大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)-展示頁(yè)
2025-06-04 06:24本頁(yè)面
【正文】 dividing E. coli 原核或噬菌體啟動(dòng)子 MCS SD序列 終止子 ① 必須是一種強(qiáng)啟動(dòng)子 ② 應(yīng)呈現(xiàn)低水平的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄 ③ 應(yīng)是可誘導(dǎo)型的 用溫度或化學(xué)試劑誘導(dǎo)。 3. 不能直接用真核基因組 DNA。 一、原核表達(dá)系統(tǒng)的注意事項(xiàng) 1. 外源基因不能帶有內(nèi)含子。第八章 大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng) 克隆基因的表達(dá)： 外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。 外源基因 表達(dá)載體 重組載體 導(dǎo)入宿主細(xì)胞 在宿主細(xì)胞中 表達(dá)出蛋白質(zhì) 提取蛋白 宿主細(xì)胞： 原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。 2. 必須用 cDNA或者是化學(xué)合成的基因。 4. 必須利用原核細(xì)胞的調(diào)控原件（啟動(dòng)子等） 5. 防止外源基因產(chǎn)物對(duì)宿主細(xì)胞的毒害。 （ 1）最佳啟動(dòng)子必須具備的條件 基因工程常用的原核啟動(dòng)子 Plac O 目的基因 乳糖啟動(dòng)子 lac 色氨酸啟動(dòng)子 trp P1 O trpE 目的基因 cI857: 噬菌體啟動(dòng)子是 PL 42oC時(shí)阻遏蛋白失活，外源基因大量轉(zhuǎn)錄 cI857 PL 外源基因 28oC時(shí)阻遏 PL，外源基因不轉(zhuǎn)錄。 形成原理未知。 ② 缺點(diǎn) ① 優(yōu)點(diǎn) 2. 周質(zhì)中表達(dá) （ 1）周質(zhì)（ periplasm） 格蘭氏陰性大腸桿菌位于內(nèi)膜和外膜之間的細(xì)胞結(jié)構(gòu)部分。 phoA、 OmpA、 OmpT、 OmpF、LamB、 β內(nèi)酰胺酶（ lactamase） （ 3）常用的原核信號(hào)肽 ① 大腸桿菌的信號(hào)肽： 能帶領(lǐng)蛋白穿過(guò)膜到達(dá)周質(zhì)。 （ 2）信號(hào)肽（ signal peptide） 一般位于 N端。 鼠源 RNase、人生長(zhǎng)激素信號(hào)肽。 （ 2） 真核信號(hào)肽 用溶血素（ hemolysin）基因構(gòu)建分泌性融合蛋白； 使表達(dá)的外源蛋白 分泌到細(xì)胞外 的培養(yǎng)基中。 載體表達(dá)出的外源基因蛋白質(zhì)不與細(xì)菌的任何蛋白質(zhì)融合在一起。 容易被宿主菌的蛋白酶所破壞。表達(dá)能力強(qiáng)。 tac P Lac O SD 插入位點(diǎn)區(qū)
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