(guān)。流動(dòng)相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌）。其它主意事項(xiàng)見說明書，或由現(xiàn)場(chǎng)工程師介紹。維護(hù)知識(shí)問答為什幺溶劑和樣品要過濾?色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。樣品過濾頭的類型：30mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過濾，,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過濾，,材料為纖維素。處理樣品體積為7μl。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。 HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。,必須使用該在線沖洗選項(xiàng). 90%水+10%。 在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢12個(gè)數(shù)量級(jí)。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent 1100LC 使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動(dòng)相管路。 PEEK 管線：內(nèi)徑 。 流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。常用的脫氣方法比較：